Relatório prática_ Biologia Molecular_02 (1)

Prévia do material em texto

RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS: Biologia Molecular 
DADOS DO(A) ALUNO(A):
	NOME: ANTONIO JAIRO PEREIRA DE SOUSA PARENTE
	MATRÍCULA: 01255029
	CURSO: FARMACIA EAD
	POLO: FORTALEZA
	PROFESSOR(A) ORIENTADOR(A): CHRISTIAN JOSE
			TEMA DE AULA: ELETROFORESE
RELATÓRIO:
· Identificar todos os equipamentos e reagentes necessários para a realização da eletroforese
Agarose: extraída a partir de algas marinhas é extremamente fácil de preparar, basta misturar o pó de agarose com solução tampão e derreter por aquecimento, ao resfriar transforma-se no gel de agarose.
Tampão de eletroforese: geralmente Tris-acetato-EDTA (TAE) ou Tris-borato-EDTA (TBE).
Marcador de peso molecular: estabelece o padrão de peso molecular que serve como ponto de referencia e monitoramento para a eletroforese.
Corante: para visualizar o resultado da corrida sob a luz ultravioleta, utilizava-se o brometo de etídeo no gel, porém esta é uma substância cancerígena e pode interferir no padrão de migração. A melhor opção em sua substituição é o corante safer, pois além de mais sensível não é mutagênico.
Cuba de eletroforese e fonte de eletroforese: possibilita o preparo do gel e fornece a corrente necessária para uma corrida uniforme
Transiluminador: fonte de luz UV ou LED usada para visualizar o resultado da corrida de eletroforese.
· Descrever cada etapa dessa metodologia
A eletroforese é um método habitualmente usado para separar e também purificar macromoléculas, principalmente ácidos nucleicos e proteínas. Essas macromoléculas são submetidas a um campo elétrico, na qual migram para um polo positivo ou negativo de acordo com a sua carga. No caso de uma carga positiva, seguirá para o polo negativo e se for negativa, irá na direção do polo positivo.
O fluxo migratório é determinado pelo peso molecular, na qual moléculas de menor peso migram mais rápido que as de maior peso, formando as bandas características que serão visualizadas posteriormente.
· Justificar a aplicação das diferentes concentrações dos géis. 
É uma técnica de separação de moléculas onde as partículas que são carregadas negativamente por um composto denominado SDS (detergente dodecil sulfato de sódio), com exceção do DNA que já possui um caráter de cátion, migram em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial em direção a um eletrodo positivo, sendo que este é criado por uma corrente elétrica, e posteriormente são aplicadas sobre o gel.
Para a separação das moléculas nesta técnica, temos que levar em consideração o tamanho da molécula, sendo que as de menor massa migram mais rapidamente do que as de maior, pois possuem mais agilidade de mobilidade. Em alguns casos o formato da molécula também influencia, pois dependendo do formato as mesmas terão mais facilidade de migrar pelo gel. É importante ressaltar que a eletroforese é utilizada normalmente para a separação de proteínas e moléculas de DNA e RNA.
A poliacrilamida é uma mistura de dois polímeros, acrilamida e bisacrilamida. Para preparar este gel, basta adicionar os dois polímeros nas concentrações desejadas em um suporte de vidro e na presença de um catalisador.
Esta técnica é utilizada, pois o gel poliacrilamida tem a capacidade de separar fragmentos muito pequenos de DNA e que apresentam uma mínima diferença de massa, além disso o gel pode recuperar e purificar determinada amostra.
Apesar das vantagens, o gel de agarose é mais utilizado pois a poliacrilamida é muito tóxica e difícil de ser preparada. Neste tipo de gel a corrida é feita em cubas verticais, e o carante utilizado é o mesmo da eletroforese em gel de agarose.
			TEMA DE AULA: REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE 
RELATÓRIO:
· Descrever cada uma das etapas da PCR, explicando detalhadamente cada uma. 
DESNATURAÇÃO
O DNA genômico contendo a sequência a ser amplificada é desnaturado por aquecimento a cerca de 95°C por cerca de 30 segundos. A dupla fita é aberta (desnaturada), tornando-se uma fita única.
ANELAMENTO OU HIBRIDIZAÇÃO
Após a separação das fitas, um par de iniciadores ou primers (uma fita de DNA específica para o gene que se quer estudar) complementam a fita oposta da sequência de DNA a ser amplificada. Ou seja, um deles é complementar à sequência em uma fita da dupla-hélice de DNA e o outro é complementar à sequência na outra fita. O molde é determinado pela posição dos iniciadores que se anelam a fita. Essa etapa ocorre a uma temperatura de 60°C.
EXTENSÃO OU POLIMERIZAÇÃO
Com o molde já identificado, a enzima DNA-polimerase adiciona as bases complementares, formando uma nova fita e então tem-se novamente a duplicação da fita de DNA. Esse processo acontece a uma temperatura de 72°C.
· Realizar o cálculo para 10 reações da PCR
Volume final da reação: 25 µL. Concentração
	
	Concentração
Inicial
	Concentração
Final
	Volumes finais para 10 reações
	Tampão
	100×
	10×
	
	MgCl2
	500 mM
	20 mM
	
	dNTP
	100 mM
	4,0 mM
	
	Iniciador S
	100 µM
	2,0 µM
	
	Iniciador AS
	100 µM
	2,0 µM
	
	Taq*
	50 U/µL
	10 U/µL
	
	Água
	-
	-
	qsp 200 µL
	DNA
	-
	-
	50 µL
Obs: calculo realizado para as 10 reações.