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Também é sintetizada por fosforilação do glicerol, produzido pela hidrólise de gorduras através da enzima glicerol cinase, após o qual pode entrar nas vias de glicólise ou gliconeogênese.
O glicerol 3-fosfato (G3P) e o di - hidroxiacetona fosfato (DHAP) são moléculas tão pequenas que podem permear a membrana mitocondrial externa através de proteínas do tipo porina, iniciando-se entre as duas desidrogenases. Usando esse sistema de vaivém, o NADH gerado pelo metabolismo citosólico, incluindo a glicólise, pode ser re-oxidado para NAD +, reduzindo simultaneamente o DHAP para o G3P e os equivalentes de redução podem ser usados para gerar um gradiente de prótonsatravés da membrana mitocondrial interna, acoplando a oxidação de G3P à redução de uma quinona.
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