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UNIVERSIDADE FEDERAL DA PARAÍBA CENTRO DE TECNOLOGIA DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA DE ALIMENTOS CURSO DE GRADUAÇÃO EM ENGENHARIA DE ALIMENTOS DISCIPLINA: ANÁLISE DE ALIMENTOS II Profa. Marta Suely Madruga e Leila Moreira de Carvalho Aluna: Erlyvânia Débora Henrique de Oliveira Matrícula: 11325671 LISTA DE EXERCÍCIOS – ELETROFORESE QUESTÃO 1: A análise de proteínas através da eletroforese é um procedimento de rotina em laboratórios de análises químicas de alimentos. Dados os fatores que influenciam a migração de proteínas/peptídeos através do gel de poliacrilamida durante a eletroforese, justifique o efeito positivo ou negativo dos itens abaixo: I. Tamanho da molécula II. Forma da molécula. III. Concentração de poliacrilamida. IV. Tampão de eletroforese. Respostas Na eletroforese as proteínas são separadas tanto pelo seu tamanho como também por pelas suas propriedades físico-químicas. A migração das partículas ocorre por diferença de carga elétrica e por peso molecular. Dessa forma as moléculas menores migram mais rapidamente que as maiores. O DNA apresenta três formas distintas que migram em velocidades diferentes no gel de agarose. As formas são: circular superenovelada (forma 1), circular relaxada (forma 2) e linear (forma 3). A motilidade das diferentes formas pode variar de acordo com o tamanho da molécula de DNA e também depende do diâmetro dos poros do gel, voltagem e força iônica do tampão de corrida. A forma 1 migra mais rapidamente que a forma 3, e a forma 2 é a mais lenta. A forma 1 é a mais rápida, em razão do seu menor diâmetro. O gel de poliacrilaida possui características físicas ideais para uma eletroforese altamente seletiva, como densidade, elasticidade, transparência e tamanho dos poros. Mesmo apresentando esse alto grau de resolução, o uso dessa técnica é economicamente dispendioso para a rotina de análises de amostras. A poliacrilamida é muito tóxica e difícil de ser preparada. Neste tipo de gel a corrida é feita em cubas verticais, e o corante utilizado é o mesmo da eletroforese em gel de agarose. No tampão de Eletroforese, a amostra se movimenta no interior do tubo (sob ação de corrente elétrica) nesse tudo acontece as interações das cargas elétricas entre as proteínas e os ions da solução tampão, tal processo promove o fracionamento proteico, formando, dentro do tubo de pequenas micelas, essa técnica tem uma vasta aplicação, fraciona moléculas pequenas e até as mais volumosas e complexas, como proteínas e ácidos nucleicos, de forma rápida e eficiente. Trata-se de uma técnica rápida, sensível e precisa QUESTÃO 2 Em laboratório de biotecnologia, a agarose é muito usada como matriz na eletroforese em gel. Géis de agarose com concentração de 0,7% são geralmente utilizadas para avaliar a integridade de DNA genômico. Qual massa de agarose o técnico do laboratório deve pesar para preparar uma solução de agarose 0,7% com volume final de 50 mL? A massa de agarose para preparar uma solução de 50 ml é 350mg.
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