Reação em Cadeia da Polimerase (PCR)

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Willma Gerlanny Alves da Silva 
 
Resumo 
Reação em cadeia da polimerase – PCR 
 
Técnica de biologia molecular empregada para obter amplificação de fragmentos alvo 
de DNA in vitro, empregando elementos do processo natural de replicação do DNA. 
O geneticista Kary Mullis, ganhou o prêmio Nobel Prize em Química (1993) pelo 
desenvolvimento do método que permite sintetizar, em poucas horas e in vitro, uma 
grande quantidade de determinado fragmento de DNA. Seus estudos em 1985 
permitiram amplificar o DNA. 
PCR é a abreviação de Polymerase Chain Reaction. Numa reação de PCR, o fragmento 
de DNA que deseja multiplicar (ou amplificar) é chamado de fragmento alvo ou DNA 
molde e constitui um pedaço do gene que se pretende estudar (em nosso caso é o gene 
da beta-globina). Além do DNA molde, há também os onligonucleotídeos (também 
chamados de primers ou iniciadores) que nada mais são do que pequenos fragmentos de 
DNA complementares as extremidades da região que se pretende amplificar. Para 
analisar os resultados é preciso realizar uma eletroforese em gel de agarose. 
 
Aplicação: 
Diagnóstico de doenças infecciosas e genéticas; 
Determinação da variabilidade genética; 
Sexagem de embriões; 
Estudo da expressão gênica; 
Investigação forense; 
Determinação de linhagens animais; 
Identificação de patógenos; 
Paternidade. 
 
Componentes utilizados na PCR: 
Termociclador; 
Microtubos: 
 Tampão 
Taq Polimerase 
Amostra de DNA 
dNTPs (A, T, G, C) 
Primers ou iniciadores (forward/reverse ou senso/antisenso) 
MgCl2 
H2O 
 
Etapas da PCR: 
Desnaturação: Processo na qual a separação da fita dupla de DNA por meio da elevação 
da temperatura. As amostras são aquecidas entre 94 e 96 ºC durante alguns minutos. 
Anelamento: A temperatura é reduzida entre 55 e 65 ºC durante alguns segundos. Os 
iniciadores se anelam com as sequencias complementares do DNA molde. 
Extensão: Eleva-se a temperatura a 72 ºC por alguns segundos. A DNA polimerase faz a 
duplicação da cadeia a partir dos iniciadores. 
 
Como analisar um fragmento de DNA: 
 Movimentação de moléculas submetidas a um campo elétrico. Coloca-se os 
fragmentos de DNA amplificados sob eletroforege em gel 
Necessita de um substrato: papel, agarose (dna e rna) ou poliacrilamida (DNA e 
proteínas) 
Em seguida separa-se os ácidos nucleicos pelo peso molecular. Os fragmentos menores 
passam e os menores ficam 
Para ver os resultados é necessário passar as amostras e m eletroforese 
 
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 
 
EDWARDS, K. Um método simples e rápido para a preparação de DNA genômico de plantas 
para análise por PCR. Nucleic Acids Res. 25 de março de 1991. 
RAMAKERS, Chistian. Análise sem suposições de dados quantitativos da reação em cadeia da 
polimerase em tempo real (PCR). Volume 339, Issue 1, 13 de março de 2003 , páginas 62-66. 
 
 
 
 
 
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