aula-6-sorologicos-secundarios-romeu

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2015
MSc. Romeu Moreira dos Santos
2017
unespunesp
IMUNOVIRIMUNOVIR
unespunesp
IMUNOVIRIMUNOVIR
Relembrando...
Anticorpo
Moléculas secretadas
pelas células B em
resposta a um imunógeno
(RIH)
Antígeno/Epítopo
Antígenos- moléculas reconhecidas
sistema imune.
pelo
Epítopos ou determinantes antigênicos- são
sítios nos antígenos aos quais os receptores
de antígenos reconhecem/ligam.
Interação Ag-Ac:
Inicial
Conceito
É uma associação bimolecular semelhante à
deinteração de enzimas com seus substratos ou
hormônios
distinção
alteração
podendo,
com seus receptores, com uma
bem evidente o Ac não provoca nenhuma
química irreversível na molécula de Ag,
portanto, o produto formado (Ag-Ac) se
dissociar
livres na
nos seus 2 componentes; isto é, Ag e Ac
solução.
Ag + Ac AgAc (Imunecomplexos)
Afinidade
Especificidade
É a habilidade do anticorpo em distinguir seu
imunógeno de outros antígenos.
• Conceito de chave e fechadura
Fatores que Afetam as Reações Ag/Ac
• Afinidade
• Avidez
Excesso de Ag
• Relação [Ag]:[Ac]
• Forma física do Ag
(solúvel ou particulado)
Excesso de Ac Excesso de
Equivalência – formação de rede
IMUNODIAGNÓSTICO
Diagnóstico laboratorial realizado por
meio de técnicas imunológicas.
Busca: Anticorpo ou Antígeno no organismo vertebrado
suspeito de
sorológicas.
estar infectado usando ensaios / reações
ENSAIOS SOROLÓGICOS
Primários  detectam a interação direta entre antígeno e
anticorpo:
ELISA.
Ex. Radioimnoensaio, Imunofluorescência,
Secundários  detectam conseqüências da interação entre
antígeno e anticorpo  mudanças no estado físico do
antígeno: Imunodifusão, Aglutinação, Precipitação, Fixação
de Complemento.
Van Oss, 2000; Janeway, 2001
Testes Baseados nas Reações Ag/Ac
• Todos os testes baseados nas reações Ag/Ac
dependerão da formação de rede ou eles
terão de utilizar outras vias para detectar
pequenos complexos imunes
• Todos testes baseados nas reações Ag/Ac
podem ser usados para detectar o Ag ou Ac
Testes de Aglutinação
Formação de rede
Testes de Aglutinação: – simples,
mais sensíveis!
baratos, um pouco
Teste qualitativo ou quantitativo
Existem Vários Tipos:
a)
b)
c)
d)
Hemaglutinação de Eritrócitos
Aglutinação Bacteriana
Aglutinação Passiva
Inibição da Aglutinação (Inib. Hemaglutinação –
HI)
3) Mistura-se:
4) Controle negativo:
26
5) Leitura do resultado:
negativo positivo
Um resultado positivo é indicado por uma
aglutinação visível (aglomeração dos eritrócitos
na placa teste), como ilustrado acima.
AGLUTINAÇÃO PASSIVA
AGLUTINAÇÃO INDIRETA PASSIVA
Ag solúveis associados a outras superfícies
(Partículas de látex ou superfície de hemácias)
Exemplo: Hemaglutinação Passiva para a Doença de Chagas:
• As hemácias são revestidas com Ag do T. cruzi (ligação
covalente) e então distribuídas nos poços da placa.
• O soro teste e os controles positivos e negativos, devidamente
diluídos, são adicionados aos poços da referida placa.
• Se houver Ac específico contra o Ag, as hemácias se
aglutinam e formam uma camada no fundo do poço. Quando
não existe Ac específico, as células formam um botão no fundo
do poço.
Aglutinação Positiva
Negativa
INIBIÇÃO DA AGLUTINAÇÃO
Exemplo: presença de hCG na urina (gravidez)
+
Resultado negativo:
(ausência de hCG na
urina).
Ocorre aglutinação, pois
os anticorpos anti-hCG
não são bloqueados na
incubação inicial,
porque não havia o
hormônio na urina.
Livres, podem aglutinar
as partículas revestidas
de hCG.
Urina Soro anti - hCG
Partículas revestidas
com hCG
Adicionam-se
São incubados e
colocados numa
placa
Resultado positivo:
(presença de hCG
na urina): não ocorre
aglutinação.
Ac se ligaram no hCG da urina,
(ficando bloqueados), na incubação inicial
32
-Aglutinação Bacteriana
-As infecções bacterianas frequentemente induzem a
produção de Acs séricos específicos para Ags de superfície
das Bactérias.
-A presença de tais Acs pode ser detectada pelas reações de
aglutinação bacteriana.
-Os títulos dos Acs séricos de um indivíduo suspeito é
definido como a recíproca da maior diluição do soro que
produz uma reação positiva de aglutinação.
-O título aglutinante de um soro pode ser usado para o
diagnóstico de infecções bacterianas.
Um exemplo de teste de soro-
aglutinação com partículas é o teste
de Látex de aglutinação ou de
aglutinação bacteriana.
Ag BacterianoAcs Anti-bacterianos
(-)(+)
Testes de Precipitação
-
-
-
-
-
Formação de rede
Tipo de Ags: Macromoléculas Solúveis
PrincipaisAcs envolvidos: IgG* e IgM
Formação de Precipitado dos Imunocomplexos
Maior formação de precipitado de
imunecomplexos na zona de equivalência entre
concentrações de Ag e de Ac
as
Reações de Precipitação:
-Acs e Ags em soluções aquosas formam uma rede/malha =>Precipitação
A formação da rede requer:
1) Acs polivalentes
2) Ags devem ser bivalentes / polivalentes
Não PrecipitaçãoPrecipitação +
Testes de Precipitação: – simples, baratos,
e pouco sensíveis!!!
mas específicos!
Curva de Precipitação
TÉCNICAS DE DIFUSÃO EM GEL
IMUNODIFUSÃO
Imunodifusão Dupla:
• Coloca-se agarose sobre uma lâmina:
• Faz-se em seguida, pequenos orifícios no gel e são adicionadas as soluções
mostrado abaixo:testes de Ag e Ac, como por exemplo, é
Ac
• As soluções sofrem difusão e, quando o Ag e o Ac se encontram em
zona de equivalência, se observa a reação pela formação de uma linha
de precipitação:
• Pode ser visualizada pós lavagem do gel , para remoção das
solúveis, por coloração dos arcos de precipitação com corante
proteínas
Utilização: muito usada em
pesquisa e diagnóstico de
algumas doenças, como
cisticercoseAg Ag
Ac
Ag AgAg Ag
AcAc
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Técnica de Imunodifusão Dupla
em Gel deÁgar - IDGA
2- Anti-soro na coluna
canaleta
IMUNOELETROFORESE
• Pode-se fazer comparação de misturas complexas de Ag que são separados em
gel de agarose, pela aplicação de uma corrente elétrica.
As moléculas migram para o pólo negativo, distribuindo-se no gel de acordo
com os seus PM e cargas elétricas.
Uma canaleta é recortada entre os poços e preenchida com Ac, que se difunde.
Ag e Ac formam arcos de precipitação.
•
•
•
50
+
1- Separação de antígenos
Ag
Ag -
2- Anti-soro na canaleta
canaleta
Immunoelectrophoresis reveals the presence of several distinct
immunoglobulin isotypes in normal human serum.