PPO - extraída da batatinha

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RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA
BIOQUÍMICA 
Estudo da Polifenoloxidase (PPO) extraída da batatinha
Nomes: Alexandra Favato Mat.: 696
 Lorean Rafael 978
 Marcela Queiroz 1553
 Eduardo Reis 2416
Introdução
A polifenoloxidade [PPO(EC1.14.18.1)] é uma enzima cúprica que catalisa dois tipos de rações envolvendo oxigênio. A primeira corresponde à hidroxilação de monofenóis, formando ortodifenóis, com formação de ortoquinonas. A PPO está envolvida no escurecimento de frutas, vegetais, cereais e sementes de leguminosas, causando pela interação da enzima com substratos fenólicos presentes nas plantas, os quais são oxidados a ortoquinonas. As ortoquinonas polimerizam-se facilmente, formando compostos escuros, as melaninas. O escurecimento enzimático pode ser facilmente observado em batata, pêra, pêssego, maçã e cogumelo, quando seus tecidos são cortados e expostos ao ar. Porém, algumas PPO´s como a da banana e a da folha de café, apresentam apenas a atividade de oxidação de ortodifenóis. A atividade fisiológica da PPO está relacionada como sistema de defesa de plantas e com síntese de constituintes da parede celular. 
	As reações enzimáticas são influenciadas pela temperatura, pH, concentração da enzima e do substrato. Para que enzima atinja a sua máxima atividade, é necessário que todos os fatores supramencionados sejam otimizados. Para a PPO, o pH ótimo varia de acordo com a fonte, o substrato e o tipo de tampão usado. Em geral, esta enzima é ativa a faixa de pH de 5 a 7. Entre os seus substratos estão o p-cresol, a tirosina e o ácido p-cúmarico e o catecol, a diidroxifenilalanina e o ácido clorogênico. 
	As reações enzimáticas catalisadas pela PPO ocorrem durante o processamento e armazenamento dos alimentos. O escurecimento enzimático pode alterar o sabor, a aparência e o valor nutritivo. Muitos métodos são utilizados na indústria de alimentos numa tentativa de prevenir esse indesejável escurecimento enzimático, como os de inativação da PPO por tratamento térmico, de adição de ácidos, adição de agentes redutores e de empacotamento de alimentos em atmosfera de nitrogênio ou de CO2. No entanto, o escurecimento enzimático é desejável em alguns alimentos, como café, chá e chocolate.
Objetivo Geral
Ao final da pratica o estudante deverá entender a ação enzimática e suas características como especificidade pelo substrato e efeito da temperatura.
A) Preparar um extrato enzimático.
B) Montar um ensaio enzimático.
C) Conhecer os fatores que afetam a atividade enzimática e saber como controlá-los.
D) Verificar a especificidade da PPO da batatinha em relação ao substrato enzimático.
E) Verificar o efeito da temperatura na atividade da PPO.
Materiais
Matérias biológicos, vidraria e equipamentos
Liquidificador 	 Tubos de ensaio		Pipeta de 1 e 2mL
Batata inglesa Termômetro Banho Maria
Béqueres de 100 e 200mL Erlenmeyer Banho de Gelo 
Peneira de náilon bem fina.
 UNIVERSIDADE FEDERAL DE VIÇOSA 	
	CAMPUS UFV FLORESTAL
Reagentes
Água destilada Hidroquinona Fenol Catecol Tirosina
Glicose Resorcinol Fluroglucinol Àcido caféico 
Tampão fosfato a 0,1 mol L e pH 6,5 
· Os substratos estão na concentração de 0,1 mol L.
Materiais de Segurança
EPI’ s :
Óculos de proteção,
Jaleco,
Reagentes em capela,
Sapato fechado,
Calça jeans.
Resultados
Tabela 1
	Temperatura
	Intensidade de coloração 
	Banho de Gelo
	+++
	Banho Fervente
	+ (precipitou)
Gráfico 1
Tabela 2
	Tubos
	Possíveis substratos da PPO
	Intensidade relativa de coloração
	1
	H20
	+
	2
	Ácido caféico
	++
	3
	Hidroquinona
	+++
	4
	Ácido quínico
	++
	5
	Glicose
	++
	6
	Floroglucinol
	++
	7
	Resorcinol
	++
	8
	Ácido gálico
	++
	9
	Catecol
	+++
	10
	Fenol
	+
	11
	Tirosina
	++
Discussão e Conclusão
Tabela 1 e Gráfico 1: Com esse experimento, percebemos que a atividade enzimática é influenciada pela temperatura. Em baixa temperatura a atividade enzimática é pequena, em 37 °C atinge seu ponto máximo, e com o aumento da temperatura a atividade diminui. Isso nos mostra que ela possui um ponto ótimo de temperatura e atividade máxima.
Tabela 2: Alguns tubos apresentaram coloração mais intensa e outros, menos intensa. Isso se deve à interação da enzima com os substratos fenólicos. Percebemos que os tubos que tiveram coloração mais intensa foram os que apresentaram maior interação entre o substrato e o PPO.
As enzimas apresentam atividade seletiva e reagem de acordo com o arranjo dos compostos.
Referências bibliográficas
RIBON, O. B. Andréa – Práticas de Bioquímica – Viçosa, MG; Ed. UFV, 2007;
CLARK JR, J.M. – Bioquímica Experimental 1. Ed. Zaragoza,1966.
Colunas2	Banho	 de gelo	37 °C	Banho fervente	Colunas1	Banho de gelo	37 °C	Banho fervente	Temperatura
Atividade enzimática