Atividade - Citologia bacteriana

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Atividade 1 – Citologia bacteriana: 
1) Um estagiário do laboratório de Microbiologia recebeu uma lâmina 
contendo esfregaço de Escherichia coli e uma lâmina contendo esfregaço 
de Staphylococcus aureus para serem coradas pela coloração de Gram 
(cristal violeta, lugos, álcool, fucsina diluída). Após fixar os esfregaços 
pelo calor, o estagiário realizou a coloração, porém inverteu a ordem da 
utilização dos corantes (fucsina, álcool diluído, cristal violeta, lugol). Qual 
foi o resultado da coloração observado ao microscópio para E. coli e 
S.aureus? 
Sabe-se que a bactéria Staphylococcus aureus é do grupo dos cocos gram 
positivos em roxos, já a Escherichia coli é do grupo dos bacillus gram 
negativos em rosa-avermelhado. Mas, no caso de inverter a ordem da 
utilização dos corantes (fucsina, álcool diluído, cristal violeta, lugol) ambas as 
bactérias (gram positiva e gram negativa) ficarão roxas. Logo, a bactéria 
Staphylococcus aureus apresentará a mesma coloração roxa (gram positiva), 
mas a Escherichia coli também apresentará coloração roxa (quando sua 
coloração deveria ser rosa-avermelhada, gram negativa). Isso ocorre porque 
na inversão da técnica, após o cristal violeta, o lugol não modifica a 
coloração; Na técnica com sequência normal o álcool que tira a coloração 
roxa da gram negativa, para a safranina corar de rosa-avermelhado. 
 
2) Suponha que você tenha recebido duas culturas de bactérias bacilares, 
uma contendo organismos Gram-positivos e a outra, Gram-negativos. 
Como você poderia fazer a distrinção entre elas empregando: 
a) Microscopia óptica: Na microscopia óptica utilizamos a técnica coloração 
de Gram para diferenciar bacillus gram positivos e gram negativos. Bacillus 
Gram positivos retém o corante cristal violeta-iodo, apresentando coloração 
roxa; enquanto que bacillus Gram negativos retém o corante safranina, 
apresentando coloração rosa-avermelhado. 
 
b) Microscopia eletrônica: Na microscopia eletrônica observamos a 
morfologia das bactérias, que a Gram positiva apresenta camadas mais 
espessas de peptidoglicano e Gram negativa apresenta camadas mais finas de 
peptidoglicano. 
 
c) Análises químicas das paredes celulares: Para análises químicas das 
paredes celulares, observamos que os bacillus gram positivos apresentam 
peptidoglicano e ácidos teicóicos, enquanto que os bacillus gram negativos 
apresentam peptidoglicano, polissacarídeos O, lipídio A e lipopolissacarídeo 
LPS. 
 
3) Qual é a utilidade da coloração de Gram? 
A técnica coloração de Gram é um dos métodos mais utilizados na 
microbiologia, e diferencia as bactérias de acordo com a composição e a 
espessura da camada de peptidoglicano. Essa técnica possui algumas etapas 
em que utilizamos cristais de cristal violeta-iodo e um corante rosa-
avermelhado, a safranina, para visualizar as bactérias. Com isso, conseguimos 
diferenciar em Gram positivas e Gram negativas. Através dessa análise 
podemos caracterizar uma amostra de bactérias, identificação de uma 
infecção,distinguir seu potencial virulento, monitorá-las e meio de combate. 
 
4) Explique os eventos que ocorrem no biofilme: 
 
1)Nessa etapa ocorre a adesão inicial das bactérias para a formação do 
biofilme, ainda é considerada uma fase reversível. 2) Nessa etapa ocorre a 
formação de mais colônias de bactérias e da arquitetura do biofilme, passa 
de reversível para irreversível. 3) Nessa etapa ocorre o desenvolvimento e o 
deslocamento do biofilme (através de fluidos), com isso, ocorre o início de 
novos ciclos com a formação de mais biofilme. 
 
5) Indique em qual fase da figura do biofilme (1, 2 ou 3) os 
microrganismos são mais susceptíveis aos mecanismos de controle 
microbiano (físicos ou químicos) 
A fase inicial do biofilme (etapa 1) é considerada reversível, visto que, ainda 
ocorre a adesão inicial. Logo, os microrganismos são mais susceptíveis aos 
mecanismos de controle microbiano (físicos ou químicos) na fase 1. Em 
algumas situações podemos eliminar o biofilme através do processo mecânico 
(escovação); autoclave; produtos químicos; em cateteres devemos fazer a 
troca por outro, etc.