Exercícios de estágio aula de hemaglutinação

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EXERCÍCIOS DE ESTÁGIO AULA DE HEMAGLUTINAÇÃO
1- Qual o princípio do teste de hemaglutinação?
A reação de HAI se baseia na aglutinação de hemácias sensibilizadas com antígeno de determinado patógeno, em presença de soro contendo anticorpos contra esse patógeno, chegando ao diagnóstico sorológico.
2- Qual suporte é empregado?
Hemácias de aves estabilizadas
3- Qual tipo de placa é usada em um teste de hemaglutinação?
Placa de microtitulação – produzida, geralmente, em poliestireno transparente 
com 96 cavidades ou em tiras (strips) de 8 ou 12 cavidades, com fundo em V ou em U
4- O que foi adicionado ao suporte (hemácias) nos testes de Doença de Chagas e Toxoplasmose?
Doença de Chagas – Anticorpos anti Chagas
Toxoplasmose – anticorpos anti Toxoplasmose
5- O que é um controle C+?
O Controle positivo produz uma resposta ou um efeito desejado no experimento.
6- O que é um controle negativo C-?
O controle negativo deve ser projetado de forma que não produza o resultado desejado do experimento.
7- Qual a finalidade (função) do emprego dos controles (C+ e C-) em uma reação imunológica?
O controle positivo é um tratamento experimental que resulta no efeito desejado que o pesquisador espera. O controle negativo é um tratamento experimental que não resulta no efeito desejado da variável experimental.
8- Descreva a técnica de hemaglutinação (procedimento).
1- Em tubo de ensaio, diluir a amostra a 1/40 a ensaiar e os soros controle posotivo e negativo, adicionando: 10 µl de amostra + 0,4 mL de diluente.
2- Adicionar na microplaca a partir da 2º cavidade 50 µl de diluente.
3- Transferir 50 µl da amostra diluída para a 1º cavidade.
4- Transferir 50 µl da amostra diluída a 2º cavidade e homogeneizar e transferir 50 µl para a 3º cavidade, homogeneizar e transferir 50 µl para a 4º cavidade e assim sucessivamente até a 8º cavidade, em que após a homogeneização 50 µl serão desprezados.
5- Homogeneizar bem a suspensão de hemácias, por agitação delicada do frasco e adicionar 25 µl a cada cavidade.
6- Bater levemente nas laterais da placa para homogeneização dos reagentes
7- Deixar a placa em repouso por 1 hora a temperatura ambiente, em locais isento de vibrações
8- Efetuar leitura ao final da incubação.
9- Após a análise dos controles positivos e negativos em cada teste, é possível validar a reação?
Sim, para validar o teste deve-se encontrar nas mesmas condições de leitura o título do soro positivo indicado na etiqueta ± 1 diluição.
10- Como é determinado o título em uma amostrta no teste de HAI?
O título será a maior diluição que ainda fornecer um resultado positivo. Para validar o teste deve-se encontrar nas mesmas condições de leitura o título do soro positivo indicado na etiqueta ± 1 diluição.
11- Indique o título das amostras.
Título do teste A Doença de Chagas 1:640
Título do teste B Toxoplasmose 1:512