Resumo Coloração Histologia/Citologia

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RESUMO ANNA CLARA - XXXI 
 
 
 
CITOLOGIA 
 
HISTOLOGIA 
 
PREPARAÇÃO 
1. Coleta do tecido 
 
2. Fixação: evitar a digestão dos tecidos por enzimas 
existentes nas próprias células (autólise) ou em 
bactérias; endurecer os fragmentos; preservar em 
grande parte a estrutura e a composição molecular 
dos tecidos. Fixador mais utilizado= formaldeído – 
formol 4% - 10 a 20x a mais que o volume da peça. 
-Tecido morto porém estável. 
exc.: tecidos sanguíneos. 
 
Fixadores possuem classificação de coagulantes/não 
aditivos (não se ligam as proteínas do tecido) e os 
não coagulantes/aditivos (se ligam e precipitam as 
proteínas). 
 
3. Inclusão: feita em dois processos: 
-desidratação: O objetivo é retirar a água dos 
tecidos para ajudar na sua preservação (a água 
contribui para o acontecimento de várias reações 
químicas que podem degenerar o tecido) feita com 
álcool etílico 70% – não altera a morfologia; 
 
-clarificação: O objetivo é retirar a coloração 
normal para ficar mais fácil a coloração e a 
passagem da luz, também há estabilização, 
ocorrendo simultâneo com a impregnação descolore 
(ficam transparentes). benzol, xitol ou toluol – 
clareamento daquela amostra para facilitar a 
coloração; 
 
-formas com parafina líquida: O objetivo é enrijecer 
o tecido para não ocorrer a perda e nem 
deslocamento de nenhuma parte. Tecido absorve a 
parafina e mantém a morfologia do tecido/estabiliza 
o corte); 
 
-corte: após a solidificação da parafina, o bloco com 
o tecido é levado para o corte no micrótomo. Corte 
muito finos para facilitar passagem da luz. 
 
Obs.: há outra forma de preparar a lâmina que é por 
congelamento e não passa pelo processo de inclusão. 
Usado no ambiente hospitalar. (não inativa as 
enzimas). 
 
COLORAÇÃO 
 
Os cortes se apresentam incolores após a microtomia, 
para que as diferentes estruturas teciduais possam ser 
identificadas ocorre a coloração, obtendo contrastes. 
Para isso são utilizados corantes que possuem 
seletividade quanto aos componentes dos tecidos. 
A coloração não precisa ocorrer necessariamente por 
produtos, pode ocorrer por uma luz que atravessa a 
peça, sendo absorvida sua energia e liberada, depende 
da técnica de coloração utilizada. 
 MICROSCOPIA DE CONTRASTE DE FASE 
Luz bate e algumas células refletem essa luz, 
formando as imagens. Regiões mais densas 
possuem maior índice de refração (não precisa 
passar por todos os processos acima, correndo 
menos risco de afetar a peça). Nessa técnica 
não se utiliza corantes. 
 
MICROSCOPIA CONTRASTE DIFERENCIAL DE 
INTERFERÊNCIA 
 Esta técnica se assemelha a de contraste de fase, mas 
elimina os efeitos de halos (anéis de luz) encontrados. As 
amostras não precisam passar pelas etapas anteriores, 
por isso permite a observação de estruturas 
transparentes e materiais sem coloração. 
Por sua melhor resolução, a visualização da imagem tem 
aparência 3D. Escuro=denso; Mais claro=menos denso 
Diferença de índice de refração 
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 MICROSCOPIA DE FLUORESCÊNCIA 
 Uma fonte de luz de mercúrio sob alta pressão bate 
e excitam as células, que vibram em determinada 
frequência, e emite essa energia absorvida em 
forma de luz. Nesse caso é necessário que a peça 
passe pelas etapas anteriores. 
 
 Filtro de excitação: seletivamente transmite 
uma banda de comprimentos de onda curtos para 
excitar o fluoróforo na amostra. 
 Espelho dicróico: reflete a luz de comprimento 
de onda curto em direção às lentes objetivas e 
amostra, mas transmite a luz fluorescente de 
comprimento de onda longo em direção ao 
detector. 
 Filtro de barreira: transmite a banda de 
comprimentos de onda fluorescentes, mas 
bloqueia qualquer comprimento de onda curto de 
excitação residual. Os comprimentos de onda 
fluorescentes formam então a imagem no olho ou 
na câmera. 
 
 
 
 
 
HISTOQUÍMICA E CITOQUÍMICA 
Muitos corantes se comportam como 
substâncias de caráter ácido ou básico e 
tendem a formar ligações eletrostáticas 
(salinas) com componentes ionizados dos 
tecidos. 
Componentes teciduais que se coram 
com corantes básicos são denominados 
basófilos, acidófilos os que coram 
com corantes ácidos. 
 Corantes ácidos: possuem auxocromo aniônico 
(carga elétrica negativa), 
com afinidade por componentes básicos do 
tecido (catiônico (+)). 
 Corantes básicos: possuem auxocromo 
catiônico (+) com afinidade por 
componentes ácidos dos tecidos (aniônico (-)). 
 
 
 
Principais corantes: 
Alguns corantes 
importantes: 
Giemsa: neutro 
Azul de toluidina: afinidade pelo DNA dos núcleos 
celulares e pelo RNA presente no citoplasma 
Impregnação pela prata: depósitos de metais em organelas e 
tecido nervoso (não é considerado um corante) 
Sudan Black: lipofílico 
Ácidos: Fucsina ácida, azul de anilina e Orange g 
Básico: azul de metileno, verde metil e azul de 
toluidina 
Neutros: Giemsa, sudan black e hematoxilina eosina 
Algumas colorações 
importantes: 
Glicogênio: PAS 
Mastócito: Azul de toluidina 
Plasmócito: Hematoxilina e eosina 
Fibras colágenas: Tricômico de gomori 
Fibras elásticas: Verhoeff ou Nitrato de prata 
Fibras reticulares: Del Rio ou Hortega 
Timo: hematoxilina eosina 
Linfonodo: Hematoxilina e eosina 
Hemácia/basófilo/eosinófilo/linfócito/neutrófilo/monócito: 
Giemsa 
 
Corantes em células 
Hematoxilina Eosina, Feulgen, Papanicolau, Shorr, Giemsa, 
azul de toluidina, metil green-pironina: núcleo e citoplasma. 
 
Fontana-Masson: melanócitos. 
 
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Violeta cresil, azul de toluidina, Golgi (Prata): células do 
tecido nervoso. 
PAS, PAS alcian blue pH 1,0 ou 2,5: secreções celulares. 
AB-safranina, Geimsa, azul de toluidina, sirius red em pH 
10,2: mastócitos e eosinófilos. 
 
Corantes nos elementos da 
matriz extracelular 
PAS: glicoproteínas neutras. 
 
PAS-alcian blue em pH 1,0 ou pH2,5: proteoglicanos. 
 
PAMS, reticulina: glicoproteínas não colagenosas. 
Tricomática de Masson, tricomática de Gomori, 
picrossirius red: elementos fibrosos à base de colágenos 
Resorcina fucsina de Weirgert: fibras do sistema 
elástico 
 
 
 
 
 
Corantes nos tecidos 
específicos 
Tricomática de Masson, tricomática de Gomori, Goldner, 
picrossirius red, reticulina de Gomori: conjuntivo. 
 
Giemsa, reticulina de Gomori: linfóide e mielóide. 
 
Sudan black: adiposo. 
 
Colorações tricromáticas, azul de toluidina: muscular. 
 
Colorações tricromáticas, PAS - alcian blue em pH1,0 ou pH 
2,5: cartilaginoso. 
 
 
 
 
IMUNOCITOQUÍMICA 
Técnica utilizando anticorpos, que reconhecem os 
antídotos específicos, quando isso acontece há uma 
liberação de luz. Essa técnica fornece a localização mais 
exata de uma macromolécula, mas é mais complexo por 
envolver anticorpos. Pode ocorrer de duas maneiras: 
método direto, que é quando um anticorpo reconhecendo 
diretamente um antígeno, ou método indireto, para 
doenças autoimunes (próprio corpo 
produz anticorpos para atacar entre ele), nesse caso 
anticorpo se liga ao outro anticorpo produzido 
naturalmente pelo corpo. No anticorpo(produzido em 
laboratório) tem uma fluorescência que ativa quando ela 
se fixa ao antígeno e dá pra ver no microscópio 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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