MICROSCÓPIO ÓPTICO

Prévia do material em texto

MICROSCÓPIO ÓPTICO 
1- Ocular
2- Objetivas e revólver
3- Platina
4- Charriot
5- Macrométrico
6- Micrométrico
7- Diafragma no condensador
8- Condensador
9- Parafuso da altura do condensador
10- Dois parafusos centralizadores do condensador
11- Fonte de luz
12- Controle de iluminação
13- Diafragma de campo (alavanca no lado esquerdo do microscópico)
14- Dois parafusos de ajuste do filamento da lâmpada (esquerdo e direito)
 
 
 
Unidades Utilizadas em Microscopia
1 mm               =                     0,001 mm
(micrômetro)                          (milímetro)
 
1 nm               =                     0,001 mm
(nanômetro)                           (micrômetro)
 
Resolução = número de pontos por área, necessita de pelo menos 3 fileiras de células
Olho Humano»1 minuto de arco (de grau) ou 0,07mm a 25 cm de distância.
Microscópio de Luz » 0,2 mm, podendo ser aumentado pelo uso de outras técnicas como vídeo, luz polarizada, imunofluorescência, microscopia confocal, etc...Na prática, não utilizar aumentos superiores a 1.000 Xs.
 
 
MICROSCOPIA DE CONTRASTE DE FASE, DE CONTRASTE DIFERENCIAL DE INTERFERÊNCIA e DE POLARIZAÇÃO
Alguns sistemas ópticos possibilitam a observação de células não coradas. A microscopia de contraste de fase usa um sistema de lentes que produz imagens visíveis de objetos translúcidos. Ela  é baseada na alteração da velocidade dos raios luminosos ao atravessar estruturas celulares e extracelulares que tenham índices de refração diferentes. Assim essas alterações são usadas pelo sistema de contraste de fase para fazer com que as estruturas apareçam mais claras ou mais escuras permitindo se observar células vivas.
A microscopia de contraste diferencial (Nomarski), que permite a observação de uma imagem em relevo é realizada por iluminação oblíqua.
E a microscopia de polarização ocorre quando raios de luz passam através de um filtro polarizador, direcionando-os em uma só direção sofrendo alterações de um segundo filtro colocado com seu eixo principal perpendicular ao primeiro filtro que bloqueará a passagem da luz. Quando o tecido possuir estruturas orientadas (ex. colágeno) for colocado entre os dois filtros, a estrutura repetitiva e orientada modifica o plano de vibração da luz que emerge do primeiro filtro, assim estas estruturas se tornam  luminosas contra um fundo escuro após passarem pelo segundo filtro. Essa capacidade de alteração do plano de vibração da luz polarizada é chamada birrefringência.
 
 
PROTOCOLO PARA USO DO MICROSCÓPIO DE LUZ
 
 
Para o uso adequado do microscópio deve-se torma cuidados, abaixo seguem as etapas para o uso correto do equipamento, utilizando-se um pedaço de jornal com uma "pequena letra". O equipamento deve estar posicionado em uma bancada com a objetiva de menor aumento na posição de observação.
Método:
1-     Recortar uma letra pequena de jornal;
2-     Colocar uma gota de água sobre a lâmina, com auxílio de um conta-gotas ou pipeta;
3-     Colocar a letra de jornal (na posição de leitura) sobre a gota de água;
4-     Colocar a lamínula em posição de 45°, com relação à lâmina, para evitar a formação de bolhas de ar;
5-     Caso haja excesso de líquido, retirar com papel absorvente, para manter a lamínula fixa;
6-     Seguir as etapas de focalização do material em estudo;
 
Focalização da letra de jornal
a-     colocar a lâmina pronta (com a lamínula voltada para cima) sobre a platina do microscópio, e fixá-la com a pinça;
b-     centralizar a letra do jornal sobre o orifício na platina, utilizando o charriot;
c-      iniciar a observação do material com a objetiva de menor aumento, 4X.
d-     levantar a platina na altura máxima, girando o parafuso macrométrico;
e-     ligar o microscópio e verificar se a luz atravessa o orifício na platina, caso contrário abrir o diafragma-íris;
f-        olhar através das oculares e abaixar lentamente a platina, com o parafuso macrométrico, até que a letra do jornal apareça focalizada;
g-     proceder a focalização final com ajustes no parafuso micrométrico;
h-      ajustar a distância inter-pupilar, segurando nas bordas laterais da parte deslizante no tubo, obtendo-se assim, um único campo visual;
i-        regule o feixe luminoso, utilizando os controles de variação da intensidade de luz e o diafragma-íris que melhoram a nitidez da imagem;
j-        analisar todo o material preparado, movimentando a lâmina com o charriot e escolher um campo de interesse para os esquemas a serem realizados;
k-      transferir para a objetiva de 10X, gorando o revolver. Novamente ajustar o foco da imagem, com os parafusos macrométrico e micrométrico, e regular o feixe luminoso, se necessário.
l-        Transferir para a objetiva de 40X, ajustar o foco da imagem utilizando somente o parafuso micrométrico, e novamente regule o feixe luminoso, se necessário;
m-   Analisar a letra de jornal na objetiva de imersão, 100X. Neste caso, deslocar a objetiva até a metade da distância entre esta objetiva e a de 100X. Pingar uma gota de óleo de imersão sobre a lamínula e encaixar a objetiva de 100X. Ajustar delicadamente o foco da imagem utilizando o parafuso micrométrico, e regule o feixe luminoso.
7-     Esquematizar a letra, a olho nu e em cada aumento analisado;
8-     Ao terminar as observações proceder a retirada do material analisado;
a-     desligar a luz do microscópio;
b-     transferir para a objetiva de menor aumento;
c-      abaixar a platina para retirar a lâmina;
d-     limpar a objetiva de imersão com um lenço de papel ou gaze, umedecida com pequena quantidade de solução de álcool;
e-     retirar o fio do microscópio da tomada e colocar sobre a mesa.