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[Laboratório Virtual Extração e Purificação de DNA e RNA] Os ácidos nucleicos apresentam características estruturais específicas que permitem que sejam isolados e manipulados para diversos tipos de aplicações. A técnica de hibridização in situ, por exemplo, baseia-se na complementaridade das fitas de DNA ou RNA, utilizando sondas fluorescentes para a detecção da fita complementar em uma determinada amostra. Essa técnica permite o estudo da expressão gênica. Outra técnica, que também tem o mesmo princípio e finalidade, é a reação em cadeia da polimerase transcriptase reversa (RT-PCR), muito utilizada no diagnóstico de algumas infecções e doenças. Nesse sentido, o primeiro passo para a maioria das técnicas citadas é o isolamento e purificação das moléculas de DNA e RNA. O processo de extração do DNA pode ser dividido em etapas. Com relação às etapas visualizadas na aula prática,
assinale a alternativa CORRETA:
A principal composto adicionado na etapa de ligação é a Proteinase K.
A etapa de lavagem ocorre quando o eppendorf é retirado da centrifuga e o tampão de eluição S é adicionado ao tubo spin.
A primeira etapa é a etapa de lise, em que adicionamos 25 de Proteinase K, 200 da amostra e 200 µl do tampão de lise S.
D A primeira etapa é denominada como Etapa de Ligação, em que é adicionado o SI no tubo spin e é centrifugado novamente.
E Na etapa de lavagem, são adicionados 210 de álcool 96%.
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Desafios para Aprender

há 3 horas

Respostas

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há 3 horas

Vamos analisar as alternativas com base no processo típico de extração de DNA: - Proteinase K é geralmente adicionada na etapa de lise para digerir proteínas e liberar o DNA, não na etapa de ligação. - A etapa de lavagem normalmente ocorre para remover impurezas antes da eluição; o tampão de eluição é adicionado após a lavagem, não durante ela. - A primeira etapa costuma ser a lise, onde se adiciona Proteinase K, amostra e tampão de lise, conforme descrito. - A etapa de ligação envolve a ligação do DNA à matriz do tubo spin, geralmente após a lise e antes da lavagem. - Álcool 96% é usado na etapa de ligação para ajudar o DNA a se ligar à matriz, não na lavagem. Portanto, a alternativa correta é: C) A primeira etapa é a etapa de lise, em que adicionamos 25 µl de Proteinase K, 200 µl da amostra e 200 µl do tampão de lise S.

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[Laboratório Virtual Extração e Purificação de DNA e RNA] As amostras contendo o DNA ou RNA purificados devem ser: 1) ressuspensas em um tampão e armazenadas em tubos, ambos "livres" de enzimas que possam degradá-las (como DNAse ou RNAse nucleases); e 2) mantidas em baixas temperaturas (-20 °C ou Todos os procedimentos devem ser realizados com luvas para evitar a degradação das amostras, devido à presença de nucleases nos fluidos corporais das mãos.
De acordo com o processo de extração de DNA e RNA, associe os itens, utilizando o código a seguir:
I- Pipete 25 da Proteinase K no tubo Eppendorf. Em seguida, pipete 200 da amostra de sangue no mesmo tubo, e por último pipete 200 do tampão lise S no tubo. Tampe o Eppendorf e homogeneíze no Vórtex por 20 segundos. Após esse tempo, incube o Eppendorf por 15 min.
II- Pipete 210 de álcool 96% no Eppendorf e homogeneíze de novo no Vórtex. Em seguida, pipete 640 do Eppendorf para o tubo spin e centrifugue a 11.000 rpm por 1 minuto.
III- Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 500 µl do tampão de lavagem SI no tubo spin e centrifugue novamente. Repita o mesmo processo de troca de tubo de coleta, porém a lavagem irá utilizar 600 µl no tampão de lavagem SII, e centrifugue novamente. Por fim, repita o mesmo processo da troca do tubo de coleta e centrifugue novamente.
IV- Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 200 µl do tampão de eluição S no tubo spin, espere 1 minuto e centrifugue a amostra.
( ) Etapa de Lise.
( ) Etapa de Ligação.
( ) Etapa de Eluição.
( ) Etapa de Lavagem.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
I- Pipete 25 da Proteinase K no tubo Eppendorf. Em seguida, pipete 200 da amostra de sangue no mesmo tubo, e por último pipete 200 do tampão lise S no tubo. Tampe o Eppendorf e homogeneíze no Vórtex por 20 segundos. Após esse tempo, incube o Eppendorf por 15 min.
II- Pipete 210 de álcool 96% no Eppendorf e homogeneíze de novo no Vórtex. Em seguida, pipete 640 do Eppendorf para o tubo spin e centrifugue a 11.000 rpm por 1 minuto.
III- Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 500 µl do tampão de lavagem SI no tubo spin e centrifugue novamente. Repita o mesmo processo de troca de tubo de coleta, porém a lavagem irá utilizar 600 µl no tampão de lavagem SII, e centrifugue novamente. Por fim, repita o mesmo processo da troca do tubo de coleta e centrifugue novamente.
IV- Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 200 µl do tampão de eluição S no tubo spin, espere 1 minuto e centrifugue a amostra.
A II III IV I.
B I II III IV.
C IV III II I.
D I II IV III.
E III IV II I.

Como acadêmico da área da saúde e estudante na disciplina molecular, você conseguiu compreender a importância do RNA para transmissão da informação genética. Abaixo, é demonstrado uma sequência específica de RNA: AUG UAC CCC GCC. Os códons AUG resultam no aminoácido Metionina (Met), o UAC na Tirosina (Tyr), o CCC na Prolina (Pro) e o GCC na Alanina (Ala).
Considerando essas informações, assinale a alternativa CORRETA:
A A sequência de RNA apresentada é um exemplo de DNA e não pode ser transcrita em proteína.
B A sequência de RNA apresentada codifica para os aminoácidos Metionina-Tirosina-Prolina-Alanina.
C A sequência de RNA apresentada codifica para os aminoácidos Metionina-Tirosina-Prolina-Prolina.
D A sequência de RNA apresentada é complementar à sequência de DNA TACATGGGCAAA.
E A sequência de RNA apresentada não é suficiente para determinar os aminoácidos correspondentes.

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