Resumo Histologia - Microscopia e Coloração

Prévia do material em texto

Organização das Células em Tecidos e a visualização no microscópio óptico.
Sobre a estrutura e composição bioquímica vale
Compreender o efeito da coloração, seu interior é predominantemente ácido(parte de açúcar e fosfato) ⇨afinidade pelos cátions coloridos ⇨corantes básicos, enquanto que seu citoplasma é levemente alcalino.
◦ Células animais são naturalmente Incolores e transparentes
◦ Os tecidos são normalmente fixados e cortados antes de serem corados e visualizados.
Histórico: A coloração celular foi desenvolvida no final do século XIX → Aplicação dos corantes e melhorias nos microscópios.
Resolução(Nitidez)
→Separação de 2 Objetos como Distintos, influenciado pelo comprimento de Onda.
Etapas da construção de uma lâmina
Etapa 1
1- Fixar: Formoldeído (imobilização após a morte) Ligações Covalentes com G. Aminos proteicos.
2- Lavagem com álcool/xilol (Desidrata e clareia o tecido)
3- Inclusão: "emblocamento" do tecido, uso de ceras e resinas para preenchimento dos espaços vazios.
4-Corte: Micrótomo (fatiador de tecido)
Etapa 2
É mais ampla, no caso do uso do corante orgânico vai depender do tecido que você quer visualizar, ex:
Corpúsculo de Nissl: (Azul de Toluidina)
Celulas Neurais
Aparato de Golgi: (Método de Golgi)
Carboidratos: (Ácido Periódico de Schiff)
Colágeno: (Tricrômico de Masson)
Núcleo Celular: (HeE)
Diferenciação visual Celular:
▶Corantes Orgânicos: 
Afinidades específicas, são os mais comuns. Ex: Hematoxilina e Eosina, Azul de Toluidina, Tricomo.
▶Contraste de fase e interferência: células vivas feixes/frequências de luz microscópica modificada. ex: Fundo claro/Fundo escuro.
↦Microscópio de fluorescência (permite enxergar objetos bem pequenos)
▶Hibridização in situ: 
Agente fluorescente é ligado em um DNA(sonda) para localizar área específica de RNA.
▶Fluorescência: 
Sondas fragmentos proteicos marcados ex:Anticorpos.
Exemplos de estruturas basófilas
Os núcleos têm grupamentos ácidos nos seus ác. nucleicos e por isso são basófilos e se coram em roxo pela hematoxilina e por corantes básicos. – a matriz extracelular da cartilagem possui muitas moléculas com grupamentos ácidos . Outro importante grupo é o dos .
Exemplos de estruturas acidófilas / eusinofilica
O Citoplasma encontra-se em um pH levemente básico, se cora em rosa pela eosina.
OBS: Esta classificação de corantes ácidos e básicos não se aplica a todos corantes e misturas corantes.
Microscópios mais usados em Histologia.
▶Microscopia Óptica(~0,2μm)
O mais padronizado em uso laboratorial, suas partes mais importantes são:ocular, objetiva, revólver, platina, presilhas ou pinças, condensador, coaxiais (macrômetro e micrometro), lâmpada e a base.
▶Microscopia Eletrônica que pode ser de Varredura ou de Transmissão:(alcança à nanometro)
→Leitura a vácuo
→Resolução altíssima, →Reconhecimento de feixe de elétrons sobre campo magnético, (lembra a refração da luz).
→Ultraestrutura de toda célula é observada.
Varredura:Os feixes de luz varrem o campo ideia de 3D.
Transmissão:Única direção, imagem 2D.
Vantagens do uso de capturadores de imagens nos M.O.
➯ Observação por períodos longos;
➯Evita efeitos danosos da exposição prolongada à luz intensa e ao calor;
➯ Visualização de marcações fluorescentes;
➯ Edição da imagem.
▶Hematoxilina-eosina (H&E).
É a coloração mais comum, no entanto é limitada, pois Não cora alguns elementos cel.
Acidófilo vs. Basófilo
ACIDÓFILO
↳(eosina-rosa/vermelho/citoplasma/afinidade carga +)
BASÓLFILO
↳(hematoxilina-roxo/azul/acidos nucleicos/afinidade carga -) e
METACROMASIA
↳(mais de uma para diferentes estruturas/substâncias)
◦A seletividade, ou afinidade se relaciona com a capacidade de proteínas, ac. nucleicos e polissacarídeos de ionizar-se com ácidos ou bases.