Análise bacteriológica da água

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Análise bacteriológica da água 
· Parâmetros 
· Físico-químicos: oxigênio dissolvido, pH e etc.
· Químicos: orgânicos (benzeno, aldrin, tolune) e inorgânicos (fosforo, chumbo, nitrito) 
· Microbiota normal 
· Bactérias comumente encontradas nos ambientes aquáticos: pseudômonas, caulobacter, proteus, alcaligenes, bacillus e cianobactérias
· Os microrganismos nas aguas naturais, são em sua maioria inofensivos a saúde humana 
· Uma água de abastecimento pode estar poluída com aguas de esgotos as fezes de sangue quente, ponte conter microrganismo de sangue quente 
· Por que não avaliar diretamente patogênicos? 
-Veiculação esporádica
- Sobrevivência por períodos curtos
- Não são detectados polos métodos convencionais quando a contaminação é pequena 
- Métodos de análise trabalhosos, demorados e onerosos 
· A detecção de microrganismo patogênicos embora necessária em algumas circunstancias, não é aplicada para fins de monitoramento ou verificação de rotina. Por esse motivo, uma das formas de controle mais viáveis como forma de controle da agua é a avaliação da presença de microrganismos indicadores de contaminação fecal, ou seja, a solução é a análise de um microrganismo indicador 
· Microrganismo indicador: 
- Deve estar presenta na agua poluída e ausente na água potável 
- Estar presente na agua quando microrganismo patogênicos estiverem presentes (indica que os patogênicos podem estar presentes em algum momento)
- Sua presença deve estar correlacionada com o nível de poluição da agua 
- Deve sobreviver melhor e por mais tempo que os microrganismos patogênicos 
- Deve possuir propriedades informe e estáveis
- Estar presente em número maior que os microrganismos patogênicos
- Ser facilmente detectado por técnicas convencionais 
· Colliformes Totais (usados como indicador na qualidade microbiológica da água) 
- Grupo de bactérias bacilares gram negativas, aeróbios ou anaeróbicos facultativos, não formadores de esporos.
- Fermentam a lactose com produção de gás em 24 a 48h/35 graus
- Capazes de multiplicar na presença de sais biliares ou agentes tensoativos 
- Principais: Escherichia, Cittobacter, Klebsilla, Enterobacter, dentro outros.
- Alguns não são de origem exclusivamente fecal, isso limita sua aplicação como indicar especifico de contaminação fecal. 
· Coliformes termotolerantes 
- Fermenta a lactose com produção de gás em 24h/44,5 graus 
- Indicam a contaminação recente da agua com material fecal e potencial presença de microrganismo patogênicos 
- Limita sua aplicação como indicar especifico de contaminação fecal. 
- Principal representante: escherichia coli (origem fecal)
· Indicador de contaminação fecal 
- Em aguas salinas pode-se utilizar a bactéria Enterococcus faecailis como indicador de contaminação (maior resistência a salinidade)
· Amotra de agua 
- teste presuntivo: presumir a presnça de colformes totais na amostra
· Metodo dos tubos multiplos 
- Caldo lactose ou LST: os dois possuem lactose como fonte de carbono e energia 
- Caldo LST: possui lauril sulfato de sodio, que inibe o crescimento de bacterias não coliformes, como bacterias gram positivas 
1)Meio sem cresciemtno e sem produção de gas
2)meio estatuovo, houve crecimento com a produção de gas 
Os tubos que possuem crecimento sem produção de gas ou são duvidosos voltam para estufa por mais 24h
· So é possivel terminar a analise da agua nessa etapa,ao realizar o teste presuntivo e não se observar a produção de gas ou turvação de caldo 
· O exame para determinação de coliformes totais se processa por meio de duas etapas.
- Ensaio presuntivo (presuntivo -> presumir) 
- Ensaio confirmativo 
· Realizaçao obrigatoria para todos os tipos de amostras de agua 
· Testes confirmativos
- Detecção de coliformes totais: a parir dos tubos com crescimento e ou com produção de gas do teste presuntivo, é feita uma repicagem em tubos contendo o caldo lactose-verde-brilhante-bile, usando a alça de repicagem. O corante brilhante verde e a bile presentes no caldo inibem bacterias não coliformes, como bacterias gram positivas fermentadoras de lactose, responsaveis por um teste positivo na pesquisa presuntiva de coliformes. A lactose é a fonte de carbono e energia e os tubos tem tubo de Durahm invertido, utilizado para se observar a produção de gas presente da fermentação da lactose. Os tubos são incubasdos de 24 a 45 horas, a 35 graus e somente a produção de gas confirma a produção de coliformes totais.
 - Detecção de coliformes termotolerantes: o caldo EC, é feito de sais biliares que inbem bacterias gram positivas ou especies microbianas não adaptadas ao ambiente local. O caldo EC é inoculado, utilizando uma alça de repicagem e retirando um pouco do caldo turvo do teste presuntivo dos tubos positvos, o caldo EC é incubado a uma temperatura maior para detecção de termotolerantes, teste positivo somente com produção de gas. 
- Pesqueisa de detecção de E.colli: 
1) uma opçao é a utilização do caldo EC MUG, nele o substrato florogenico MUG, é especificamente metabolizado bela E.coli que possui a enzima betaglicoronidase, do metabolisemo do substrato fluorogenico é liberado um composto que torna o meio flourescente quando inside luz ultravioleta. Utilizando o caldo EC MUG, pode-se pesquisar constantemente termotolenrantes e E.coli. 
2) O Ágar m-Endo LES pode ser utilizado transferindo-se para ele as celulas presentes no caldo lactose-verde-brilhante-bile, ou seja realizando uma repicagem, passando o inoculo de um meio para o outro. Nesse meio a E.coli apresenta cor rosa a vermelho com birlho verde metalico, o brilho é devido a fermentação rapida de lactose. Lauril sulfato e o desoxicolato do meio inibem não coliformes, o meio tem lactose e fucsina, sendo a fucsina responsavel pela cor do meio.
· Resumo do resumo ( Análise bacteriológica da água)
· A qualidade microbiologica da agua pode ser determinada por analises bacteriologicas. O controle acontece determinando-se a presença de microrganismos de origem fecal cuja a presença indica poluição da água por dejetos humanos e animais. 
Dos indicadores de contaminação da agua, o que tem maior aceitação é o grupo das bactérias coliformes: (represnetantes: E.coli, enterobacterer, klebsiella, Citrobacter) 
- Batonetes 
- Gram negativos (rosa) 
- Não formadores de esporos 
- Aeróbios ou anaeróbios facultativos
- Capacidade de fermentar a lactose com produção de ácido e gás em 48 horas a 35 graus. 
· Para indicar contaminação fecal recente utilizam-se como indicadores de contaminação os coliformes termotolerante (fecais) que possui como habitat o intestino de animais homeotérmicos cujo representante mais importante é E.coli 
· Fermentam a lactose (coliformes termotolerantes) com produção de gás 44,2 por 24h 
· A analise padrão da água consiste de: 
1) Teste presuntivo (caldo LST): produção de gás (+) -> para evidencia de coliformes. Obs: utilizamos o caldo lactosado poque os coliformes fecais fermentam a lactose e produzem gás.
2) Pesquisa de coliformes totais (caldo BGL): produção de gás (+) -> presença de coliformes 
3) Pesquisa de coliformes termotolerante (caldo EC): colonias escuras com brilho verde metalico.
· A tecnica de membrana filtrante (0,45) tambem pode ser usada na determinação de coliformes 
· As bacterias ficarao retidas na superficie da membrana e serao tranferidas para uma placa de petri (agar: contem corante eosina e azul de metileno que inibe bacterias gram positivas) contendo meio de cultivo seletivo e difencial (uso de corante)
· Coliformes: colonias preto-azuladas 
· Não coliformes: incolores ou cor âmbar transparente 
· Eschericia coli: verde metalizado (devido a rápida fermentação da lactose) 
· Atenção: após o resultado positivo realiza-se a tecnica do NMP (numero mais provável) em 100ml de amostra. Essa tecnica tem 95% de confiança 
· Agua potável: aquela cujo paramentros microbiológicos, fisícos, quimícos e radioativos atendam o padrão de potabilidade: ausencia de E.coli, coliformes termotolerantes ou coliformes totais em 100ml. Além disso, a contagem de bacteriasheterotróficas não pode exceder o limite de 500 UFC/ml.
· Pesquisa de bacterias heterotróficas totais: 
· Agua tratada, sistema de distrubuíção
· Pesquisa de coliformaes termotolerantes (tecnica da membrana filtrante)
· Membrana filtrante: lavar com água esterelizada, sem microrganismos. Pois alguns microrganismos ficam na parede da parte superior, para que toda as bacterias deçam para o filtro
Interpretação: resultado indica problema no sistema de distribuição, com contaminação fecal 
· Substrato definido:cromogenico e fluorogenico 
· Substrato fluorogenico é o MUG EC (presença de E.coli)
· Cor amarela: coliformes totais tem a capacidade de fermentar lactose, tem uma enzima chamada beta-galactosidase que quebra a lactose 
· Susbtrato ONPG: quando tem-se coliforme total na água ele quebra o ONPG em ONP, o ONP é amarelo, ou seja, tem coliforme total na água. É necessario incibir a luz ultravioleta no vidrinho amarelo para saber se tem E.coli. 
· Esse kit permite identificar E.coli e coliformes totais. 
· Anotações importantes da aula sincrona:
· Teste presuntivo -> presumir algo, não se pode dar certeza.
· Bacterias heterotrófica: utilizam compostos organicos como fonte de carbono 
· E.coli: coliforme fecal e termotolerante. É o único microrganismo dos grupos dos coliformes que tem origem exclusivamente fecal. Somente detectando presença ou ausencia da E.coli na água, é possivel dizer se água esta ou não contaminada por material fecal 
· Membrana filtrante: concentra os migrorganismos 
· Teste presuntivo: procedimento dos tubos múltiplos 
· Tubo de durhan: tubos invertidos. São tubos de vidro pequenos e cilíndricos. Serve captação do gás formado em uma fermentação.
· No tubo de Durhan: tubo com gás é a prova positiva, prova positiva é possível observar proturvação e ou produção de gás (pode ser que tenha crescimento sem produção de gás e mesmo assim é considerado positivo)
· positivas que podem fermentar a lactose, se multiplicar e produzir gás, então podem ser um FALSO POSITIVO para coliforme. 
· Para confirmar se é coliforme total, faz-se um teste confirmativo: detecção de coliforme total, detecção de coliformes termotolerantes, detecção de E.coli. 
· Tubo sem produção de gás e sem crescimento: água potavel 
· Detecção de coliformes totais: caldo lactose verde brilhante-bile (meio seletivo e inibe bacterias gram positivas). Repicar em todos os tubos que deram positivo. Incubar 24h em 44,5 graus