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SM2 Biologia Molecular As técnicas de sequenciamento de Nova Geração (NGS) baseiam-se em uma amplificação clonal antes da reação de sequenciamento em si. No entanto, cada equipamento utiliza uma técnica diferente de amplificação clonal. Sobre estas técnicas, assinale a opção correta. A B Uma das técnicas utilizadas é a PCR em ponte, na qual as fitas de DNA são dispersas em uma placa, aleatoriamente, e a PCR é realizada através de pareamento de bases com fitas de DNA presentes nesta placa; esta técnica é utilizada na metodologia do sequenciador 454 (pirosequenciamento). A PCR em emulsão é uma técnica utilizada na metodologia do sequenciador 454 (pirosequenciamento) e consiste em uma emulsão de água, em uma fase oleosa, formando gotículas de água que contêm os reagentes de PCR, uma fita de DNA a ser sequenciada e uma "bead" para sua ancoragem. C D Uma das técnicas utilizadas é a PCR em ponte, na qual as fitas de DNA são dispersas em uma placa aleatoriamente e a PCR é realizada através de pareamento de bases com fitas de DNA presentes nesta placa; esta técnica é utilizada na metodologia do sequenciador Sanger. A PCR em emulsão é uma técnica utilizada na metodologia do
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Vamos analisar as opções apresentadas sobre as técnicas de amplificação clonal utilizadas nas metodologias de sequenciamento de Nova Geração (NGS). A) A PCR em ponte é descrita corretamente, mas a afirmação de que é utilizada na metodologia do sequenciador 454 (pirosequenciamento) está incorreta. O sequenciador 454 utiliza a PCR em emulsão. B) A PCR em emulsão é corretamente descrita como uma técnica utilizada na metodologia do sequenciador 454 (pirosequenciamento), mas a descrição da PCR em ponte está incorreta, pois não é utilizada no sequenciador 454. C) A PCR em ponte é novamente descrita incorretamente, pois não é utilizada na metodologia Sanger, que utiliza uma abordagem diferente. D) A opção não está completa, mas a PCR em emulsão é uma técnica correta para o sequenciador 454. Diante da análise, a opção que apresenta a descrição correta da PCR em emulsão e sua aplicação no sequenciador 454 é a B. Portanto, a resposta correta é a B.

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