Métodos de estudo em Patologia

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Métodos de estudo em Patologia
Exames citológico
Colpocitológico : Câncer colo do uterino 
Coleta de amostras:
raspado da pele ou de mucosa ex cervicovaginal 
Secreção 
Líquido 
Punção aspirativa 
Exame anatomopatológico
Biópsias: Ablasivas, excisionias 
Biopsia incisional 
Biopsias especiais:
endoscopia
curetagem
Com aparelhos(coloscopia, ultra-sonografia, cerebral estereotaxica)
Análise morfológica
Patologista faz a dissecação, e o exame macroscópico das amostras, obtendo fragmento para estudo histopatológico
Desidratação 
Diafinização em xilol
Impregnação
Inclusão em parafina
Corantes para os principais componentes das células 
Necropsia 
Imunohistoquímica: Uso de anticorpos para detecção de antígenos presentes em células e tecidos
Ag+AC
Imunofluorescência: Direta ou indireta
Imunoenzimatica: Enzima atua sobre o substrato gerando composto colorido no local da reação 
mecanismo básico da imuno-histoquímica é o reconhecimento do antígeno a ser pesquisado por um anticorpo específico, associado a diversos tipos de processos de visualização. Cada anticorpo reconhece apenas um único antígeno, que pode ser, por exemplo, uma proteína de uma célula normal ou neoplásica ou de um microrganismo. A técnica usual utiliza um anticorpo secundário, que se liga ao anticorpo primário e é associado a um complexo de visualização (complexo avidina-biotina-enzima-cromógeno ou polímero com amplificação). 
O cromógeno mais utilizado é o DAB
Utilizada na análise de neoplasias principalmente, onde alterações histopatológicas são discretas ou imperceptível por outro métodos 
a)classificação de neoplasias 
b)receptores de hormônio
c)fatores de crescimento em tumores 
d)detecção de enzimas em determinados órgãos(fosfatse ácida prostática)
e) diagnostico de doença parasitárias ( vírus, bactérias, fungos, protozoários)
Cultura de células
Análise do metabolismo
Estudos em virologia
Pode ser utilizado RNA antisense para bloquear a síntese de terminada proteína 
Análise fisiológica, bioquímicas e genéticas
Obtenção de anticorpos monoclonal
Análise citogenética 
Citometria
Citofotometria: coloração de um componente ou substância celular num esfregaço por histoquímica:
Material corado(feixe de luz(Sensor capta a quantidade e intensidade de luz que chega Permite avaliar os constituintes celulares em células normais e alteradas pelo processo patológico
Nas lâminas marcadas com CD-34, observou-se no endotélio a mesma cor castanha para as regiões coradas e a cor azul para as não coradas (Figura 2). 
 
Citometria de fluxo. As células são tratadas com um fluorocrômico que se liga a estrutura de interesse. Utilizada para pesquisa de diferentes constituintes celulares 
A intensidade do fluorocrômico é captada pelo e transferida para um computador que calcula e fornece o resultado
As células são geralmente coradas com um ou mais corantes, específicos aos componentes de interesse da célula, por exemplo, DNA, e a fluorescência de cada célula é medida rapidamente pelo feixe de excitação transversa (laser ou lâmpada de arco de mercúrio). A fluorescência provê uma medida quantitativa de várias propriedades bioquímicas e biofísicas das células, bem como uma base para separação das células. Outros parâmetros óticos incluem absorção e difusão da luz, a última sendo aplicável a medidas de tamanho, forma, densidade, granularidade e compreensão da coloração da célula
Morfometria: Estudo quantitativo
medida das dimensões dos tecidos, células e seus constituintes normais ou patológico
fornece análise alterações do volume celular e nuclear
determinação da superfície absortiva da mucosa intestinal
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Estudo das alterações relacionadas com a idade na pele humana, utilizando métodos de histo-morfometria e autofluorescência 
VOLUME 78 - Nº4 : Investigação clínica, epidemiológica, laboratorial e terapêutica 
Figura 1
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	Espécimes de pele dos grupos jovem (A) e idoso (B) corados pelo tricrômio de Van Giesonelastina, x200, em que as fibras elásticas são observadas em preto. Note-se a clara fragmentação das fibras elásticas ao longo da derme com o envelhecimento. Na derme superficial, o aparelho elástico perdeu quase completamente sua disposição vertical na pele senil. 
Figura 2 
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	Espécimes de pele corados por H&E, mostrando autofluorescência na derme superficial e média nos grupos jovem (A) e idoso (B), x200. Notem-se a redução considerável do contraste fluorescente na derme média (asterisco) e um componente fluorescente mais evidente no sítio da membrana basal na pele senil (seta). 
Figura 3 
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	Espécimes de pele dos grupos jovem (A) e idoso (B) corados por H&E, x100. No-temse o achatamento rogressivo da junção epidermo- dérmica com o envelhecimento e a redução da acidofilia na derme média (asterisco), refletindo a redução da densidade de fibras 
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	Diagrama ilustrando o método para análise morfométrica da epiderme, derme e superfície de contato epidermo-dérmica. Em cada amostra de pele, foram feitas 10 medidas da superfície da epiderme até a junção epidermederme, sendo cinco medidas na crista epidérmica (posicionando a ocular milimetrada conforme demonstrado na reta tracejada mar-cada com a letra a), e cinco medidas no nível da papila dérmica (conforme demonstrado com a letra b). Da mesma forma, foram feitas 10 medidas ao longo da derme em cada amostra de pele, sendo cinco medidas na papila dérmica (conforme demonstrado com a letra A), e cinco medidas no nível da crista epidérmica (conforme demonstrado com a letra B) até o limite da derme com a hipoderme (representada pelo limite inferior da figura). As médias a-ritméticas das 10 medidas da epiderme ou da derme por amostra foram utilizadas para o cál-culo da média de cada grupo. A extensão da superfície de contato epidermo-dérmica foi esti-mada pela soma das medidas realizadas ao longo de 20mm de comprimento de cada prepara-do histológico, pelo posicionamento da ocular milimetrada tangencialmente às irregularidades da borda epitélio-conjuntiva conforme demonstrado nas retas marcadas com os algarismos 1 
Auto-Radiografia: Identificação de material radioativo
a)3H no estudo divisão celular 
b) cortes histológicos ou esfregaço preparado com isótopos radioativo
Técnicas de Biologia molecular
a)Permite analisar alterações moleculares que precedem as alterações morfológicas
b) auxilia no diagnóstico e classificação de muitas doenças
c)diagnóstico precoce e tratamento mais eficaz
Hibridização molecular: Baseado na estrutura do DNA
Hibridização
Sonda: Segmento conhecido de DNA ou RNA, obtido por clonagem molecular ou síntese química. 
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