BIOLOGIA MOLECULAR - AOL 2

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Wanderson Lemos 
Nota final 
1 
1. Pergunta 1 
O conhecimento do código genético, caracterizado pelas sequências especificas de 
nucleotídeos, foi fundamental para o desenvolvimento das tecnologias do DNA. 
Encontrar ferramentas que fragmentassem esse DNA nessas sequências especificas 
para permitir a manipulação desse código foi imprescindível na época. 
Sobre as ferramentas que possibilitaram isso é correto: 
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1. Um grande salto para as tecnologias do DNA foi a descoberta das enzimas 
bacterianas conhecidas como enzimas de restrição, porém essa técnica é 
pouco aplicável por cortar apenas sequencias curtas. 
2. O homem ainda busca o desenvolvimento de ferramentas que consigam 
clivar o DNA em regiões especificas e que não atuem de forma aleatória 
como a maioria das enzimas atuais. 
3. A descoberta de uma classe de enzimas bacterianas denominadas enzimas 
de restrição, capazes de cortar o DNA em sequencias altamente 
específicas, foi um marco no desenvolvimento das tecnologias do DNA. 
Resposta correta 
4. As enzimas de restrição se mostraram ferramentas importantíssimas 
para utilização como tesouras moleculares, porém sua obtenção a partir 
de bactérias torna essas enzimas não aplicáveis em seres humanos. 
5. A descoberta de tesouras moleculares não é uma prioridade, na 
atualidade, para o desenvolvimento da tecnologia do DNA, visto que o 
grande enfoque no momento e sequenciar e conhecer os genes humanos 
 
2. Pergunta 2 
Até a década de 70 era ainda muito difícil de estudar a molécula de DNA, sequencia-la 
para analisar os genes de forma mais aprofundada. 
Essa questão só ficou melhor após o desenvolvimento de técnicas modernas de 
sequenciamento, os dois métodos que revolucionaram esse campo foram: 
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1. As técnicas de reação em cadeia da polimerase foi a única técnica capaz de 
revolucionar os métodos de sequenciamento de DNA 
2. O método de DNA recombinante foi revolucionário permitindo sequenciar 
um genoma completa de forma rápida, eficaz e com baixo custo. 
3. A metodologias de sequenciamento de Gilbert e Sanger revolucionou a 
forma de se fazer o sequenciamento de DNA. 
Resposta correta 
4. O desenvolvimento das polimerases estáveis permitiu um 
sequenciamento mais seguro e rápido, diferenciando-os das demais 
técnicas. 
5. A técnica de sequenciamento de DNA sofreu pouco avanço nos últimos 
anos, muito devido ao alto custo de sua aplicação. 
 
3. Pergunta 3 
O avanço das tecnologias e métodos para aprimoramento das técnicas de PCR permitiu 
o desenvolvimento de diveros tipos diferentes de PCR. Um dos tipos mais proeminentes 
e mais utilizados é a PCR em tempo real. 
Essa técnica se caracteriza pelo fato de: 
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1. A tecnologia de PCR em Tempo Real (qPCR) é uma evolução do método de 
PCR (Polymerase Chain Reaction ou Reação em Cadeia da Polimerase). Seu 
princípio se baseia na duplicação de cadeias de DNA “in vitro” que pode 
ser repetida diversas vezes, gerando quantidade de DNA suficiente para 
realizar diversas análises. Com apenas um único fragmento de DNA é 
possível reproduzir milhões de cópias. 
Resposta correta 
2. A técnica em tempo real é pouco viável na pratica, sendo por esse motivo 
pouco aplicável em nenhuma área de atuação, se restringindo a pesquisa 
cientifica em institutos apenas.A reação de amplificação do DNA é 
acompanhada de outro fragmento de DNA com concentração conhecida, 
possibilitando a quantificação do alvo em tempo real, por isso a sigla 
qPCR. 
3. A qPCR recebe essa denominação, representada por essa sigla, pelo fato 
da polimerase nessa reação ser especializada permitindo a quantificação 
do fragmento de polimerase. 
4. A PCR em tempo real segue o mesmo padrão da técnica normal, 
possibilitando apenas à amplificação em tempo real, sem permitir a 
quantificação da molécula alvo. 
5. Essa técnica se diferencia por não precisar de um DNA molde para 
amplificação, basta apenas adicionar um DNA de concentração conhecida 
para ele possa ser quantificado durante a reação. 
 
4. Pergunta 4 
A partir da virada do século novas abordagens para o sequenciamento de DNA, que 
romperam totalmente com os métodos de Sanger, foram desenvolvidos. 
Denominados de sequenciamento de nova geração eles apresentam uma superioridade 
sobre as técnicas anteriores, principalmente evidenciados por mudanças como: 
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1. O que diferencia os sequenciamentos de nova geração dos anteriores é a 
quantidade de bases que cada um pode obter, sendo as outras 
características preservadas iguais as técnicas anteriores. 
2. As técnicas de nova geração só receberam esse nome pois utilizam 
sequenciamento automatizado com base em marcadores fluoresecentes 
de baixo custo e alta especificidade. 
3. A velocidade e quantidade de etapas, a baixa concentração das amostras 
de DNA e o custo extremamente baixo são as mudanças mais significativas 
das tecnologias de nova geração. 
Resposta correta 
4. A única mudança realmente significativa das técnicas de nova geração 
foram as baixas concentrações nas quais as técnicas podem ser realizadas, 
tendo a possibilidade de usar pequenas quantidades de DNA. 
5. As mudanças que as técnicas na nova geração apresentam é somente o 
baixo custo, já que o método de sequenciamento é apenas uma adaptação 
da metodologia de Sanger. 
 
5. Pergunta 5 
A reação de cadeia da polimerase – PCR, além de tecnologias para seu funcionamento 
precisou do estudo e identificação de uma série de variáveis que impactam diretamente 
na eficácia dessa técnica. 
Sobre as etapas fundamentais para realização da PCR é correto afirmar: 
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1. Pelo fato de a PCR estar ainda em fase experimental ainda não há um 
protocolo totalmente estabelecido para realização dessa técnica, sendo 
possível adaptar a diversos outros protocolos 
2. A PCR consiste em três etapas que são a desnaturação da proteína para 
abertura da fita de DNA, ligação dos iniciadores sintéticos e ampliação 
através de enzima Taq DNA polimerase. 
Resposta correta 
3. Enzimas conhecidas como polimerases são as principais responsáveis 
pela amplificação do DNA por adicionarem os pares complementares, por 
isso são os únicos fatores indispensáveis para a PCR. 
4. As etapas para realização da PCR não estão relacionadas com a obtenção 
das cópias de DNA sendo essas dispensáveis para realização de todo o 
processo de amplificação. 
5. Para a realização da PCR não é necessário quebrar, ou seja, desnaturar a 
dupla fita de DNA, sendo totalmente possível amplificar os fragmentos de 
DNA mesmo mantendo sua estrutura de dupla hélice. 
 
6. Pergunta 6 
A manipulação do DNA envolve um conjunto de técnicas que estão inseridos na 
disciplinada denominada biologia molecular, e se empenham em estudar e desenvolver 
formas de isolar, clonar, manipular e estudar o DNA dos organismos vivos. 
Em relação ao histórico desse procedimento realizado pelo homem podemos afirmar: 
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1. A manipulação do DNA pelo homem não é um processo recente sendo 
realizado há muitos séculos atrás, através de cruzamentos seletivos para 
obtenção de características o homem “domesticou” várias espécies. 
Resposta correta 
2. O homem, apesar do desenvolvimento tecnológico na área de 
manipulação genética, só consegue atualmente isolar um gene para 
estuda-lo, não tendo esse procedimento uma aplicação muito prática na 
sociedade. 
3. As técnicas de manipulação são extremamente recentes só sendo capazes 
de serem desenvolvidas após o conhecimento detalhado da estrutura e 
composição do DNA e dos genes como um todo. 
4. A tecnologia do DNA é a composição de técnicas que permitem o homem 
apenas estudar o DNA e os genes nos ambientes acadêmicos, dentro dos 
institutos de pesquisa. 
5. Através da manipulação do DNA a ciência deu um grande salto do 
entendimento do código genético, contudo o custo e complexidadedas 
técnicas fizeram com que elas não fossem levadas adiante. 
 
7. Pergunta 7 
Os métodos automatizados aprimoraram a técnica de Sanger trazendo um 
desenvolvimento ainda maior dos processos de sequenciamento do DNA. 
Entre os fatores que tornam o método automatizado melhor do que o tradicional 
podemos citar: 
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1. O uso de marcadores fluorescente permitiu um sequenciamento mais 
seguro que o radioativo e mais rápido por ser feito através de leitura 
automatizada. 
Resposta correta 
2. A única característica que a diferencia do método de Sanger é a utilização 
de marcadores fluorescentes. 
3. O uso de marcadores radioativos é característico das técnicas 
automatizadas, permitindo uma leitura mais eficaz. 
4. O sequenciamento automatizado rompeu totalmente com o método de 
Sanger aplicando procedimentos totalmente novos. 
5. O alto custo da automatização é um fato que impossibilitou o uso desse 
tipo de técnica em larga escala. 
8. Pergunta 8 
O sequenciamento do genoma de organismos vivos dependeu de uma série de fatores 
que vão desde o desenvolvimento de tecnologias até a evolução do conhecimento sobre 
biologia molecular e das características intrínsecas da molécula de DNA. 
O estudo do genoma contribui: 
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1. Apenas na identificação de genes mutantes capazes de causar doenças 
genéticas em humanos, sendo outras aplicações que não sejam essas 
impossíveis de serem desenvolvidas. 
2. O sequenciamento de DNA genômico por completo, por ser extremamente 
complexo, ainda não foi totalmente possível, sendo necessário maior 
investimento e desenvolvimento nessa área. 
3. A genômica é uma área da ciência focada no estudo da natureza química 
dos genes dos diversos organismos vivos, sem se preocupar com a ordem 
das sequencias nas quais eles estão dispostos. 
4. No diagnóstico de microrganismos patogênicos que impactam a saúde, 
sendo o estudo do genoma focado somente nesta área da medicina, visto 
seu potencial de aplicação. 
5. Na identificação de genes capazes de causar doenças genéticas, no 
entendimento dos processos evolutivos e na medicina através da 
prevenção, diagnóstico e formas de tratamento para diversas doenças. 
Resposta correta 
9. Pergunta 9 
A clonagem de um gene é um conjunto de técnicas que permite isolar uma sequência de 
DNA e amplificá-la para uma aplicação desejada. As técnicas do DNA recombinante são 
bastante usadas para esse fim, isso até o desenvolvimento das técnicas atuais de 
amplificação. 
Sobre as técnicas atuais para amplificar sequencias de DNA, podemos afirmar: 
Ocultar opções de resposta 
1. A amplificação do DNA é um procedimento ainda em experimentação, por 
isso somente utilizado nos institutos de pesquisa científica. 
2. Na atualidade, a reação em cadeia da polimerase – PCR é uma alternativa 
ainda pouco usada para amplificar DNA, devido a sua alta complexidade. 
3. A técnica denominada reação em cadeia da polimerase – PCR vem 
substituindo os métodos de DNA recombinante por serem mais rápidos, 
sensíveis e baratos. 
Resposta correta 
4. As técnicas de DNA recombinante ainda são as mais utilizadas para 
amplificar fragmentos de DNA, visto nenhuma outra técnica melhor foi 
desenvolvida. 
5. Os processos para amplificar fragmentos de DNA ainda são pouco usados 
devido a sua complexidade e alto custo. 
 
10. Pergunta 10 
O método de PCR já é bem estabelecido com uma técnica de vanguarda na biologia 
molecular e que apresenta muitas vantagens em relação ao processo anterior de 
amplificação do DNA, por isso sendo aplicado em vários campos do conhecimento. 
Sobre o diferencial que essa técnica apresenta podemos citar: 
Ocultar opções de resposta 
1. A rapidez com que é feita a replicação do DNA através da PCR é seu grande 
diferencial, contudo a seletividade dessa técnica ainda é muito baixa. 
2. O grande diferencial é apenas poder realizar a replicação in vito, sendo 
um processo tão demorado e custoso como os anteriores. 
3. A grande diferença da técnica de PCR é que ela capaz de replicar grandes 
pedaços de DNA com o auxílio de células especificas. 
4. O processo para amplificar DNA com base na PCR é diferente do anterior 
pois é feito uma parte in vitro e outra com a utilização de células. 
5. A PCR é capaz de replicar sequencias do DNA in vitro sem a necessidade 
do uso de células e com grande rapidez e seletividade. 
 
 
 
 
 
 
 
 
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