GD 1 Aminoácidos e Peptídeos- Métodos Bioquímicos - Bioquimica RESOLVIDO

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4o GD de Bioquímica 
 Aminoácidos e Peptídeos- Métodos Bioquímicos 
Professor Milton 
 
1- Uma solução de um peptídeo de sequência desconhecida foi dividida em duas 
amostras. Uma amostra foi tratada com tripsina e outra com quimiotripsina. Os 
menores peptídeos obtidos por tratamento com tripsina tinham as seguintes 
sequências 
 
Leu-Ser-Tyr-Ala-Ile-Arg 
Asp-Gly-Met-Phe-Val-Lys 
 
Os menores peptídeos obtidos por tratamento com quimiotripsina tinham as 
seguintes sequências: 
 
Val-Lys-Leu-Ser-Tyr 
Ala-Ile-Arg 
Asp-Gly-Met-Phe 
 
Deduza a sequência do peptídeo 
 
Dados a enzima tripsina hidrolisa peptídeos onde houver Lys ou Arg que 
contribuem com a carbonila na ligação peptídica e a quimotripsina em Phe, Tyr 
ou Trip da mesma forma. 
 
2- Como podemos separar os peptídeos abaixo empregando uma cromatografia 
de troca iônica que contém o trocador iônico Q-sepharose ? 
 
Ala-Glu-Asp-Arg-Gly; Ala-Asp-Tyr-Tyr-Gly ; Ala-Glu-Cys-Lys-Gly 
 
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3- Como é possível separar os peptídeos acima pelas diferenças de ponto 
isoelétrico empregando-se a cromatografia cuja fase estacionária contém 
trocadores iônicos positivos ou negativos? Especifique as condições 
 
4- As proteínas na forma nativa A, B e C possuem massas moleculares 30, 120 e 
180 KD foram submetidas à cromatografia de filtração em gel com as fases 
estacionárias, P-30, P-200 e G-100. Considerando essas informações e dados de 
especificações técnicas das resinas citadas, esboce os perfis cromatográficos 
esperados para as três especificações de fase estacionária. 
P30 (2500 – 40000) 
G100 (4000 – 150000) 
P200 (30000 – 200000) 
 
 
 
5- Como seria possível separar os peptídeos Asn-Gly-His, Val-Pro-Met e 
 
Ser-Ile-Thr. 
 
Proponha o método predizendo a sequência em que serão deslocados do sistema 
de separação. 
 
6- Discorra detalhadamente sobre o fundamento da separação pela eletroforese que 
emprega o dodecil sulfato de sódio e eletroforese bidimensional. 
 
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4 GD de Bioquímica 
Aminoácidos e Peptídeos- Métodos Bioquímicos 
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2- O trocador iônico Q-sepharose é um trocador aniônico onde a carga da sua resina é positiva e se 
liga em moléculas que possuem carga liquida negativa. O ácido glutâmico (Glu) e o ácido aspártico (Asp) 
são os aminoácidos de cadeia lateral com grupo negativo (ácido). Portanto é possível separar os peptídeos 
de acordo com a sua carga liquida em pH neutro. Sendo assim o peptídeo com carga liquida mais negativa 
irá se ligar mais fortemente a coluna e o peptídeo que possui carga liquida igual a zero irá passar direto pela 
coluna. Sabendo que em pH neutro o peptídeo Ala-Asp-Tyr-Tyr-Gly possui um aminoácido de carga 
negativa (Asp) e o restante possui carga neutra, logo esse será o que se ligará mais fortemente a coluna. O 
peptídeo Ala-Glu-Asp-Arg-Gly apesar de possuir 2 aminoácidos de carga negativa (Glu e Asp), possui 
também um aminoácido de carga positiva (Arg) que fará com que a interação com a coluna seja mais fraca. 
O peptídeo Ala-Glu-Cys-Lys-Gly possui um aminoácido de carga negativa (Glu) e um aminoácido de carga 
positiva (Lys) o deixando com carga liquida igual a zero em pH neutro, passando direto pela coluna. 
 
 
3-Sabendo que de acordo com o pH do meio, os peptídeos podem apresentar carga liquida positiva, 
negativa ou neutra. É possível também separar os peptídeos de acordo com a diferença do seu ponto 
isoelétrico (onde o peptídeo se torna sem carga). Se for utilizado trocadores aniônicos visando a ligação de 
peptídeos de carga negativa será necessário um ajuste no pH do meio para 0,5-1,5 unidades de pH acima 
do pH do ponto isoelétrico do peptídeo. Caso seja utilizado um trocador de cátions visando a ligação de 
peptídeos de carga positiva será necessário um ajuste do pH do meio para 0,5-1,5 unidades de pH abaixo 
do pH do ponto isoelétrico do peptídeo. 
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Respostas:
 
 
 
 
4- 
 
 
 
 
 
 
 
5- Para separar os peptídeos seria necessária uma cromatografia de interação hidrofóbica. Os 
peptídeos com maior grau de hidrofobicidade se ligarão mais fortemente a matriz hidrofóbica e serão 
eluidos mais tardiamente devido ao seu grau de hidrofobicidade. É possível observar que Asn-Gly-His 
possui três aminoácidos polares, Val-Pro-Met possui três aminoácidos apolares e Ser-Ile-Thr possui um 
aminoácido polar (Ser) e dois apolares. Portanto a sequência em que esses peptídeos serão deslocados do 
sistema de separação será: Asn-Gly-His, depois Ser-Ile-Thr e em seguida Val-Pro-Met. 
 
 
 
 
 
 
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6- Eletroforese SDS: 
A eletroforese é uma técnica de separação de proteínas pela migração de proteínas carregadas em um 
campo elétrico. Com ela é possível visualizar a quantidade de proteínas diferentes em uma mistura ou o 
grau de pureza de uma determinada preparação proteica. Essa técnica é realizada através de géis feitos de 
polímeros de acrilamida formando uma peneira molecular, retardando a migração de proteínas. A migração 
nesse tipo de gel é em função do tamanho da proteína e da sua forma. O SDS (dodecil sulfato de sódio) é 
um detergente utilizado para ligar nas proteínas em quantidades aproximadamente proporcionais a sua 
massa. O SDS contribui com uma grande carga negativa tornando a carga da proteína insignificativa. Dessa 
forma o SDS confere uma relação carga-massa semelhante para cada proteína. O SDS desdobra a proteína 
tornando as com uma forma semelhante desdobradas. Dessa forma a eletroforese utilizando o SDS separa 
as proteínas com base na massa molecular delas. Após a corrida, é possível visualizar as proteínas utilizando 
um corante chamado Azul de Coomassie. Esse corante se liga nas proteínas especificamente. As bandas de 
proteínas de massa molecular conhecidas podem ser utilizadas para saber a massa molecular de proteínas 
não identificadas. Importante observar que proteínas com diversas subunidades são separadas pelo 
tratamento com SDS. 
Eletroforese bidimensional 
A eletroforese bidimensional une a eletroforese com a focalização isoelétrica permitindo a separação 
de uma mistura complexa de proteínas. Essa técnica separa as proteínas em duas dimensões: em massa 
molecular idêntica e ponto isoelétrico diferentes ou em massa molecular diferentes, mas com ponto 
isoelétrico iguais. Isso é possível através de um gradiente de pH que é estabelecido no gel quando uma 
mistura de ácidos e bases orgânicas de baixa massa molecular se distribui em um campo elétrico gerado 
através do gel. Dessa forma, as proteínas aplicadas no gel migram até que encontrem o pH que coincide 
com seu ponto isoelétrico. 
 
 
 
 
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