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RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EaD AULA 2 DATA: 21/09/2019 VERSÃO:01 RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS: MICROBIOLOGIA DOS ALIMENTOS – aula 2 DADOS DO(A) ALUNO(A): NOME: MARIA LUCIENE SILVA DO NASCIMENTO MATRÍCULA: 01287708 CURSO: NUTRIÇÃO POLO: CAMPINA GRANDE PROFESSOR(A) ORIENTADOR(A): KATCILANYA MENEZES ORIENTAÇÕES GERAIS: · O relatório deve ser elaborado individualmente e deve ser escrito de forma clara e · concisa; · O relatório deve conter apenas 01 (uma) lauda por tema; · Fonte: Arial ou Times New Roman (Normal e Justificado); · Tamanho: 12; Margens: Superior 3 cm; Inferior: 2 cm; Esquerda: 3 cm; Direita: 2 cm; · Espaçamento entre linhas: simples; · Título: Arial ou Times New Roman (Negrito e Centralizado). TEMA DE AULA: CONTAGEM DE COLIFORMES TOTAIS PELO MÉTODO DE NÚMERO MAIS PROVÁVEL (NMP): TESTE CONFIRMATÓRIO RELATÓRIO TESTE CONFIRMATÓRIO 1. Resumo sobre o tema abordado em aula. RESUMO Aprendemos que o teste confirmatório (LST meio de cultura) que é a 2ª parte do teste de contagem de coliformes totais, é sempre feito depois da 1ª parte do teste presuntivo. Deve-se obedecer sempre a ordem das etapas de análise. Seguimos corretamente durante a aula as Boas Práticas de Laboratório (BPL) usando álcool para passar na e na arquibancada, usando luvas, cabelos presos etc... 2. Elucidar a técnica de contagem N.M.P. para contagem em alimentos. DETERMINAÇÃO DA CONTAGEM DE COLIFORMES COM A TÉCNICA N.M.P EXPLICANDO A TECNICA (NMP) · Teste confirmatório: Caldo VB (meio de cultura) NMP: permiti calcular a diferencia entre os tubos se são positivos ou negativos, o teste confirmatório ou fase confirmativa, repete-se (transferência de alíquotas com alça de platina) dos tubos presuntivos positivos para tubos preparados da mesma forma que no anterior, porém contendo caldo verde brilhante. Todos os tubos são incubados a 35°C durante 24 a 48 horas e posterior identificação dos que tiverem crescimento (positivo) de coliformes totais, identificado pela ocorrência de produção de gás nos tubos de Durhan. TEMA DE AULA: CONTAGEM DE COLIFORMES TOTAIS PELO MÉTODO DE NÚMERO MAIS PROVÁVEL (NMP): TESTE PRESUNTIVO RELATÓRIO TESTE PRESUNTIVO 1. Resumo sobre o tema abordado em aula. Aprendemos que o teste presuntivo (LST meio de cultura) é 1ª parte do teste dos coliformes, depois da inoculação de 35°C a 37°C/48h, assim apresentando bolha de ar, passamos para a 2ª parte que é o teste confirmatório feito com o caldo verde (VB meio de cultura). 2. Elucidar a técnica de contagem N.M.P. para contagem em alimentos DETERMINAÇÃO DA CONTAGEM DE COLIFORMES COM A TÉCNICA N.M.P. EXPLICANDO A TECNICA (NMP) · Teste Presuntivo: Caldo LST (meio de cultura) 1ml de cada diluição em um tubo de ensaio com o caldo LST10ml e tubo de duhran invertido com o tempo de incubação a 35°C, por 24 a 48 horas. O teste presuntivo ou fase presuntiva consiste em fazer a homogeneização e transferência de alíquotas e/ou diluições da amostra para tubos de ensaios contendo, no fundo, um tubo invertido para coleta de gás (tubo de Durhan), e o meio de cultura apropriado (caldo lauril triptose). Todos os tubos são incubados a 35°C durante 24 a 48 horas e posterior identificação dos que tiverem crescimento (positivo) de coliformes totais, resultado identificado pela ocorrência de reação ácida (coloração amarelada) ou produção de gás (retida no tudo de Durhan). Referencias: Aulas passo a passo do dia 14 e 21 obtidas no laboratório de microbiologia- polo Campina Grande https://bancadapronta.wordpress.com/2013/09/03/analises-de-coliformes-por-tubos-multiplos/ https://www.youtube.com/watch?v=jpl6_JaEh-M Ana Carolina Castanheira https://www.youtube.com/watch?v=dPix95K8J8I Ana Carolina Castanheira Att, Luciene RELATÓRIO DE COLORAÇÃO DE GRAM · Coloração diferencial de Gram e observação no microscópio · Distinguir as bactérias+ de bactérias- MATERIAL UTILIZADO 1 Lamina, 1pipeta de pasteur,1alça de platina, agua destilada, Lugol, álcool acetona, safranina, bico de busem, pinça de madeira. Procedimento passo a passo: Pega-se a lâmina molha com uma gota de água destilada e com a alça raspa a amostra que na placa de petri passa na lâmina molhada para que venha amolecer e soltar-se da alça ficando na lâmina, após feito isso, leva a secar na chama, mas não muito perto, estando seca seguimos para os reagentes. · Adicionamos violeta de cristal, esperamos 1 minuto · Lavamos com água destilada · Adicionamos solução Lugol, esperamos 1 minuto · Lavamos com água destilada · Adicionamos álcool acetona, esperamos 30 segundos · Lavamos com água destilada · Adicionamos o contra corante safranina, esperamos 30 segundos · Deixamos secar a lâmina · Em seguida levamos ao microscópio para visualizar Conclusão: Depois de feito todo procedimento e levado ao microscópio para visualizar o resultado obtido da coloração foi roxa indicando Gram +. Logo em seguida terei fotos direto do microscópio para anexar aqui no relatório. Foto -1 Foto - 2 Foto -3 Referência de autoria própria e da aula no laboratório Att, Luciene
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