Bilirrubinas e Amônia

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UNIVERSIDADE DO ESTADO DO AMAZONAS
Bilirrubinas e Amônia
Hugo V. C. Oliveira, Dr.
Aula de apoio:
BILIRRUBINAS
Biossíntese de Porfirinas
Porfirinas 
• São tetrapirróis cíclicos 
conjugados com metais.
• Os quatro anéis 
heterocíclicos (I,II,III,IV) estão 
ligados entre si por grupos de 
meteno (-CH=), denominados 
α, β, γ, δ.
• São pigmentos de cor 
púrpura, devido ao carácter 
aromático do ciclo.
α
β
γ
δ
I
II
IV
III
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/5/5c/Porphyrin.svg
Grupo heme
• O grupo heme (protoporfirina de ferro)
encontra-se em proteínas como a
hemoglobina, a mioglobina, a catalase e os
citocromos.
• Na hemoglobina e na mioglobina, o ião
Fe2+ tem a função de ligar uma molécula
de O2, possibilitando o seu transporte na
corrente sanguínea.
• Na catalase, o ferro catalisa a dismutação
do peróxido de hidrogénio.
• Em proteínas como os citocromos, o
grupo heme serve como meio de
transporte eletrônico entre proteínas,
recebendo um ou dois electrões de uma
proteína e transferindo-os para outra.
.
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/4/4d/Heme.svg
1) δ-Aminolevulinato desidrase
2) Porfobilinogênio desaminase
3) Uroporfirinogênio III sintase
4) Uroporfirinogênio III descarboxilase
5) Coproporfirinogênio oxidase
6) Protoporfirinogênio oxidase
7) Ferroquelatase oxidase
Fígado
DEGRADAÇÃO DO 
GRUPO HEME
Heme-oxigenase
Biliverdina-redutase
Bilirrubina 
conjugada (direta)
Estercobilinogênio
Mesobilinogênio
urobilinogênio
Mesobilina
Urobilina
Monoglicuronato de bilirrubina
Oxidação
Bilirrubina não 
conjugada (indireta)
β-glicuronidase
Redução bacteriana
Oxidação bacteriana
❑ HIPERBILIRRUBINEMIA
✓ A Bilirrubina Conjugada (DIRETA) E/OU a Bilirrubina Não Conjugada
(INDIRETA) são responsáveis pela Hiperbilirrubinemia
▪ HIPERBILIRRUBINEMIA PREDOMINANTEMENTE NÃO CONJUGADA 
(INDIRETA)
Causas:
✓ Icterícia fisiológica do recém nascido
✓ Icterícia hemolítica
✓ Síndrome de Crigler-Najjar
✓ Síndrome de Gilbert
▪ HIPERBILIRRUBINEMIA PREDOMINANTEMENTE CONJUGADA
(DIRETA)
Causas:
✓ Disfunção hepatocelular aguda ou crônica causada por:
- Infecção
- Inflamação sem infecção
- Síndromes colestáticas hereditárias (Síndrome de Dubin-Johnson)
✓ Doenças que interferem no fluxo biliar para o intestino:
- Colestases intra-hepáticas
- Obstrução extra-hepática
- Doença infiltrativa difusa
- Doenças que interferem no fluxo biliar
❖ DETERMINAÇÃO DE BILIRRUBINAS DIRETA E TOTAL
➢ Método: DIAZOTIZAÇÃO
- Malloy e Evelyn (BDI)
- Jendrassik e Grof (BDI) – “melhor método”
➢ Material: Soro ou Plasma (heparina ou EDTA)
- Analito é estável no soro por 4 dias a 2 – 8 oC
➢ Paciente: Não é necessário jejum!
➢ Interferentes:
- Triglicerídeos >170mg/dL (↓ BT e BD);
- Hemoglobina > 30mg/dL (↑BT e ↓BD)
❖ DETERMINAÇÃO DE BILIRRUBINAS DIRETA E TOTAL
➢ Método: DIAZOTIZAÇÃO
- Malloy e Evelyn (BDI) - Jendrassik e Grof (BDI): “melhor método”
Bilirrubina + Ácido sulfanílico diazotado → Azobilirrubina
VALORES DE 
REFERÊNCIA:
❖ DETERMINAÇÃO DE BILIRRUBINAS DIRETA E TOTAL
➢ Método: DIAZOTIZAÇÃO
- Malloy e Evelyn (BDI) - Jendrassik e Grof (BDI): “melhor método”
Bilirrubina Indireta | até 0,8
DOSAGEM NA URINA: BILIRRUBINA E UROBILINOGÊNIO
Na urina:
Referências: Bilirrubinúria (BI): NEGATIVA
• Bilirrubina Indireta urinária→ Reagente de Fouchet (método quantitativo).
- BI é precipitada pelo cloreto de bário a 10% em papel filtro e oxidada
por gotas de cloreto férrico originando a biliverdina (produto de cor
verde), cuja intensidade de sua coloração será diretamente
proporcional à concentração de bilirrubina na urina.
Fitas reagentes → bilirrubina reage com um sal de diazônio, em meio ácido,
formando um produto de coloração rosa.
Referência: Urobilibinênio: 0,5-3,4mg/dia ou < 1mg/dL
• Urobilinogênio urinário → O urobilinogênio reage com p-
dimetilaminobenzaldeído (reagente de Erlich) em meio ácido, formando produto
de cor vermelho-cereja.
AMÔNIA
Proteínas (dieta)
Aminoácidos
Amônia e uréia Alfa-cetoácidos Síntese
Energia Aminoácidos não-essenciais
Porfirina
Purinas
Pirimidinas
Creatina
Neurotransmissores, etc.
Excreção
α-
Aminoácido
α-
cetoácido
α-
Cetoglutarato
Glutamato
Aminotransferases Glutamato 
desidrogenase
Amônia
Síntese de 
aminoácido
s
Uréia
Ciclo de 
Krebs
Glutamin
a
Síntese de 
purinas e 
pirimidinas
Glutamina 
sintetase
Glutaminase
ASPARTATOUréia
Rota de Desaminação: por Transaminação e Oxidação
Produçao 
de energia
Oxaloacetato
Aspartato aminotrasnferase
Citrulline/Ornithine antiporter
(ORNT1)
N-acetilglutamato é
ativador alostérico
da enzima 1
Citrulline/Ornithine antiporter
(ORNT1)
▪ HIPERAMONEMIA
- Distúrbios da homeostase do Nitrogênio
Causas:
✓ Enfermidade Hepática Severa
✓ Defeitos Congênitos no Ciclo da Uréia
❖ DETERMINAÇÃO DA AMÔNIA PLASMÁTICA
➢ Método:
- REAÇÃO ENZIMÁTICA DE PONTO FINAL NÃO COLORIMÉTRICA
ENVOLVENDO A GLUTAMATO DESIDROGENASE
➢ Material: Soro ou Plasma (heparina)
- Separar o soro ou plasma em ATÉ 20 min. DOSAR IMEDIATAMENTE!
- Aceitável: Analito é estável no soro ou plasma por 24h a -20 oC
➢ Paciente: jejum 10-12h
➢ Interferentes:
- ↑: Fumo; Estresse; Dieta rica em proteína
Redução de NADPH é mensurada em 340 nm
❖ DETERMINAÇÃO DA AMÔNIA PLASMÁTICA
➢ Método:
- REAÇÃO ENZIMÁTICA DE PONTO FINAL NÃO COLORIMÉTRICA
ENVOLVENDO A GLUTAMATO DESIDROGENASE
Amônia:
- Valores de Referências – método enzimático (μg/dL)
0 a 10 dias: .................................100 a 200
40 a 80:........................................40 a 80
Maior de 2 anos:...........................15 a 47
❖ DETERMINAÇÃO DA AMÔNIA PLASMÁTICA
➢ Método:
- REAÇÃO ENZIMÁTICA DE PONTO FINAL NÃO COLORIMÉTRICA
ENVOLVENDO A GLUTAMATO DESIDROGENASE
VALORES DE REFERÊNCIA: