[Laboratório Virtual Extração e Purificação de DNA e RNA] As amostras contendo o DNA ou RNA purificados devem ser: 1) ressuspensas em um tampão e armazenadas em tubos, ambos "livres" de enzimas que possam degradá-las (como DNAse ou RNAse nucleases); e 2) mantidas em baixas temperaturas (-20 °C ou Todos os procedimentos devem ser realizados com luvas para evitar a degradação das amostras, devido à presença de nucleases nos fluidos corporais das mãos.
De acordo com o processo de extração de DNA e RNA, associe os itens, utilizando o código a seguir:
I- Pipete 25 da Proteinase K no tubo Eppendorf. Em seguida, pipete 200 da amostra de sangue no mesmo tubo, e por último pipete 200 do tampão lise S no tubo. Tampe o Eppendorf e homogeneíze no Vórtex por 20 segundos. Após esse tempo, incube o Eppendorf por 15 min.
II- Pipete 210 de álcool 96% no Eppendorf e homogeneíze de novo no Vórtex. Em seguida, pipete 640 do Eppendorf para o tubo spin e centrifugue a 11.000 rpm por 1 minuto.
III- Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 500 µl do tampão de lavagem SI no tubo spin e centrifugue novamente. Repita o mesmo processo de troca de tubo de coleta, porém a lavagem irá utilizar 600 µl no tampão de lavagem SII, e centrifugue novamente. Por fim, repita o mesmo processo da troca do tubo de coleta e centrifugue novamente.
IV- Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 200 µl do tampão de eluição S no tubo spin, espere 1 minuto e centrifugue a amostra.
( ) Etapa de Lise.
( ) Etapa de Ligação.
( ) Etapa de Eluição.
( ) Etapa de Lavagem.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
I- Pipete 25 da Proteinase K no tubo Eppendorf. Em seguida, pipete 200 da amostra de sangue no mesmo tubo, e por último pipete 200 do tampão lise S no tubo. Tampe o Eppendorf e homogeneíze no Vórtex por 20 segundos. Após esse tempo, incube o Eppendorf por 15 min.
II- Pipete 210 de álcool 96% no Eppendorf e homogeneíze de novo no Vórtex. Em seguida, pipete 640 do Eppendorf para o tubo spin e centrifugue a 11.000 rpm por 1 minuto.
III- Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 500 µl do tampão de lavagem SI no tubo spin e centrifugue novamente. Repita o mesmo processo de troca de tubo de coleta, porém a lavagem irá utilizar 600 µl no tampão de lavagem SII, e centrifugue novamente. Por fim, repita o mesmo processo da troca do tubo de coleta e centrifugue novamente.
IV- Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 200 µl do tampão de eluição S no tubo spin, espere 1 minuto e centrifugue a amostra.
A II III IV I.
B I II III IV.
C IV III II I.
D I II IV III.
E III IV II I.