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Genética de Microrganismos – semestre presencial - 2022/1 Profa. Dra. M. Teresa M. Novo Mansur - DGE Lista de Exercícios - Plasmídeos Referência: Os Organismos-Modelo – Biologia e Genética da Escherichia coli, D’Ari e Sezonov. São Paulo, Ed. Da USP, 2014. Observação: ENTREGAR NO MOODLE APENAS AS LETRAS QUE CORRESPONDEM À ALTERNATIVA CORRETA DE CADA QUESTÃO Leia o texto a seguir: A descoberta da existência de elementos extracromossômicos nas bactérias resultou do estudo de três fenômenos demonstrados essencialmente em E. coli: a troca de material genético com o auxílio do plasmídio conjugativo denominado fator F, a capacidade de produzir substâncias antibacterianas denominadas colicinas e o surgimento de amostras patogênicas resistentes a múltiplos antibióticos. As três observações só puderam ser compreendidas admitindo-se a presença de elementos genéticos autônomos e infecciosos no citoplasma da E. coli. O termo “plasmídeo” adotado por Lederberg em 1952 se aplicou perfeitamente a esses elementos, uma vez que eles carreavam uma informação genética independente do cromossomo e se auto-reproduziam dentro das células. A primeira série de observações de elementos extracromossômicos estava relacionada aos fatores R. Essa denominação foi concebida no início dos anos de 1960 pelo pesquisador japonês S. Iseki para classificar determinantes genéticos hipotéticos responsáveis pelo surgimento de resistência múltipla aos antibióticos em Shigella, agente causador da desinteria. A partir de 1957 amostras variantes multirresistentes de Shigella foram isoladas de pessoas portadoras de disenteria nos hospitais japoneses. Este surgimento coincidiu com a utilização generalizada de antibióticos para o tratamento das infecções bacterianas. Foram os trabalhos de T. Watanabe e seus colegas da Escola de Medicina da Universidade de Tóquio que permitiram o avanço da idéia de que os fatores R eram plasmídeos. 1. Com base nesse texto e no que foi exposto em aula, responda as seguintes questões: a) Se E. coli resistentes a um único antibiótico fossem mutantes espontâneos seu aparecimento ocorreria em baixíssima frequência e porisso essa ocorrência de isolados de Shigella multirresistentes não poderia ser considerada como consequência de várias mutações espontâneas, pois o surgimento de uma amostra resistente a três antibióticos por mutações espontâneas seria um evento extremamente raro; b) Os fatores R são plasmídeos que carreiam um ou vários genes de resistência aos antibióticos, sendo que tais genes codificam proteínas que podem agir impedindo o processo de tradução na célula c) Algumas amostras de E. coli podem secretar uma substância antibacteriana denominada colicina a qual mata bactérias que também possuem a colicina codificada em seu plasmídeo d) A coexistência de dois tipos de plasmídeos em uma mesma célula só é possível para certos tipos de plasmídeos e nesse caso cada um deles passa a ter o mesmo número de cópias, independentemente de qual plasmídeo esteja envolvido e) Todas estão corretas 2. Quanto à região rep para replicação dos plasmídeos, assinale a correta: a) Plasmídeos naturalmente encontrados em bactérias contêm regiões rep que lhes assegura a capacidade de se replicar b) A região rep compreende pelo menos dois loci: a região ori, que consiste numa sequência nucleotídica de início da replicação, e um ou vários genes rep, que codificam proteínas que agem no sítio ori c) Ao agir no sítio ori as proteínas rep permitem o início da replicação do plasmídeo d) A replicação do plasmídeo é iniciada em rep por proteína codificada no próprio plasmídeo mas é dependente da DNA polimerase, helicase e DNA ligase, entre outras, que são codificadas no cromossomo da célula hospedeira e) Todas as alternativas estão corretas 3. Quanto dos plasmídeos, assinale a correta: a) os elementos rep e ori constituem o replicon mínimo, ou seja, representam a informação genética mínima necessária para que um plasmídeo possa se replicar b) muitos plasmídeos possuem genes de resistência para metais pesados e antibióticos, sendo que esses tipos de genes são exclusivos de plasmídeos, ou seja, totalmente ausentes do cromossomo bacteriano. c) codificam funções essenciais, pois servem como vetores de genes que são vantajosos para as células d) se apresentam em número de cópia que dependem do hospedeiro em que se encontram e) o fato de se replicarem autonomamente significa que codificam todos os genes necessários para a sua replicação no hospedeiro 4. A figura abaixo representa a replicação bidirecional iniciada numa origem de replicação de um plasmídeo: Com base nessa figura e no seu conhecimento sobre replicação de DNA, responda: a) Há duas forquilhas de replicação na figura que caminham para lados opostos da origem de replicação sendo que em cada uma delas uma fita contínua e uma fita descontínua estão sendo sintetizadas utilizando como molde as fitas pré- existentes, separadas pela helicase do hospedeiro b) Será necessária a síntese de um primer de RNA para início das novas fitas a serem sintetizadas na origem de replicação e portanto a enzima primase é requerida, sendo que no caso das duas fitas sintetizadas continuamente um único primer é necessário no início e no caso das duas fitas sintetizadas descontinuamente vários primers adicionais serão requeridos durante a progressão da síntese c) A DNA polimerase só sintetiza no sentido 5´para 3´, e portanto a síntese da fita assinalada (ver círculo na figura) é realizada de maneira descontínua pois progride no sentido 3´para 5´ dessa nova fita sintetizada d) A replicação bidirecional não é a única possibilidade de mecanismo de replicação de um plasmídeo mas é finalizada em região localizada em local oposto à origem de replicação e) Todas as alternativas estão corretas 5) Quanto aos plasmídeos, assinale a correta: a) a origem de replicação típica de plasmídeos codifica apenas genes que agem em cis b) plasmídeos utilizados em Biologia Molecular apresentam características semelhantes aos plasmídeos que lhe deram origem somente se a maior parte do plasmídeo original estiver presente c) a região da origem de replicação de um plasmídeo codifica exclusivamente e tão somente para a sua replicação d) mecanismo de replicação Θ (theta) é o único mecanismo conhecido para os plasmídeos e) todas as quatro alternativas estão incorretas