DETERMINACAO DE SALICILEMIA POR ESPECTROFOTOMETRIA(1)

Prévia do material em texto

Análises Toxicológicas e Ambientais
DETERMINAÇÃO DE SALICILEMIA POR ESPECTROFOTOMETRIA
(MÉTODO DE TRINDER)
Fundamento do método
Método de Trinder método colorimétrico concentração de AS é diretamente proporcional à intensidade de coloração violeta do complexo formado entre o salicilato e os íons férricos, em meio ácido quantificado pela medida da absorbância da luz em 540 nm. 
Emprega-se um único reagente reagente de Trinder constituído de nitrato férrico (fornece os íons férricos), ácido clorídrico e cloreto mercúrico (precipitam as proteínas séricas e proporcionam o meio ácido).
Método muito simples, rápido e pouco oneroso.
A reação de Trinder não é específica para o ácido salicílico (outros salicilatos como salicilamida e ácido metilsalicílico também formam complexos coloridos). 
O ácido acetilsalicílico não sofre reação, mas é considerada desnecessária uma hidrólise prévia da amostra, uma vez que o ácido acetilsalicílico é facilmente hidrolisado in vitro. 
Também não é relevante medir a concentração sérica do ácido AAS inalterado (está presente no sangue em pequena quantidade e é rapidamente hidrolisado a AS durante sua absorção). 
Amostragem
O método é adequado para fluidos em geral: liquor, plasma, soro, sangue total ou urina. 
Na prática, o plasma ou o soro são as amostras indicadas para a quantificação de salicilatos nos casos de uma superdosagem, enquanto a urina pode ser utilizada para testes rápidos (qualitativos).
Reagentes e soluções
· Solução padrão de salicilato (500 mg de ácido salicílico/100 mℓ): dissolver 580 mg de salicilato de sódio em 100 mℓ de água destilada, adicionar gotas de clorofórmio como conservante e manter a solução sobre refrigeração (estável durante 6 meses).
· Reativo cromogênico: misturar 40 g de cloreto mercúrico e 40 g de nitrato férrico, Fe(NO3)3.9 H2O em 850 mℓ de água deionizada. Adicionar 10 mℓ de ácido clorídrico concentrado à solução e completar o volume até 1 ℓ, com água deionizada. Este reagente é estável por 1 ano à temperatura ambiente. 
Equipamentos e acessórios
· Espectrofotômetro na região do visível (540 nm) 
· Agitador (vórtex) 
· Centrífuga
Procedimento analítico
· Transferir para três tubos de centrífuga, respectivamente, 1 mℓ de soro ou plasma (amostra), 1 mℓ da solução padrão adicionada ao branco de soro ou plasma (voluntários não expostos a salicilatos) em concentração correspondente a 20 mg% (controle) e 1 mℓ de branco de soro ou plasma (branco) 
	TUBO 1 (A)
	TUBO 2 (P)
	TUBO 3 (B)
	1 mL amostra
	1 mL padrão + branco
	1 mL branco
· Adicionar 5 mℓ do reagente de Trinder sob agitação (vórtex), agitar por mais alguns segundos e centrifugar (2.000 rpm/5 min) 
	TUBO 1 (A)
	TUBO 2 (P)
	TUBO 3 (B)
	1 mL amostra
	1 mL padrão + branco
	1 mL branco
	5 mL reagente de Trinder
	5 mL reagente de Trinder
	5 mL reagente de Trinder
	Agitação
	Agitação
	Agitação
	Centrifugação 2000 rpm / 5 min
	Centrifugação 2000 rpm / 5 min
	Centrifugação 2000 rpm / 5 min
· Transferir o líquido sobrenadante (que deverá estar límpido) para outros três tubos 
	TUBO 4 (A)
	TUBO 5 (P)
	TUBO 6 (B)
	Sobrenadante 1
	Sobrenadante 2
	Sobrenadante 3
· Ler a absorbância (540 nm) do produto colorido formado na amostra e no controle, contra o branco de soro ou plasma 
· Determinar a concentração de salicilato por meio de uma curva de calibração construída previamente, a partir de alíquotas da solução padrão adicionadas ao branco de soro ou plasma em concentrações correspondentes a 5, 10, 20, 30 e 40 mg de ácido salicílico/100 mℓ. As leituras espectrofotométricas são feitas contra o branco de soro ou plasma. As absorbâncias são projetadas em ordenadas e a concentração (mg%) em abscissas.
Interpretação analítica
Não há antídoto para a intoxicação salicílica tratamento é direcionado no sentido de prevenir uma posterior absorção e aumentar a eliminação. 
Concentração sérica de salicilato valores superiores a 35 mg% estão associados a um quadro grave tratamento costuma incluir a alcalinização da urina. 
Casos mais graves paciente com acidose acentuada, estado mental alterado, falha renal ou é idoso ou debilitado além da salicilemia acima de 100 mg% (algumas vezes até menos), é indicada a hemodiálise. 
A avaliação da gravidade da intoxicação salicílica, bem como a conduta terapêutica a ser adotada, não deve ter como base apenas os níveis séricos. É sempre importante monitorar de maneira conjunta tanto os sintomas clínicos e exames bioquímicos do paciente, quanto a salicilemia, pois pode ocorrer uma rápida piora do quadro, evoluindo ao óbito. 
Com relação a possíveis interferentes do método de Trinder, elevados níveis de bilirrubina acarretam uma salicilemia falsamente elevada.
Página 2 de 2
Referência: Moraes, MOREAU, Regina Lúcia D. Ciências Farmacêuticas - Toxicologia Analítica, 2ª edição. Grupo GEN, 2015.