RESUMO MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS - JACIRA A MARINHO

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FARMÁCIA
JACIRA ALVES MARINHO LIMA - 201951431995 
FACULDADE DE IMPERATRIZ – FACIMP 
RESUMO: MÉTODOS ANALÍTICOS DE MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS
IMPERATRIZ/MA
 2021
RESUMO
 Contagens de microrganismos pelo Número Mais Provável (NMP) são técnicas que permitem avaliar estatisticamente a quantidade de microrganismos presentes em uma amostra e estimar a proporção viável metabolicamente ativa. Essa técnica pode ser utilizada para estimar a população total ou de um grupo específico de microrganismos, sendo o conjunto de respostas positivas ou negativas considerado para o cálculo estimado final.  Este método é consideravelmente mais sensível que o método de plaqueamento, em relação a quantidade de microrganismos, e o grau de contaminação de matéria fecal.
 A NMP de coliformes em uma amostra é realizada a partir da aplicação da técnica de tubos múltiplos. Esta técnica baseia-se na teoria de que as bactérias presentes em uma amostra podem ser separadas por agitação, resultando em uma suspensão de células bacterianas, uniformemente distribuídas na amostra.
PROCEDIMENTO
1. Lavar as mãos.
2. Abra um frasco de água de diluição tamponada estéril.
3. Homogeneíze a amostra. Inverta o recipiente da amostra em um movimento da cintura para a orelha, aproximadamente 25 vezes (30 segundos).
4. Use uma pipeta estéril sorológica ou automática para adicionar 11 mL de amostra no frasco de água de diluição.
5. Adicione 11 mL da diluição 10x a outro frasco de diluição e misture bem (diluição 100x).
6. Adicione 11 mL da diluição 100x a um terceiro frasco e misture bem (diluição 1000x).
7. Continue fazendo as diluições até atingir o nível de diluição necessário.
ETAPAS DO MÉTODO 
 O exame processa-se por meio de duas etapas (ensaio presuntivo e o confirmativo) de realização obrigatória para todos os tipos de amostras, as 
quais são complementadas, quando indicado, por uma terceira etapa (exame completo).
FASE PRESUNTIVA
 Consiste na semeadura de volumes determinados da amostra em séries de tubos contendo, no fundo, um tubo invertido para coleta de gás (tubo de Durhan). e o meio de cultura apropriado (caldo lst). Os tubos são incubados a 35°C durante 24 a 48 horas e logo após ocorre a identificação dos que tiverem crescimento (positivo) de coliformes totais, resultado identificado pela ocorrência de reação ácida (coloração amarelada) ou produção de gás (retida no tudo de Durhan).
FASE CONFIRMATIVA
 Consiste na transferência de alíquotas com alça de platina dos tubos presuntivos positivos para tubos preparados da mesma forma que no anterior, entretanto contendo caldo verde brilhoso ( CLVBB ). Todos os tubos são incubados a 35°C durante 24 a 48 horas e logo depois identificados os que tiverem crescimento (positivo) de coliformes totais, identificado pela ocorrência de produção de gás nos tubos de Durhan, o gás ocorre por conta da fermentação da lactose, e há a turvação da amostra, quando ocorre a confirmação.
FASE COMPLEMENTAR  
 A realização do teste completo tem por finalidade eliminar os resultados falsos-positivos que podem ocorrer no CLVBB, devido à ação sinérgica de bactérias. Identifica-se coliformes termotolerantes, realiza-se o repique dos tubos presuntivos para outros tubos, contendo meio EC, que deverão ser incubados a 44,5ºC durante 24 horas. 
 O procedimento é finalizado em no mínimo 72 horas para obtenção de resultado positivo para coliformes termotolerantes.Tendo por base o número de tubos positivos em cada uma das diluições e das fases utilizadas, determina-se o número mais provável (NMP), de acordo com tabelas estatísticas.
REFERENCIAS:
https://www.youtube.com/watch?v=v1PrIhzs3dg
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