Diagnóstico Viral

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Diagnóstico ViralDiagnóstico Viral
Microbiologia Veterinária PadsVet
Classificação de diagnósticos 
→ Diagnóstico direto: detecta o
agente ou seus componentes
→ Diagnóstico indireto: detecta a
resposta infecciosa do hospedeiro ao
agente
Coleta 
Local de multiplicação do
vírus - importante para a
determinação do sítio de
coleta
Quadro de evolução -
importante para a
determinação da fase de
coleta
Transporte adequado
Exames sorológicos
A sorologia pode significar:
Imunidade materna
Vacinação
Infecção pelo vírus
Logo, utiliza-se o conceito de viragem
sorológica - o aumento de no mínimo
4x nos níveis sorológicos em 15 dias -
para confirmação da infecção pelo
vírus.
Microscopia eletrônica
Muito utilizado em casos de pesquisa
e diagnóstico neurológico.
Cultivo e isolamento viral
→ Animais de laboratório: 
 camundongos, coelhos, etc.
→ Ovos embrionados: utilização de
SPF (specific patogen free)
→ Culturas de células: American
Type Culture Collection
Corpúsculos de inclusão
Restos de fábricas virais observados
→ Corpúsculos de Negri: vírus da
raiva
na análise patológica:
→ Corpúsculos de Lentz: vírus da
cinomose canina
Detecção de proteínas virais
→ Imunohistoquímica (feita em
tecido) ou Imunoperoxidase (feita
em cultivo celular)
→ Imunofluorescência (feita com
fluoróforo em lamínula de vidro),
podendo ser direta ou indireta
Ensaio imunoenzimático (ELISA)
→ Indireto: placa com antígeno
viral isolado + soro do animal +
anticorpos anti-anticorpos do
animal + substrato cromoenzimático 
Os anticorpos do animal (se
presentes) se ligam ao antígeno
viral cultivado em meio sólido →
LAVAGEM → os anticorpos anti-
espécie com a enzima cromogênica se
ligam aos anticorpos do animal
ligados ao antígeno viral →
LAVAGEM → o substrato é
adicionado e muda de cor quando o
soro do animal é positivo.
→ Direto: placa com anticorpo
antiviral isolado + amostra do
animal + anticorpo com enzima
cromogênica 
O vírus da amostra do animal (se
presente) se liga aos anticorpos no
meio sólido + LAVAGEM + os
anticorpos antivirais com a enzima
se ligam aos vírus ligados aos
anticorpos do meio sólido +
LAVAGEM + o substrato é
adicionado e muda de cor caso a
amostra do animal esteja infectado
com o vírus.
Métodos moleculares
→ Reação em cadeia da polimerase
(PCR): primers/iniciadores/sondas +
DNA polimerase + magnésio +
nucleotídeos 
No caso de vírus de RNA, o
recomendado é a realização do RT-
PCR, com a enzima transcriptase
reversa.
→ PCR em tempo real: teste
hipersensível com pouca
contaminação, muito utilizado para
análise de sêmen