EXERCÍCIO IMUNOENSAIOS

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EXERCÍCIO IMUNOENSAIOS
Questão 01: Um laboratório de controle de qualidade recebeu duas amostras de soro, do mesmo paciente, porém de diferentes fases da doença com um intervalo de 6 meses entre as coletas. As amostras foram submetidas a dois ensaios imunoenzimáticos (ELISA) para detecção do antígeno viral circulante. Ambos os kits estão dentro da validade, com todos os reagentes em perfeita ordem e a única diferença entre eles é que o teste de ELISA 1, utiliza anticorpos monoclonais (específicos para um único epítopo ou determinante antigênico) para a detecção do antígeno, enquanto o ELISA 2, utiliza anticorpos policlonais (vários anticorpos, cada um específico para um epítopo ou determinante antigênico). Na tabela abaixo encontram-se os resultados obtidos:
	Teste imunoenzimático
	ELISA 1 (anticorpos monoclonais)
	ELISA 2 (anticorpos policlonais)
	1ª amostra (doença ativa)
	+
	+
	2ª amostra (curado)
	Neg
	+
Porque na 2ª amostra analisada, quando o paciente já estava curado, o teste de Elisa 1 deu negativo e o Elisa 2 deu positivo? Explique. 
Questão 02: Foi realizada a pesquisa de anticorpos anti-HBV (vírus da hepatite B), utilizando a técnica de Imunoeletroforese em 3 pacientes. As proteínas A, B são exclusivas do HBV, mas as proteínas C e D são comuns entre o HBV e o HDV (vírus da hepatite D). A amostra é considerada positiva, quando se detectam duas linhas específicas. 
a. Sabendo das informações acima descritas, libere o resultado dos 3 pacientes analisados. 
b. Interprete os resultados 
Questão 3: Você está trabalhando em um laboratório de desenvolvimento e diagnóstico animal. Para o diagnóstico da infecção bovina pelo vírus XXX, você utiliza a técnica de Imunodifusão Simples radial. O ponto de corte da técnica é: 1:16, e C+ é o controle positivo e C- controle negativo. O resultado de dois animais está representado abaixo:
Animal 01 Animal 02
a. Libere o resultado dos dois animais. 
b. Interprete o resultado dos dois animais.
Questão 4: Você é o analista responsável pela sorologia do laboratório XXX, localizado em uma cidade do interior, sem grandes recursos para realização de técnicas marcadas como RIFI e ELISA. Hoje, chegou uma paciente, gestante com suspeita de toxoplasmose. Você enviou a amostra para outro laboratório, na capital, mas resolveu realizar a técnica, diluindo a amostra em diluente com e sem beta-mercaptoetanol, e o resultado encontrado foi: Sem -mercaptoetanol: reagente 1:64 e com -mercaptoetanol: reagente 1:8. Qual o resultado do paciente? Justifique.
 
Questão 5: As técnicas de hemaglutinação constituem um método auxiliar amplamente utilizado em laboratório. Durante a execução desta técnica, algumas variações são empregadas, dependendo do kit utilizado. Uma das variações mais comuns é a utilização de uma solução diluente acrescida de solução de albumina. Qual a finalidade desta modificação. 
Questão 6: Na detecção de um antígeno de baixa freqüência de expressão, qual técnica você escolheria: RID ou RIFI? Justifique. RIFI porque ela é mais sensível que a RID. 
Questão 7: O que pode acontecer se você esquecer a etapa de lavagem entre as etapas da Reação de Imunofluorescência ou de ELISA? Justifique. 
Questão 8: P.S.D., sexo feminino 25 anos, procurou seu clínico geral, apresentando sintomatologia suspeita de leishmaniose aguda. O médico fez um pedido para pesquisa de IgM e IgG anti-Leishmania. A paciente foi ao laboratório, onde a sorologia foi feita usando a RIFI. No laboratório foi adotada a seguinte conduta: 
· 1º Teste: RIFI usando conjugado anti-IgM e anti-IgG. Resultado: IgM: não reagente; IgG: reagente. 
· 2º Teste: O soro da paciente foi tratado com soro de carneiro contra cadeia gama humana. Resultado: IgM: reagente; IgG: não reagente. 
a) Qual a finalidade de se usar o soro de carneiro contra cadeia gama humana? 
b) O que poderia ter acontecido no caso acima descrito? 
c) Qual o resultado correto da paciente? 
Questão 9: Você trabalha em uma empresa de produção de kits de ELISA para laboratórios clínicos. Ao testar um novo kit, onde os antígenos usados eram as glicoproteínas gp63 da Leishmania braziliensis, você adicionou o antígeno, incubou “overnight”, e no dia seguinte, lavou e adicionou soro sabidamente positivo e negativo, para realização da técnica. A partir da adição das amostras, os procedimentos foram corretamente executados, mas ao final da reação, tanto as amostras controle positivo, quanto as negativas reagiram. O que pode ter acontecido? Justifique. 
A
B
C
D
A
B
C
D
A
B
C
D
Paciente 1
Paciente 2
Paciente 3