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The scheme shows the sequence of reactions that defines part of the TCA. The dosage of the succinate dehydrogenase enzyme activity is an experiment...

The scheme shows the sequence of reactions that defines part of the TCA. The dosage of the succinate dehydrogenase enzyme activity is an experiment that evidences Complex II. Explain the experimental strategy and answer the questions.
Explain the experimental strategy to measure the activity of the succinate dehydrogenase enzyme.
What is the role of each component in the assay tubes?
What is the expected result for each assay tube?

Essa pergunta também está no material:

3 ED Metabolismo (1)
4 pág.

Bioquímica I Universidade Federal do Rio de JaneiroUniversidade Federal do Rio de Janeiro

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A estratégia experimental para medir a atividade da enzima succinato desidrogenase (SDH) é baseada na capacidade da enzima em catalisar a oxidação do succinato a fumarato, com a redução simultânea do aceptor de elétrons, o FAD (dinucleotídeo de flavina e adenina), a FADH2. A redução do FAD é acompanhada pela formação de um produto colorido, o formazan, que pode ser quantificado por espectrofotometria. Os componentes em cada tubo de ensaio são: - Tubo 1: Controle negativo, sem succinato, para verificar se a cor do formazan é gerada pela SDH ou por outros componentes do ensaio. - Tubo 2: Controle positivo, com succinato e sem inibidor, para verificar se a SDH está funcionando corretamente. - Tubo 3: Ensaio com succinato e rotenona, um inibidor específico da SDH, para verificar se a atividade da SDH é inibida. - Tubo 4: Ensaio com malonato, um inibidor competitivo da SDH, para verificar se a atividade da SDH é inibida. O resultado esperado para cada tubo é: - Tubo 1: Não deve haver formazan, pois não há succinato para ser oxidado pela SDH. - Tubo 2: Deve haver formazan, indicando que a SDH está funcionando corretamente. - Tubo 3: Não deve haver formazan, pois a rotenona inibe a atividade da SDH. - Tubo 4: Deve haver formazan, pois o malonato é um inibidor competitivo da SDH e não afeta a formação do formazan.

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