Cromatografia - Análises Farmacêuticas

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Cromatografia 
 
 
Princípio básico 
 Separação dos componentes de uma mistura (amostra) por interação diferencial 
entre uma fase estacionária (líquido ou sólido) e uma fase móvel (líquido ou gás). 
Classificação 
 Forma física do sistema: 
♥ Cromatografia em coluna (clássica, CLAE ou CG); 
♥ Cromatografia planar (em papel ou CCD). 
 Estado físico da fase móvel (líquida, gasosa ou supercrítica); 
 Estado físico da fase estacionária (líquida ou sólida); 
 Polaridade relativa das fases (fase normal ou fase reversa); 
 Mecanismos de separação: 
♥ Processos físicos (adsorção ou partição); 
 → na adsorção a amostra irá ser adsorvida pela fase estacionaria, com isso ela 
migra pela coluna até chegar ao detector. Na partição a amostra terá uma afinidade 
pela fase estacionária de acordo com o coeficiente de partição ou solubilidade. 
♥ Processos químicos (troca iônica ou bioafinidade); 
 → na troca iônica tem-se compostos com cargas e a fase estacionária terá 
cargas também, então o produto irá migrar pela coluna de acordo com a troca de 
cargas com a fase estacionária da coluna. Na bioafinidade tem-se colunas bem 
específicas, geralmente do tipo antígeno-anticorpo, que atuam de forma específica. 
♥ Processos mecânicos (exclusão). 
 → na exclusão a fase estacionária das colunas funciona como uma peneira 
molecular, que vai adsorver compostos de uma determinada massa molecular. 
Cromatografia em camada delgada (CCD) 
Princípio 
 Um analito migra através de uma camada de fase estacionária sob a influência 
de uma fase móvel através da ação da capilaridade. 
 
Aplicação 
♥ Determinação de impurezas em matérias-primas; 
♥ Identificação de matérias-primas; 
♥ Análise quantitativa (CCDAE). 
Fase estacionária 
♥ Sílica gel; 
♥ Sílica gel F254 (com agente fluorescente); 
♥ Celulose. 
Fase móvel (eluente)
♥ Hexano; 
♥ Tolueno; 
♥ Dietil éter; 
♥ Diclorometano; 
♥ Butanol; 
♥ Clorofórmio; 
♥ Acetato de etila; 
♥ Acetona; 
♥ Metanol; 
♥ Etanol; 
♥ Acetonitrila; 
♥ Ácido acético; 
♥ Água. 
Detecção 
♥ Luz UV (cromóforos); 
♥ Reagentes (iodo e permanganato de potássio). 
Resposta 
♥ Determinação do fator de retenção (Rf): 
𝑅𝑓 =
𝑏
𝑎
 
a: altura que o solvente migrou; 
b: altura que a amostra migrou. 
 
 
 
 
Vantagens 
♥ Simplicidade e robustez; 
♥ Detecção visual após reação química; 
♥ Detecção densitométrica pode ser considerada uma técnica quantitativa; 
♥ Pode ser automatizada. 
Desvantagens 
♥ Ausência de quantificação no processo não automatizado; 
♥ Sensibilidade limitada; 
♥ Não apropriaa para compostos voláteis. 
Cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) 
É um sistema fechado onde a fase móvel, líquida, é bombeada sob pressão 
através de uma coluna contendo fase estacionária. As substâncias a serem analisadas 
são introduzidas na coluna através de uma válvula. O monitoramento do efluente da 
coluna pode ser realizado através de uma variedade de detectores. 
Os compostos eluídos são transportados pela fase móvel até o detector e 
registrados como picos. O conjunto de picos originados por uma amostra é denominado 
cromatograma.