Cromatografia em Camada Delgada - Resumo

Prévia do material em texto

Cromatografia 
Separação dos componentes de uma 
mistura (amostra) por uma interação 
diferencial entre uma fase estacionária 
(líquido ou sólido) e uma fase móvel 
(líquido ou gás). 
Processos físicos 
- Adsorção 
Na adsorção a nossa amostra vai ser 
adsorvida pela fase estacionária, com 
isso ela vai migrar pela coluna até chegar 
no indutor. 
- Partição: 
Por partição a amostra vai ter uma 
afinidade pela fase estacionária de 
acordo com o seu coeficiente de 
partição/solubilidade. 
Processos mecânicos 
- Exclusão: 
Vamos utilizar colunas que funcionam 
como uma peneira molecular, muito 
utilizado em produtos de origem 
biotecnológicos. 
Processos químicos 
- Troca iônica: 
Na troca iônica temos compostos com 
cargas e a coluna vai ter cargas também, 
a nossa amostra vai andar pela coluna de 
acordo com a carga. 
Bioafinidade 
São colunas bem específicas geralmente 
do tipo antígeno/anticorpo. Geralmente 
esse tipo de coluna é bem caro. 
Métodos cromatográficos no 
controle de qualidade 
Cromatografia de camada delgada (CCG): 
- Princípio: 
Um analito migra através de uma camada 
de fase estacionária sob a influência de 
uma fase móvel através da ação da 
capilaridade. 
- Aplicação: 
Determinação de impurezas em matérias 
primas; 
Identificação de matérias primas; 
Análise quantitativa (CCDAE). 
- Fase estacionária: 
Silica gel 
Silica gel F254 (com agente fluorescente) 
Celulose 
- Fase móvel (eluente): 
Hexano, tolueno, dietil éter, diclorometano, 
butanol, clorofórmio, acetato de etila, 
acetona, metanol, etanol, acetonitrila, 
ácido acético, água. 
- Detecção: 
Luz UV (cromóforos); 
Reagentes: Iodo; Permanganato de potás-
sio (açúcares). 
- Determinação do fator de retenção (Rf): 
Quando utilizamos o CCDAE nós temos o 
Rf de forma automatizada, o próprio 
equipamento já fornece com o 
densitograma. 
Cromatografia em camada delgada de 
alta eficiência (CCDAE ou HPTLC): 
CCD automatizada; 
Injeção automatizada de volume 
conhecido; 
Permite a quantificação do analito 
(densitograma); 
Maior velocidade da fase móvel na análise 
Placa de celulose 
Densitograma 
Vantagens da cromatografia em camada 
delgada: 
- Simplicidade e robustez; 
- Detecção visual após reação química; 
- Detecção densitométrica pode ser con-
siderada uma técnica quantitativa; 
- Pode ser automatizada (CCDAE). 
Desvantagens da cromatografia em 
camada delgada: 
- Ausência de quantificação no processo 
não automatizado; 
- Sensibilidade limitada; 
- Não apropriada para compostos voláteis.