Aula 3 - Meios de Cultivo

Prévia do material em texto

MEIOS DE CULTIVO:
CLASSIFICAÇÃO E COMPOSIÇÃO
Professor Dsc. Raphael Cardoso Rodrigues
Meios de Cultivo
 Crescimento Microbiano: MEIOS DE CULTURA
 O cultivo dos microrganismos, em condições laboratoriais, é um
pré-requisito para seu estudo adequado. Para que isto possa
ser realizado, é necessário o conhecimento de suas
exigências físicas e nutritivas.
 Estas informações resultaram no desenvolvimento de
numerosos meios de cultura. Por causada grande diversidade
das exigências nutritivas das bactérias, há, também, grandes
diferenças na composição dos meios utilizados.
 Meios de Cultura: É qualquer substância, sólida, semissólida ou
líquida, que possua um conjunto de fontes de nutrientes e que
seja utilizada para o cultivo de microrganismos.
Meios de Cultivo
 Crescimento Microbiano: MEIOS DE CULTURA
 Meios de Cultura: podem ser classificados segundo o seu estado físico, em
função da adição de agentes solidificantes, pela sua composição e pelo seu
objetivo de utilização.
◼ De acordo com o agente solidificante
Tipo de Meio Característica
Meios Sólidos
Onde são adicionados geralmente de 1,0 g a 3,0 g % de ágar (podem
ser liquefeitos se aquecidos). A maioria dos microrganismos crescem
formando colônias. Ex. Ágar Nutritivo
Meios Semissólidos
Onde são adicionados, geralmente, de 0,1g a 0,7g% de ágar. Servem,
por exemplo, para visualizar a motilidade bacteriana ou, muitas vezes,
como base de meio de transporte. Ex: Meio SIM e Cary & Blair.
Meios Líquidos
Sem adição de ágar. São os chamados caldos”. Sua turvação é sinal de
crescimento bacteriano. Ex: Caldo nutritivo, caldo simples e caldo Casoy.
Meios de Cultivo
 Crescimento Microbiano: MEIOS DE CULTURA
◼ De acordo com a composição química
Tipo de Meio Característica
Meios Sintéticos A composição química de todos os seus componentes é conhecida
Meios Complexos
A composição química de alguns dos seus componentes é desconhecida
(geralmente quando se adiciona soro, sangue ou outro componente que
não se tem total conhecimento da composição química).
Os meios podem ser totalmente preparados no laboratório,
seguindo formulações (receitas), ou a partir de meios
dessecados (geralmente só adiciona-se água). Em ambos os
casos, a água utilizada deve ser limpa, recém destilada e
neutra.
Meios de Cultivo
 Crescimento Microbiano: MEIOS DE CULTURA
◼ De acordo com o objetivo
Tipo de Meio Característica
Meios Básicos
São os de uso geral e podem ser usados como base no preparo de
outros meios. O caldo simples é o exemplo mais comum.
Meios Enriquecidos
Nestes meios, a adição de sangue, soro, extratos de tecidos animais ou
vegetais ao caldo, ou ágar nutritivos, proporciona nutrientes acessórios,
passando a permitir o crescimento de organismos mais exigentes
nutricionalmente (heterotróficos fastidiosos)
Meios Seletivos
A adição de substâncias químicas específicas ao caldo ou ao ágar
nutritivo previne o crescimento de um grupo de bactérias sem agir sobre
outro. Ex. Cristal violeta inibe crescimento de gram positivas
Meios Diferencial
A adição de certos reagentes ou substâncias no meio pode resultar num
tipo de crescimento ou reação, após a inoculação e a incubação, que
permite ao observador distinguir diferentes tipos de bactérias.
Meios de Cultivo
 Crescimento Microbiano: MEIOS DE CULTURA
◼ De acordo com o objetivo
Meios de Cultivo
 Crescimento Microbiano: MEIOS DE CULTURA
◼ De acordo com a aplicação
Para Transporte e Conservação Para Crescimento e Isolamento Para Provas de Identificação
Cary Blair
Salina Tamponada
Meio Stuart
Ágar nutriente
Ágar Chocolate
Ágar Thayer-Martin Chocolate
Ágar Salmonella-Shigella (ss)
Caldo Selenito
Caldo Tetrationato
Caldo Tioglicolato com indicador
Caldo Tioglicolato sem indicador
Ágar Mac Conkey
Ágar Sangue
Ágar CLED – cystine lactose electrolyte
deficient
Caldo BHI – brain heart infusion
Löwenstein Jensen
Meio bifásico: Löwenstein e Middlebrook
Ágar Mycosel
Ágar Sabouraud
Base de nitrogênio para leveduras – Yeast
Nitrogen Base
Ágar Citrato Simmons
Ágar Bílis-Esculina
Ágar Sangue - CAMP
Caldo base de Moeller
Ágar Dnase
Ágar Esculina
Ágar Fenilalanina
CTA – Cystine Tryticase Agar
Caldo Triptona e SIM
Meio Caldo Triptona
Caldo Malonato
Caldo Nitrato
Meio base para oxidação e fermentação OF
Ágar TSI – triplo açúcar ferro
Ágar base uréia (christensen)
Meios de Cultivo
 Stuart
◼ A carência de uma fonte de nitrogênio impede consideravelmente
a multiplicação de microrganismos e a composição nutritiva
garante a sobrevivência deles.
◼ Transporte de diversos materiais e consequente conservação dos
microrganismos. Conservação de microrganismos patogênicos
como: Haemophilus spp., Streptococcus pneumoniae, Salmonella spp.,
Shigella spp. entre outros.
◼ O uso para lesões abertas é o mais comum, mas também é
empregado para coleta de material de ouvido, nasofaringe e
orofaringe, secreção vaginal, entre outros.
◼ Presença de Azul de Metileno: indicador de anaerobiose
 MEIOS DE CULTURA: Para Transporte e Conservação
Meios de Cultivo
 Cary Blair
◼ Meio de Cary Blair foi formulado a partir do meio de Stuart, uma
vez que microrganismos patogênicos e outros coliformes fecais
sobrevivem bem nesse meio.
◼ O que difere esse meio do meio de Stuart é a adição de uma
solução salina balanceada de tampão fosfato inorgânico e a
retirada da fórmula o azul de metileno.
◼ Microrganismos d boa conservação: Escherichia coli, Enterobacter
aerogenes, Klebsiella pneumoniae, Salmonella sorotipo typhimurium,
Shigella flexneri, Vibrio cholerae, entre outros.
◼ Utilizado para o transporte de material fecal
 MEIOS DE CULTURA: Para Transporte e Conservação
Meios de Cultivo
 Procedimento para utilização do Meio Stuart e Cary Blair
 MEIOS DE CULTURA: Para Transporte e Conservação
Meios de Cultivo
 Ágar Nutriente
◼ Tem várias aplicações no laboratório de Microbiologia, e pode ser
utilizado para análise de água, alimentos e leite como meio para
cultivo preliminar das amostras submetidas a exames
bacteriológicos e isolamento de organismos para culturas puras.
◼ Uso mais frequente é para a conservação e manutenção de
culturas em temperatura ambiente nesse Ágar, como método
opcional para os laboratórios que não dispõem do método da crio
conservação (congelamento das cepas em freezer à – 70ºC).
◼ Usado para observar esporulação de bacilos Gram-positivos.
 MEIOS DE CULTURA: Para Transporte e Conservação
Meios de Cultivo
 Salina Tamponada
◼ Contém NaCl, fosfato dipotássico anidro, Glicerina bidestilada e água destilada.
Meio líquido tamponado que mantém a bactéria viável. Meio de transporte de
fezes
 MEIOS DE CULTURA: Para Transporte e Conservação
Meios de Cultivo
 MEIOS DE CULTURA: Para Crescimento e Isolamento
 Ágar Chocolate.
◼ É amplamente utilizado para o cultivo de microrganismos
exigentes (dentre eles os fastidiosos como Neisseria spp. e
Haemophilus spp.), embora cresçam nesse meio quase todos os
tipos de microrganismos.
◼ À base do meio é adicionado sangue de cavalo, carneiro ou
coelho e levado para “achocolatar” em banho-maria a 80-85°C
por 15 minutos, o que faz com que as hemácias lisem, liberando
hemina e hematina, compostos fundamentais para o crescimento
dos microrganismos exigentes.
◼ Crescimento de microrganismos exigentes Haemophilus spp.,
Neisseria spp., Branhamella catarrhalis e Moraxella spp.
Meios de Cultivo
 MEIOS DE CULTURA: Para Crescimento e Isolamento
 Ágar Chocolate - Interpretação
◼ Colônias de tamanho pequeno a médio, com pigmento amarelo: sugestivo de
Neisseria spp, Branhamella catarrhalis ou Moraxella spp. Colônias pequenas e
delicadas, com pigmento creme claro: sugestivo de Haemophilus spp.
Fazer esfregaço de todas as colônias
suspeitas e corar pela técnica de
Gram, para confirmar se trata ou não
de Neisseria spp., Branhamella
catarrhalis ou Moraxella spp. (cocos
Gram-negativos reniformes) ou
Haemophilus spp. (bacilos Gram-
negativos delicadose pleomórficos).
Meios de Cultivo
 MEIOS DE CULTURA: Para Crescimento e Isolamento
 Ágar Chocolate Thayer - Martin
◼ É um meio rico e superior a outros meios de cultivo destinados
para o isolamento de Neisseria gonorrhoeae e Neisseria
meningitidis, pois contém em sua fórmula antibióticos que inibem
o crescimento de bactérias do gênero Neisseria saprófitas e outras
bactérias, quando em amostras colhidas de sítios contaminados.
◼ Colônias pequenas com pigmento creme: sugestivo de Neisseria
gonorrhoeae e Neisseria meningitidis.
◼ Fazer esfregaço de todas as colônias suspeitas e corar pela
técnica de Gram, para confirmar se trata ou não de Neisseria
(diplococos Gram-negativos reniformes). Confirmando a
morfologia pelo Gram, seguir identificação com testes de
oxidase e provas de fermentação.
Meios de Cultivo
 MEIOS DE CULTURA: Para Crescimento e Isolamento
 Ágar Salmonella - Shigella (SS)
◼ Ágar SS possui componentes (sais de bile, verde brilhante e citrato
de sódio) que inibem microrganismos Gram-positivos.
◼ A incorporação de lactose ao meio permite diferenciar se o
microrganismo é lactose positiva (bactérias que fermentam a
lactose produzem ácido que na presença do indicador vermelho
neutro resultando na formação de colônias de cor rosa), e
bactérias que não fermentam a lactose formam colônias
transparentes.
◼ Tiossulfato de sódio e o citrato férrico permitem a detecção de
H2S evidenciado por formação de colônias de cor negra no
centro.
Meios de Cultivo
 MEIOS DE CULTURA: Para Crescimento e Isolamento
 Ágar Salmonella - Shigella (SS) - Interpretação
Cor original do meio: vermelho alaranjado.
• Colônias com centro negro (H²S) ou colônias incolores: suspeita de Salmonella.
• Colônias incolores: suspeita de Shigella spp.
• Colônias cor de rosa ou vermelho: suspeita de Escherichia coli ou Klebsiella spp.
• As bactérias não fermentadoras de lactose são incolores.
• As bactérias fermentadoras de lactose aparecem na cor rosa.
Meios de Cultivo
 MEIOS DE CULTURA: Para Crescimento e Isolamento
 Ágar Salmonella - Shigella (SS) - Interpretação
A – Klebsiella pneumoniae
B – Escherichia coli
C – Salmonella sp.
D – Proteus mirabilis
E – Pseudomonas aeruginosa
Meios de Cultivo
 MEIOS DE CULTURA: Para Crescimento e Isolamento
 Ágar Mac Conkey
◼ O cristal violeta inibe o crescimento de microrganismos Gram-positivos
especialmente enterococos e estafilococos. Isolar bacilos Gram-negativos
(enterobactérias e n fermentadores) e verificar a fermentação ou não da lactose.
◼ A concentração de sais de bile é relativamente baixa em comparação com outros
meios, por isso não é tão seletivo para Gram-negativos como, por exemplo, o
Ágar SS.
Meios de Cultivo
 MEIOS DE CULTURA: Para Crescimento e Isolamento
 Ágar Mac Conkey - Interpretação
◼ Cor original do meio: rosa avermelhado.
◼ Crescimento de bacilos Gram negativos.
◼ Colônias cor de rosa: fermentadoras de lactose.
◼ Colônias incolores: não fermentadoras de lactose.
◼ Não há crescimento de cocos Gram positivos.
Lactose Positiva: Klebsiela, Enterobacter, Echerichia coli
Lactose Negativa: Salmonella, Pseudomas, Proteus e Shigella
Meios de Cultivo
 MEIOS DE CULTURA: Para Crescimento e Isolamento
 Ágar Sangue
◼ Oferece ótimas condições de crescimento a maioria dos microrganismos. A
conservação dos eritrócitos íntegros favorecem a formação de halos de hemólise
nítidos, úteis para a diferenciação de Streptococcus spp. e Staphylococcus spp.
◼ Usado para o isolamento de microrganismos não fastidiosos.
◼ Usado na prova de satelitismo (para identificação presuntiva de Haemophilus spp.)
Meios de Cultivo
 MEIOS DE CULTURA: Para Crescimento e Isolamento
 Ágar Sangue - Interpretação
◼ Cor original do meio: vermelho.
◼ Beta hemólise: halo transparente ao redor das colônias (lise total dos eritrócitos).
◼ Alfa hemólise: halo esverdeado ao redor das colônias (lise parcial dos eritrócitos).
◼ Gama hemólise: ausência de halo ao redor das colônias (eritrócitos íntegros).
Streptococcus pyogenes Streptococcus pneumoniae
Enterococcus faecalis
Staphylococcus epidermidis
Staphylococcus aureus
Meios de Cultivo
 MEIOS DE CULTURA: Para Crescimento e Isolamento
 Ágar Sangue - Interpretação
◼ Cor original do meio: vermelho.
Meios de Cultivo
 MEIOS DE CULTURA: Para Crescimento e Isolamento
 Ágar Sangue - Interpretação
◼ Cor original do meio: vermelho.
Klebsiella spp.E. coli
Meios de Cultivo
 MEIOS DE CULTURA: Para Crescimento e Isolamento
 Ágar Manitol
◼ Usado para o isolamento de Staphylococcus aureus de amostras biológicas como
urina, secreções, feridas e exudatos. Também usado na indústria alimentícia para o
isolamento e identificação de estafilococos em líquidos e produtos lácteos, carnes e
derivados, incluindo conservas e pescados.
◼ A degradação do manitol: muda a cor do meio de rosado a amarelo.
Meios de Cultivo
 MEIOS DE CULTURA: Para Crescimento e Isolamento
 Ágar CLED - Cystine Lactose Electrolyte Deficient
◼ Meio de crescimento microbiano inespecífico. Usado para isolamento e
quantificação de microrganismos presentes em amostras de urina. Isolar e
quantificar microrganismos Gram positivos, Gram negativos e leveduras.
Meios de Cultivo
 MEIOS DE CULTURA: Para Crescimento e Isolamento
 Ágar CLED - Cystine Lactose Electrolyte Deficient - Interpretação
◼ Cor original do meio: azul claro.
◼ Colônias lactose positiva: cor amarela (E. coli).
◼ Colônias lactose negativa: cor azul (Proteus).
Meios de Cultivo
 MEIOS DE CULTURA: Para Crescimento e Isolamento
 Ágar CLED - Cystine Lactose Electrolyte Deficient - Interpretação
Meios de Cultivo
 MEIOS DE CULTURA: Para Crescimento e Isolamento
 Ágar CLED - Cystine Lactose Electrolyte Deficient - Interpretação
Microrganismo Característica da colônia
Escherichia coli Colônias amarelas opacas
Espécies de Klebsiella Colônias mucoides amarelas
Espécies de Proteus Colônias azul translucida
Espécies de Salmonella Colônias planas azuis
Enterococcus faecalis Colônias amarelas
Staphylococcus aureus Colônias amarelas
Staphylococcus coagulase negativa Colônias amarelo palha e branca
Corynebacterium Colônias pequenas e cinza
Pseudomonas aeruginosa Colônias verdes
Meios de Cultivo
 MEIOS DE CULTURA: Para Crescimento e Isolamento
 Meio Agar EMB - Eosin Methylene Blue
◼ Meio para diferenciação ligeiramente seletivo utilizado para o isolamento e
diferenciação de bacilos entéricos gram-negativos (enterobactérias e outros
bastonetes gram-negativos) provenientes de amostras clínicas.
◼ Contém corantes de eosina e azul de metileno que inibem as bactérias gram-
positivas num determinado grau. Os corantes funcionam também como indicadores
de diferenciação em resposta à fermentação da lactose e/ou sacarose por micro-
organismos.
Coliformes produzem colônias pretas-azuladas
Salmonella e Shigella são incolores ou têm uma cor âmbar transparente
Escherichia coli poderão apresentar um reflexo verde metalizado característico
Meios de Cultivo
 MEIOS DE CULTURA: Para Crescimento e Isolamento
 Meio Agar EMB - Eosin Methylene Blue
Meios de Cultivo
 Meios de Cultura para Crescimento e Isolamento:
 Caldo BHI - Brain Heart Infusion
◼ É um meio derivado de nutrientes de cérebro e coração, peptona e dextrose
◼ Meio para cultivo de estreptococcos, pneumococos, meningococos, enterobactérias,
não fermentadores, leveduras e fungos.
◼ Pode ser utilizado na preparação do inóculo para teste de susceptibilidade aos
antimicrobianos, para realização de teste de coagulase em tubo, para teste de
crescimento bacteriano a 42 e 44°C e para teste de motilidade em lâmina.
Meios de Cultivo
 Meios de Cultura para Crescimento e Isolamento:
 Meio Agar Sabouraud
◼ Meio com nutrientes que favorece o crescimento de diversos fungos leve duriformes e
filamentosos. Cultivo e crescimento de espécies de Candidas e fungos filamentosos,
particularmente associados a infecções superficiais.
Meiosde Cultivo
 Meios de Cultura para Crescimento e Isolamento:
 Meio Agar Sabouraud
Meios de Cultivo
 Meios de Cultura para Crescimento e Isolamento:
 Meio Agar Cromogênico
◼ É um meio de cultura, diferenciado e/ou seletivo, que promove a identificação
presuntiva dos principais patógenos que causam a infecção através da detecção,
por agentes cromogênicos específicos, da atividade enzimática bacteriana sobre
determinados substratos.
Meios de Cultivo
 Meios de Cultura para Crescimento e Isolamento:
 Meio Agar Cromogênico: URUCULTURA
Meios de Cultivo
 Meios de Cultura para Crescimento e Isolamento:
 Meio Agar Cromogênico: URUCULTURA
Meios de Cultivo
 Meios de Cultura para Crescimento e Isolamento:
 Meio Agar Cromogênico: ESBL
◼ Meio cromogênico seletivo destinado à detecção rápida de bactérias gram-
negativas, produtoras de enzima ß-Lactamase de Espectro Estendido (ESBL)
Bactéria Resultados
Escherichia coli - ATCC 35218 Crescimento bom com colônias vermelhas
Proteus mirabilis – ATCC 12453 Crescimento bom com colônias incolores de halo marrom
Klebsiella pneumoniae - ATCC 700603 Crescimento bom com colônias azuis metálicas
Staphylococcus aureus – ATCC 25923 Inibição total
Meios de Cultivo
 Meios de Cultura para Crescimento e Isolamento:
 Meio Agar Cromogênico: KPC
◼ Meio cromogênico seletivo destinado à detecção de bactérias gram-negativas
do tipo Klebsiella Pneumoniae Carbapenemase (KPC) resistentes aos
antimicrobianos da classe dos carbapenêmicos.
Bactéria Resultados
Escherichia coli - ATCC 35218 Crescimento bom com colônias vermelhas
Klebsiella pneumoniae – ATCC BAA 1705 Crescimento bom com colônias azuis metálicas
Staphylococcus aureus – ATCC 25923 Inibição total
Meios de Cultivo
 Meios de Cultura para Crescimento e Isolamento:
 Meio Agar Cromogênico: Streptococcus B (S. agalactiae)
◼ Meio cromogênico para isolamento e diferenciação de Streptococcus B
Bactérias Resultados
Streptococcus agalactiae - ATCC 12386 Crescimento bom, colônias malvas
Streptococcus agalactiae - ATCC 13813 Crescimento bom, colônias malvas
Enterococcus faecalis - ATCC 29212 Crescimento bom, colônias azuis
Escherichia coli - ATCC 25922 Inibição total
Candida albicans - ATCC 10231 Inibição total
Streptococcus agalactiae - ATCC 12386 Crescimento bom, colônias malvas
Meios de Cultivo
 Meios de Cultura para Crescimento e Isolamento:
 Meio Agar Cromogênico: MRSA
◼ Meio cromogênico destinado ao isolamento e diferenciação de Staphylococcus
aureus resistente à meticilina (MRSA).
Bactérias Resultados
Escherichia coli - ATCC 25922 Inibição total
Staphylococcus aureus - ATCC 25923 Inibição total
Staphylococcus aureus - ATCC 43300 Crescimento bom de colônias cor de rosa para malvas
Meios de Cultivo
 Meios de Cultura para Teste Antimicrobianos:
 Meio Agar Mueller Hinton
◼ Meio utilizado para a realização do teste de avaliação da resistência aos
antimicrobianos pelos métodos de difusão em disco e E-test para
enterobactérias, não fermentadores, Staphylococcus, Enterococcus sp.
Meios de Cultivo: Preparo e Distribuição
ANVISA: Agencia Nacional de Vigilância Sanitária
Meios de Cultivo: Recomendações Gerais
ANVISA: Agencia Nacional de Vigilância Sanitária
Meios de Cultivo: Controle de Qualidade
ANVISA: Agencia Nacional de Vigilância Sanitária