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MICROBIOTA E OBESIDADE A microbiota intestinal é o conjunto de microrganismos que habitam no organismo e que convivem com o animal durante toda a sua vida. Dos 110.000 milhões de células do organismo, aproximada- mente 90% correspondem a bactérias, a maioria delas alojadas no sistema digestivo. As novas tecnologias baseadas na sequenciação massiva de ADN permiti- ram estudar mais aprofundadamente a biodiversidade elevada deste ecossistema complexo e as suas funções dentro do organismo que habitam. Embora intervenha em muitos aspetos fundamentais na saúde dos animais, o papel mais relevante da microbiota é o seu metabolismo, que é considerado muito superior ao humano por possuir até 150 vezes mais genes do que o homem. A microbiota começa a ser conside- rada como mais um órgão do corpo, composta por uma comunidade rica e diversificada de bactérias que não só interagem entre si, mas também com as células do hospedeiro. Estas interações complexas, sobretudo as que existem com as células do sistema imunitário, têm uma grande influência no equilíbrio entre a saúde e a doença. Recentemente considera-se que as mudanças na alimentação são as causas da maior parte das mudanças da microbiota. Também existe uma relação entre a di- versidade da microbiota e a composição química do cérebro. Um stress maior repercute numa menor diversidade bacteriana intestinal e com as mudan- ças na alimentação observa-se uma melhoria no sistema nervoso. Clinical reports A CLINICAL REPORT FOR THE VETERINARIAN FROM AFFINITY PETCARE 2 A CLINICAL REPORT FOR THE VETERINARIAN FROM AFFINITY PETCARE Recentemente foi descrita uma grande semelhança na estrutura e função da microbiota do cão e humana, o que significa que os estudos em humanos deram resultados preditivos nos cães e vice-versa. As espécies coincidentes entre o microbioma do cão e do homem representam 63%, mas apenas 32,9% no porco e 19,9% em ratos (Figura 1). Os primeiros indícios desta relação surgiram a partir de estudos realizados em ratos, nos quais se comprovou como um transplante da microbiota de animais obesos para animais sem microbiota (criados em condições estéreis) lhes induzia uma acumulação de gordura e ao fim de pouco tempo herdavam o fenótipo obeso dos doadores (Turnbaugh et al.; 2009) (Figura 2). Além disso, demonstrou-se como a composição da microbiota dos animais obesos é diferente em relação à composição da microbiota dos animais magros. Os animais obesos contam com uma microbiota menos diversificada e rica, com uma maior representação de géneros com alta capacidade de extração de energia dos hidratos de carbono complexos (Tehrani et al., 2012). É o que é conheci- do como padrão de microbiota alterado ou disbiose intestinal (Baothman et al.; 2016). A microbiota tem um papel fundamental no equilíbrio entre a saúde e a doença e começa a ser considerada como mais um órgão do corpo. Figura 1. Registo taxonómico do catálogo de genes. Firmicutes Bacteroidetes Proteobactéria Actinobactéria Fusobactéria Outros Não registado CÃO HUMANO RATO PORCO Figura 2. Os animais isentos de microrganismos adotam o fenótipo do doador de microbiota. PESO DO DOADOR TRANSFERÊNCIA DE MICROBIOTA ADOÇÃO DO FENÓTIPO Normal Pouco pesoObeso Adaptado de Coelho et al.; 2018 Adaptado de Turnbaugh et al.; 2009 3 A CLINICAL REPORT FOR THE VETERINARIAN FROM AFFINITY PETCARE Com a obesidade, a microbiota sofre alterações, é menos diversificada e rica, o que pode implicar desajustes significativos. A dieta é um dos fatores chave que modulam a microbiota intestinal, para além do meio ambiente, da genética e dos fármacos. A gordura induz mudanças importantes na composição da microbiota devido à secreção de ácidos biliares, que nas suas formas conjugadas têm propriedades anti- bacterianas. Desta forma, de forma indireta, as dietas com alto teor de gordura promovem uma microbiota alterada ou disbiose intestinal, favorecendo a proliferação de géneros que aumentam a extração energética da dieta, aumentando a permeabilidade intestinal, reduzindo a saciedade e ati- vando o metabolismo que implica uma deposição de gordura. Assim, a longo prazo estas dietas promovem um aumento de peso, inflamação crónica generalizada do organismo e, portanto, excesso de peso ou obesidade. As enzimas próprias do animal não são capazes de digerir a fibra da dieta. No entanto, as bactérias intestinais possuem a maquinaria enzimática necessária para desfazer hidratos de carbono complexos, que através de um processo de fermentação serão capazes de produzir metabólitos (ácidos gordos voláteis), que por sua vez induzem a saciedade, entre muitas outras funções benéficas para o intesti- no (Pinna et al., 2016). De facto, observou-se que os animais que se alimentam com dietas de alto conteúdo em fibras possuem uma microbiota mais diversificada (Herstad et al.; 2017) (Beloshapka et al.; 2013), com a presença de bactérias menos eficazes na extração de energia, ao mesmo tempo que promovem uma menor permeabilidade intestinal (Parnell et al.; 2012). 4 A CLINICAL REPORT FOR THE VETERINARIAN FROM AFFINITY PETCARE ESTUDO 1. MUDANÇAS NA MICROBIOTA APÓS UM PROGRAMA DE PERDA DE PESO NOS CÃES BEAGLES. A. Salas, I. Jeusette, I. Castillo, N. Iraculis, N. Sanchez, S. Fernandez, Ll. Vilaseca, C. Torre 100% 95% 90% 85% 80% 75% 70% 0 5 10 12 semanas −14% peso corporal −44% gordura corporal 17 semanas −18% peso corporal −56% gordura corporal 15 20 Pe so c or po ra l ( % v s. T 0) Tempo (semanas) Gráfico 1. Evolução do peso corporal durante a perda de peso com ADV Weight Balance. INTRODUÇÃO Nos últimos anos, a comunidade científica evidenciou a estreita relação entre a obesidade e a microbiota intestinal. Desde há algum tempo que se fala que a obesidade não é apenas um problema de equilíbrio energético, mas também implica outros fatores relacionados com a genética do animal e a interação da microbiota intestinal com o hospedeiro. Noutras espécies, a microbiota intestinal ficou alterada em pacientes obesos. Descreveu-se que uma microbiota obesogénica reper- cute na adiposidade e aumento de peso, embora nos cães ainda não exista muita informação sobre isso. Esta investigação teve como objeti- vo estudar a eficácia de um programa de perda de peso com AVD Weight Balance sobre a composição corporal e ao mesmo tempo ver como pode afetar a microbiota fecal canina na sua composição e funcionalidade. Tabela 1. Distribuição de géneros e filos bacterianos identificados através de sequenciação de RNAr 16S nas fezes às 0 e 17 semanas do programa de perda de peso. São mostrados os valores em média ±SEM. *P < 0,05. Filo Género T0, % T17, % Actinobactéria Unclassified Actinobacteria 4,48 ± 1,58 3,33 ± 0,73 Bacteroidetes Unclassified Bacteroidales 3,24 ± 1,80 7,96 ± 3,45 Bacteroides 5,39 ± 3,01 5,47 ± 2,03 Prevotella 3,93 ± 3,40 3,12 ± 1,43 Firmicutes Unclassified Bacilli 1,46 ± 0,75 1,87 ± 0,93 Lactobacillus 5,96 ± 2,68 0,33 ± 2,00* Clostridium 22,07 ± 4,80 10,44 ± 3,42* Unclassified Lachnospiraceae 5,55 ± 0,87 3,95 ± 0,99 Blautia 15,14 ± 2,40 9,37 ± 3,91 Dorea 5,89 ± 1,44 2,29 ± 0,56* Unclassified Peptostreptococcaceae 1,76 ± 0,65 1,12 ± 0,40 Faecalibacterium 5,80 ± 1,96 2,97 ± 1,24 Unclassified Erysipelotrichaceae 1,44 ± 0,54 1,22 ± 0,25 Allobaculum 4,53 ± 2,01 30,13 ± 1,10* Fusobactéria Cetobacterium 0,00 ± 0,00 1,52 ± 1,47 Fusobacterium 7,30 ± 1,80 8,47 ± 2,28 Proteobactéria Sutterella 0,48 ± 0,27 1,08 ± 0,36 5 A CLINICAL REPORT FOR THE VETERINARIAN FROM AFFINITY PETCARE Tabela 2. Mudança na composição corporal às 17 semanas de perda de peso com ADV Weight Balance. São mostrados os valores em média ± SEM T0 T17 semanas Diferença p- value Média SEM Média SEM Média SEM Peso corporal kg 16,34 1,52 13,39 3,3 −2,95 0,15 < 0,001 Gordura corporal kg 7,023 0,755 3,069 0,372 −3,954 0,5 0,002 Massa muscular kg 8,8880,8 9,592 0,98 0,7 0,39 NS Massa óssea kg 0,559 0,063 0,46 0,04 −0,098 0,032 NS MATERIAIS E MÉTODOS Seis cães obesos adultos da raça Beagle (BCS 7,5-8/9) foram incluídos num programa de perda de peso corporal com AVD Weight Balance, durante 17 semanas. A dose diária inicial foi estimada em 70% das necessidades calóricas para a manutenção de peso e semanalmente era ajustada para manter uma perda de peso entre 1 - 2%/ semana. A composição corporal foi estabelecida através de densitometria de energia dupla (DEXA), antes e após a perda de peso (às 12 e às 17 semanas) (Figura 1). Foram realizados controlos bioquímicos (0, 12 e 17 semanas) e foram recolhidas amostras fecais de cada cão (0, 17 semanas). A composi- ção da microbiota fecal foi estudada através de sequenciação massiva de RNA ribossómico 16 S (Ilumina MiSeq) das amostras fecais recolhidas. RESULTADOS A evolução do peso corporal durante o programa de perda de peso é mos- trada no Gráfico 1. Às 12 semanas o peso corporal diminuiu −14 ± 0,6% e a gordura corporal diminuiu −43,7 ± 3,2%, ao mesmo tempo que se manteve a massa muscular e a massa óssea. Observou-se igualmente uma redução do colesterol plasmático (−18%), juntamente com o aumento da sensibilidade à glucose (−20% insulina, −8% frutosamina). A perda de peso média semanal foi de 1,18 ± 0,05% do peso corporal inicial. Às 17 semanas o peso corporal tinha diminuído 18 ± 0,5% e a gordura corporal chegou a 56% da inicial (Tabela 2, Gráfico 2). Não se voltaram a registar mudanças nos níveis de massa óssea nem muscular. Mantive- ram-se as alterações bioquímicas ob- servadas às 12 semanas com uma maior redução dos níveis de insulina (−30%). A perda de peso média semanal foi de 1,07 ± 0,03% do peso corporal inicial. As linhagens filogenéticas mais abundantes nos cães eram Firmicutes, Bacteroidetes, Fusobactéria, Actinobac- téria e Proteobactéria (Tabela 1). Às 17 semanas de estudo obser- vou-se uma redução significativa da abundância relativa dos géneros Dorea (p=0,028), Lactobacillus (p=0,028) e Clostridium (p=0,028), ao mesmo tempo que aumentou a abundância do género Allobacullum (p=0,046). A riqueza ou número de espécies da microbiota intestinal foi significati- vamente superior após as 17 semanas de estudo (Chao index, p-value = 0,014) (Gráfico 3). Globalmente, a biodiversida- de da microbiota foi significativamente diferente no fim do estudo (ANOSIM’s R value=0,39; p=0,01). Massa óssea Massa muscular Massa de gordura 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 T0 Pe so (k g) T17 3,069 7,023 9,598,888 0,460,559 Gráfico 2. Distribuição da composição corporal no início (T0) e no fim da perda de peso (T17) 6 A CLINICAL REPORT FOR THE VETERINARIAN FROM AFFINITY PETCARE DISCUSSÃO A perda de peso obtida com a dieta é considerada uma perda de peso sau- dável (1 - 2%/peso inicial por semana). Os animais mostraram uma melhoria dos indicadores do metabolismo lipídico e glicémico com o aumento da sensibilidade à insulina. Após 17 semanas de dieta obte- ve-se uma modulação da microbiota com um aumento da riqueza de espécies. O aumento do género Allobaculum foi registado previamente em animais que receberam uma dieta com baixo teor de gorduras e também após a perda de peso (Ravussin et al.; 2012), sendo considerado um género com potenciais benefícios para o hospedeiro. A redução de Clostridium e Lactobacillus poderá ajudar a reduzir a capacidade de extração de energia dos hidratos de carbono complexos e indigestos (Handl et al.; 2013). » CONCLUSÕES A microbiota intestinal é o resultado da interação da dieta, do hospedeiro, do ambiente e da própria microbiota. Um programa de perda de peso em cães obesos com a dieta AVD Weight Balance altera satisfatoriamente a microbiota intestinal. No fim do estudo os cães mostraram uma microbiota com composição mais saudável, com uma maior riqueza, maior presença de Allobacullum e menor proporção de Clostridium e Lactobacillus. Gráfico 3. Índice Chao (riqueza das espécies) no início e no fim do estudo (T0, T17) (p=0,014). 9000 8000 7000 6000 5000 4000 3000 T0 T17 Ín di ce C ha o Figura 1. Imagem da composição corporal com DEXA antes (T0) e após (T17) a perda de peso. T0 T17 7 A CLINICAL REPORT FOR THE VETERINARIAN FROM AFFINITY PETCARE ESTUDO 2. ESTUDO CLÍNICO MULTICÊNTRICO EM CÃES COM EXCESSO DE PESO E OBESIDADE: EFICÁCIA DA PERDA DE PESO IN-HOME E MANUTENÇÃO A. Salas, I. Jeusette, N. Sánchez, J.J. Cerón, Ll. Vilaseca, C. Torre. INTRODUÇÃO O excesso de peso (excesso de peso e obesidade) é um dos distúrbios mé- dicos mais comuns nos cães, afetando atualmente entre 20 - 50% dos cães dos países desenvolvidos (Courcier et al.; 2010, APOP 2016, Colliard 2006). Estudos prévios mostraram como AVD Weight Balance é uma dieta eficaz na perda de peso nos cães beagles, mas também era necessário avaliar a sua eficácia em cães com dono em casa (“in-home”), com um acompanha- mento clínico veterinário. O objetivo era estudar a evolução do peso corporal durante pelo menos 2 meses depois de terminar o programa de perda de peso e poder confirmar a sua eficácia na manutenção do peso alcançado. MATERIAIS E MÉTODOS Foi selecionado um total de 59 cães adultos (5,56 ± 0,72 anos, 2 - 10 anos) com excesso de peso ou obesidade (BCS > 6/9), raças pequenas (n=20) e médias/grande (n=39). Após um check-up veterinário completo para descartar quaisquer patologias, os ani- mais foram submetidos a um programa de emagrecimento com a dieta ADV Weight Balance, durante 12 semanas ou até alcançarem o seu peso ideal. A dose de alimento inicial foi estabelecida em 70 kcal x (kg Peso Ideal)0,75 e foi ajustada a cada 2 semanas durante os controlos veterinários, de modo a obter uma perda de peso saudável. Passadas as 12 semanas de perda de peso, ou ao chegarem ao seu peso ideal, ajustou-se a dose de 60% dos cães (n=33) para manutenção de peso e mantiveram-se os controlos mensais até se chegar às 20 semanas de estudo. Os restantes cães (n=22) continuaram com o plano de perda de peso até às 20 semanas. Realizaram-se controlos bioquímicos, medição da circunferência pélvica e questionários de satisfação e bem- -estar no início e após as 12 semanas e 20 semanas do início do estudo. RESULTADOS 97% dos cães completaram o progra- ma de perda de peso até às 8 semanas e 94% fizeram-no até às 12 semanas. Dezassete dos 22 cães que continua- ram com o plano de perda de peso continuaram mais 8 semanas até ao fim do estudo (20 semanas) e 29 cães dos 33 em manutenção de peso, Gráfico 1. Evolução da perda de peso corporal durante o estudo. 1,01 0,99 0,97 0,95 0,93 0,91 0,89 0,87 0,85 0 5 10 15 20 semanas % p es o em re la çã o ao in ic ia l 8 A CLINICAL REPORT FOR THE VETERINARIAN FROM AFFINITY PETCARE Gráfico 4. Questionários de satisfação ao consumidor 3 meses. Gráfico 2. Resultados dos questionários de satisfação realizados durante os controlos veterinários de 3 meses, em relação à procura de comida. Gráfico 3. Circunferência pélvica medida pelo veterinário no início (T0) e passados 3 meses desde o emagrecimento. mantiveram-no pelo menos durante 8 semanas depois (20 semanas). Perda de peso: A perda de peso semanal durante os primeiros 2 meses foi de 0,92%/semanal do peso corporal inicial e diminuiu para 0,88%/semanal no fim do estudo (Gráfico 1). A dose média consumida durante a fase de perda de peso foi de 68 kcal x (kg Peso Ideal)0,75. Durante a fase de manutenção de peso, a dose de alimento foi sendo ajustada para manter o peso corporal. A média consumida foi de 77 kcal x (kg Peso Ideal)0,75, 13% acima da dose média de perda de peso. Passados 2 meses, o peso corporal conseguiu manter-se estável (99,24 ± 0,3% em relação ao peso no início desta fase). A atividade física percecionada pelos donos aumentou, a circunferência pélvica diminuiu 4 centímetros nas 12 semanase os cães pediam menos comida do que antes do início do estudo (Gráficos 2 e 3). A satisfação geral com o produto e com o programa de emagrecimento é mostrada no Gráfico 4. T0 7,6 6,5 p < 0,003 T3 T0 60,2 56,1 p < 0,003 T3 » CONCLUSÕES A dieta ADV Weight Balance é eficaz na perda de peso e na sua manutenção após a respetiva perda, em cães cuidados em casa. Os donos observaram a perda de peso e terminaram o estudo com uma satisfação geral excelente. 10 5 0 80 60 40 20 0 Av al ia çã o (1 - 1 0) Ci rc un fe rê nc ia p él vi ca (c m ) Satisfação programa Melhoria bem-estar Aumento da vitalidade Melhoria qualidade de vida Perda de peso subjetiva 100% 98% 93% 88% 91% % d on os q ue re sp on de m S im 9 A CLINICAL REPORT FOR THE VETERINARIAN FROM AFFINITY PETCARE Gráfico 1. Redução da massa corporal total após 2 e 3 meses de emagrecimento em cães minis. INTRODUÇÃO A obesidade é uma doença muito frequente em cães de raças mini e toy (PC < 10 kg). Estima-se que 49% dos cães que sofrem de obesidade são de tamanho pequeno. Este estudo teve como objetivo avaliar a eficácia da dieta AVD Weight Balance Mini em cães com menos de 10 kg, em relação à perda de peso e à composição corporal após um plano de emagrecimento de 3 meses. MATERIAIS E MÉTODOS Foi incluído um total de 12 cães adultos de raças mini (6 Yorkshire Terrier, 6 Chihuahua) com excesso de peso ou obesidade (BCS > 6/9) e uma percentagem de massa de gordura superior a 30% (36,2 ± 0,8%) do peso corporal. Após um check-up veterinário completo, os cães foram submetidos a um programa de emagrecimento de 3 meses. A dose diária inicial de alimento foi fixada através da fórmula 70 kcal x (kg Peso Ideal)0,75 e posterior- mente controlou-se o peso corporal semanalmente para obter uma perda de peso saudável (1 - 2% por semana). Foram realizados controlos bioquí- micos e determinou-se a composição corporal através de densitometria de energia dupla (DEXA), antes do início do estudo e aos 2 e 3 meses do estudo (Figura 1). Os cães que não conse- guiram alcançar o seu peso ideal aos 3 meses continuaram o programa até alcançarem o peso ideal. RESULTADOS O peso corporal final dos cães diminuiu 12% em 2 meses e 18% em 3 meses (Gráfico 1). Esta diminuição deveu-se basicamente à perda de massa de gordura: −30% aos 2 meses e −44% aos 3 meses (Gráficos 2 e 3). Seis dos 11 cães alcançaram o seu peso ideal aos 3 meses, 3 às 19 semanas e os 2 restantes às 25 semanas. No fim do estudo todos os cães tinham um BCS de 5/9 e tinham uma percen- tagem de massa de gordura média de 24,6 ± 0,9%. Não se observaram diferenças entre as 2 raças utilizadas. Os controlos bioquímicos revelaram uma redução de 23% de colesterol plasmático e de 25% da frutosamina circulante. −12% −18% 0% −5% −10% −15% −20% −25% 2 meses 3 meses ESTUDO 3. ESTUDO EM CÃES MINIS DA EFICÁCIA DA PERDA DE PESO A. Salas, I. Jeusette, Ll. Vilaseca, C. Torre. % re du çã o pe so 10 A CLINICAL REPORT FOR THE VETERINARIAN FROM AFFINITY PETCARE » CONCLUSÕES A dieta ADV Weight Balance Mini é uma ferramenta eficaz para a perda de peso em cães mini, provocando uma perda seletiva da massa de gordura, ao mesmo tempo que mantém a massa muscular. Figura 1. Imagem da composição corporal com DEXA (T0) e após (3 meses) da perda de peso. T0 3 meses Gráfico 2. Redução da massa de gordura após 2 e 3 meses de emagrecimento em cães mini. Gráfico 3. Distribuição da composição corporal no início e passados 2 e 3 meses da perda de peso em cães mini. 2 meses 3 meses −30% −44% 0% −10% −20% −30% −40% −50% % re du çã o go rd ur a Massa óssea Massa muscular Massa de gordura T0 2 meses 3 meses 6 5 4 3 2 1 0 Pe so (k g) 1976 1417 1040 3217 3118 3131 116 109 106 11 A CLINICAL REPORT FOR THE VETERINARIAN FROM AFFINITY PETCARE AVALIAÇÃO DO ESTADO CORPORAL MUITO MAGRO Costelas > Muito evidentes Apófises vertebrais > Facilmente palpáveis Pélvis – Abdómen > Ossos muito destacados e com pouca massa muscular Dobra abdominal > Muito marcada Costelas > Evidentes à apalpação Apófises vertebrais > Ligeiramente cobertas de gordura Pélvis – Abdómen > Ossos visíveis e cintura marcada Dobra abdominal > Claramente visível Costelas > Palpáveis sem demasiada gordura Apófises vertebrais > Pouco visíveis Pélvis – Abdómen > Ossos pouco visíveis e cintura ainda evidente Dobra abdominal > Visível Costelas > Palpáveis com dificuldade Apófises vertebrais > Não palpáveis, totalmente rodeadas de gordura Pélvis – Abdómen > Ossos não visíveis com cintura arredondada Dobra abdominal > Não visível Costelas > Não palpáveis Apófises vertebrais > Com cobertura de gordura, dificilmente palpáveis Pélvis – Abdómen > Ossos cobertos de músculo e gordura, com cintura arredondada saliente Dobra abdominal > não existente e abdómen laxo por acumulação de gordura MAGRO IDEAL EXCESSO DE PESO OBESIDADE A CLINICAL REPORT FOR THE VETERINARIAN FROM AFFINITY PETCARE AFFINITY PETCARE Plaça Europa, 54 08902 – L’hospitalet De Llobregat VETS & CLINICS https://www.affinity-petcare.com/vetsandclinics/user AFFINITY VETS https://www.affinity-petcare.com/veterinary/ ADVANCE https://https://www.affinity-petcare.com/advance/es • Association for Pet Obesity Prevention, APOP, www.petobesityprevention.org • Baothman, O. 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