Principios Analiticos Farmaceuticos 2

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Profa. MSc. Sandra Moretto
UNIDADE II
Princípios Analíticos 
Farmacêuticos
 Validação é um ato documentado que atesta que qualquer procedimento, processo, 
equipamento, material, operação ou sistema realmente conduza aos resultados esperados.
 A validação dos métodos analíticos tem por objetivo demonstrar que os métodos de ensaios 
utilizados apresentam resultados que permitem avaliar objetivamente a qualidade dos 
medicamentos, conforme os parâmetros especificados.
 Os equipamentos, instrumentos e vidrarias utilizados nos ensaios analíticos devem estar 
qualificados e ou certificados. 
 Os instrumentos de medição usados para esta qualificação, 
devem estar calibrados.
Validação de Métodos Analíticos
 Benefícios ...
 Conhecimento profundo do processo
 “Robustez” do processo
 Redução do risco de falha
 Aderência às Normas de Qualidade, para efeito de registro de 
produto e inspeções.
 Manutenção dos Padrões de Qualidade
Validação de Métodos Analíticos
Qual o preço?
 Dinheiro = Custo
 Tempo = Demora
 Recursos = Custo e a demora (pessoas)
Validação de Métodos Analíticos
 Validação, segundo a NBR ISO/IEC 17025, é a confirmação, por exame e fornecimento de 
evidência objetiva, de que os requisitos específicos para determinado uso pretendido estão 
sendo atendidos.
 As normas internacionais, nacionais e sistemas da qualidade destacam a importância da 
validação de métodos analíticos e a documentação do trabalho de validação, para a 
obtenção de resultados confiáveis e adequados ao uso pretendido.
Validação de Métodos Analíticos
 INSTITUTO NACIONAL DE METROLOGIA, NORMALIZAÇÃO E QUALIDADE INDUSTRIAL 
(INMETRO). DOQ CGCRE 008: orientações sobre validação de métodos de ensaios 
químicos. Disponível em: http://www.inmetro.gov.br. 
 BRASIL. Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Resolução RDC nº 166, de 24 de Junho 
de 2017. Dispõe sobre Validação de Métodos Analíticos.
Validação de Métodos Analíticos
 Os métodos de ensaios usados para avaliar a conformidade de medicamentos com 
especificações estabelecidas devem atingir padrões adequados de exatidão, precisão e 
confiabilidade.
 Validação de métodos é um aspecto vital da garantia da qualidade analítica.
Quando devemos validar um método analítico ?
 Deve-se validar métodos não normalizados, 
criados/desenvolvidos pelo laboratório, normalizados 
utilizados fora dos escopos para os quais foram concebidos, 
ampliações e modificações de métodos normalizados.
Validação de Métodos Analíticos
 Deve assegurar que determinado procedimento analítico selecionado dê resultados 
reprodutíveis e confiáveis e que sejam adequados aos fins para os quais tenha sido 
planejado.
 Para a garantia da qualidade analítica dos resultados, todos os equipamentos utilizados na 
validação devem estar devidamente calibrados e os analistas devem ser qualificados e 
adequadamente treinados. 
Validação de Métodos Analíticos
A metodologia analítica deverá ser revalidada nas seguintes circunstâncias:
 mudanças na síntese da substância ativa;
 mudanças na composição do produto acabado;
 mudanças no procedimento analítico.
Validação de Métodos Analíticos
Qual é o documento oficial publicado pela Anvisa que dá as diretrizes para conduzir a 
validação de métodos analíticos, e dessa forma garantir que o método é adequado ao seu 
propósito?
Interatividade
 O documento é a RDC 166 de 25 de Julho de 2017, que dispõe sobre Validação de Métodos 
Analíticos físico-químicos.
Resposta
Características de desempenho:
 Especificidade;
 Linearidade; 
 Intervalo;
 Limite de detecção (sensibilidade); 
 Limite de quantificação;
 Precisão; 
 Exatidão; 
 Robustez.
Validação de Métodos Analíticos – Parâmetros
 Especificidade do método analítico refere-se à capacidade de medir com exatidão o analito 
de interesse em presença de outros componentes ou interferentes que possam estar 
presentes na matriz da amostra.
Especificidade ou Seletividade
 Especificidade do método é demonstrada como o desvio dos resultados obtidos pela análise 
do analito de interesse em amostras fortalecidas com todos os interferentes e os resultados 
obtidos com amostras não fortalecidas, contendo somente o analito.
 Isto deve ser confirmado pela obtenção de resultados positivos (preferivelmente em relação 
ao material de referência conhecido) em amostras contendo o ativo, comparativamente com 
resultados negativos obtidos com amostras que não contém o ativo, mas compostos 
estruturalmente semelhantes. 
Especificidade ou Seletividade
 Linearidade é a habilidade do método analítico de reproduzir resultados que são diretamente, 
ou por uma transformação matemática bem definida, proporcionais à concentração do analito 
dentro de uma dada faixa. 
 A faixa de aplicação do método analítico é validada verificando se o método fornece 
precisão, exatidão e linearidade aceitáveis quando aplicado a amostras contendo analito nos 
extremos da faixa e dentro da mesma.
Linearidade
Linearidade
Fonte: 
https://www.google.com/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=
s&source=web&cd=1&ved=2ahUKEwj6tLiBm9Tm
AhUoErkGHRx6AZYQFjAAegQIAhAC&url=http%
3A%2F%2Fserv-
bib.fcfar.unesp.br%2Fseer%2Findex.php%2FCien
_Farm%2Farticle%2Fdownload%2F325%2F315&
usg=AOvVaw0kmwiCD1zyZ2z_Pd2FEpYM
Tabela 3 - Resultados da linearidade.
Concentração 
de CaCO3 (mg)
Concentração de CaCO3 (mg) Média das
curvas (mg)
DPR (%)
Curva 1 Curva 2 Curva 3
100 98,33 97,58 97,33 97,75 0,53
125 121,10 121,35 121,10 121,18 0,12
150 145,37 145,62 146,12 145,70 0,26
175 171,14 170,14 172,64 171,31 0,73
250 245,20 247,70 246,20 246,37 0,51
Gráfico de Regressão linear
C
o
n
c
e
n
tr
a
ç
ã
o 250,00
200,00
150,00
100,00
50,00
0,00
0 50 100 150 200 250
mg
R = 0,99967
 O Intervalo especificado é a faixa entre os limites de quantificação superior e inferior do 
método analítico.
 Normalmente é derivado do estudo de linearidade e depende da aplicação pretendida do 
método.
 É estabelecido pela confirmação de que o método apresenta exatidão, precisão e linearidade 
adequados quando aplicados a amostras contendo quantidades de substância dentro do 
intervalo especificado.
 Na determinação quantitativa do analito em matérias-primas 
ou em produtos prontos.
Intervalo
 Limite de detecção (LD) é a menor concentração do analito em uma amostra, que pode ser 
detectada, mas não necessariamente quantificada, sob determinadas condições 
experimentais. Existem muitos critérios para definição do limite de detecção. 
 O limite de detecção é estabelecido por meio da análise de soluções de concentrações 
conhecidas e decrescentes do analito, até o menor nível detectável. 
Limite de Detecção
 Limite de quantificação (LQ) do método analítico é a menor concentração do analito que 
pode ser determinada com precisão e exatidão, aceitável, sob determinadas condições 
experimentais.
Limite de Quantificação
 A precisão é a avaliação da proximidade dos resultados obtidos em uma série de medidas de 
uma amostragem múltipla de uma mesma amostra. Esta é considerada em três níveis.
Repetibilidade (precisão intracorrida): 
 Concordância entre os resultados dentro de um curto período de tempo com o mesmo 
analista e mesma instrumentação. 
Precisão
Precisão intermediária (precisão intercorridas):
 Concordância entre os resultados do mesmo laboratório, mas obtidos em dias diferentes, 
com analistas diferentes e/ou equipamentos diferentes.
 Para a determinação da precisão intermediária recomenda-se um mínimo de 2 dias 
diferentes com analistas diferentes.
Precisão
Reprodutibilidade (precisão interlaboratorial): 
 Concordância entre os resultados obtidos em laboratórios diferentes como em estudos 
colaborativos, geralmente aplicados à padronização de metodologia analítica, por exemplo, 
para inclusão de metodologia em farmacopeias. 
 Estes dados não precisam ser apresentados para a concessão de registro.Precisão
 É a concordância entre o resultado de um ensaio e o valor de referência aceito como 
convencionalmente verdadeiro.
 A exatidão (tendência) de um método analítico é geralmente determinada pelo estudo de 
materiais de referência relevantes.
Relação entre
Exatidão
Valor observado/valor esperado
 Determinando a Exatidão para um ativo.
 Aplicando-se a metodologia analítica proposta na análise de uma substância de pureza 
conhecida (padrão de referência). 
 Comparação dos resultados obtidos com aqueles resultantes de uma segunda metodologia 
bem caracterizada, cuja exatidão tenha sido estabelecida. 
Exatidão
 Exemplos
 Preparo das Amostras
 Estabilidade das soluções analíticas
 Tempo de extração
 Espectrofotometria
 Variação do pH da solução
 Temperatura
 Diferentes fabricantes de solventes
Robustez
 Cromatografia Líquida
 Variação do pH da fase móvel
 Variação na composição da fase móvel
 Diferentes lotes ou fabricantes de colunas
 Temperatura
 Fluxo da fase móvel 
 Cromatografia Gasosa
 Diferentes lotes ou fabricantes de colunas
 Temperatura
 Velocidade do gás de arraste
Robustez
Segundo a RDC 166 de 2017, o grau de concordância entre os resultados individuais, obtidos 
por um método em estudo, em relação a um valor de referência aceito como verdadeiro é 
avaliado através de qual parâmetro?
Interatividade
 A exatidão é o parâmetro que avalia a concordância de um valor, frente a um valor de 
referência considerado de referência.
Resposta
 AVALIAÇÃO
O aluno produzirá dois ou três trabalhos ao longo do semestre:
 1 - O primeiro trabalho consiste na elaboração de um relatório com o objetivo de demonstrar 
como é elaborado e interpretado um laudo de calibração de uma vidraria, instrumento de 
medição ou equipamento que será escolhido pelo aluno, baseada nas diretrizes da Anvisa, 
Inmetro e ABNT. 
 O(s) aluno(s) deverá(ão) buscar na internet ou em outra fonte 
um laudo de calibração do instrumento ou equipamento 
escolhido, e interpretá-lo.
Desenvolvendo o Relatório
 Para a segunda postagem, o grupo deverá escolher um método analítico, utilizado na 
determinação do teor de um ativo, na Farmacopeia Brasileira 6ª Edição e descrever todas as 
etapas para que o mesmo torne-se validado. 
 O método escolhido pode ser um método instrumental ou não. 
 O(s) aluno(s) deverá(ão) elaborar e discutir um relatório final para a validação do método 
analítico escolhido. 
Desenvolvendo o Relatório
 Se o aluno não atingir pontuação necessária para a aprovação, este precisará preparar a 
atividade 3, que consiste em apresentar um artigo científico em formato de revisão de 
literatura que contenha a descrição de: 
a) Guias, manuais e regulações da Anvisa, Inmetro, ABNT e demais órgãos regulatórios que 
preconizam a validação de métodos analíticos e calibração de instrumentos de medição.
b) Comparar os documentos do Inmetro com o documento da Anvisa na validação de 
métodos analíticos, 
c) Identificar indicação de revalidação de método analítico;
d) Apresentar as Normas ABNT utilizadas como referência de 
erro de vidrarias classe A e classe B.
Desenvolvendo o Relatório
Os relatórios devem apresentar o conteúdo da seguinte forma:
1. CAPA (modelo a seguir). (disponível no Manual da disciplina)
2. RESUMO
3. INTRODUÇÃO
4. DESENVOLVIMENTO DO RELATÓRIO
5. CONCLUSÃO
6. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Desenvolvendo o Relatório
 Relatório
 Elaboração do resumo
 O resumo do relatório deve ser o suficiente para que o leitor tenha uma ideia geral do 
relatório.
 O Resumo por si só deve ser capaz de responder às seguintes questões: 
 Porque você realizou o relatório (Objetivos ou Questões 
identificadas) 
 O que foi realizado por você no relatório? (Procedimentos e 
Métodos Adotados): não detalhe os materiais utilizados, 
concentre-se em descrever procedimentos realizados. 
Desenvolvendo o Relatório
 O texto do resumo pode ser redigido em parágrafo único, contanto que o mesmo seja 
sintético e respeite o limite MÁXIMO de 500 palavras.
O texto do resumo NÃO deve:
a) incluir agradecimentos ou mencionar apoiadores do relatório.
b) desenhos, diagramas ou tabelas. 
 Palavras-chave são palavras ou termos essenciais ou 
representativos do projeto. 
 Ao escolher estas palavras ou termos, pense naqueles que 
imediatamente podem ser associados ao seu relatório. 
Desenvolvendo o Relatório
 Elaboração da Introdução 
 É a parte do trabalho em que o assunto é apresentado como um todo, sem detalhes. 
A introdução deve: 
a) Estabelecer o assunto de forma sucinta sem deixar dúvidas. Evidenciar o período de 
abrangência do relatório, incluindo informações sobre a natureza e a importância do tema; 
b) Indicar os objetivos, a finalidade e a justificativa do trabalho; 
c) Destacar os tópicos principais do texto, dando o roteiro ou a 
ordem de exposição, exceto os resultados obtidos.
Desenvolvendo o Relatório
d) Motivos, por exemplo, que levaram a escolher a metodologia analítica para validar. 
e) Apresentar os objetivos, ou seja, o que se pretende com o desenvolvimento do trabalho e 
quais resultados se procura alcançar; 
f) Apresentar a justificativa que consiste na apresentação das razões de ordem teórica e/ ou 
prática que justificam a realização do relatório.
Desenvolvendo o Relatório
 Elaboração do Desenvolvimento
 É o momento em que o relatório se desenvolve.
 No Manual da disciplina, os alunos poderão encontrar as diretrizes relativas a cada projeto, 
bem como orientação para desenvolver a investigação para cada projeto.
Desenvolvendo o Relatório
 Conclusão do Relatório
 Deve estar alinhada com os objetivos da proposta do Relatório. 
 Deve ser sucinta e elaborada com as próprias palavras.
Desenvolvendo o Relatório
 Elaboração das referências bibliográficas 
 Regras ABNT
 Todas as obras citadas no artigo acadêmico devem estar referenciadas na bibliografia. 
 As informações exigidas para uma referência, em ordem, são: autor, título da obra, local, 
editora e data de publicação. 
 FULANO, D.; SICLANO, T.; BELTRANO, G. Título em negrito. 
Cidade de publicação: Editora, ano.
Desenvolvendo o Relatório
***ATENÇÃO! 
 Para o relatório, o grupo deve seguir estritamente as orientações constantes no manual 
dessa disciplina. 
 Qualquer relatório diferente do que está sendo aqui proposto poderá levá-lo à reprovação.
Desenvolvendo o Relatório
 Tema: Parâmetro Precisão na validação de um método analítico.
 Atividade: Verificar se um método é preciso pela avaliação de um dos requisitos requeridos 
pela RDC 166 de 2017: Avaliação da Repetitividade.
 Atividade Individual: Uso de calculadora .
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ATÉ A PRÓXIMA!