Histologia - Processamento Histológico e Corantes

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Histologia
Processamento Histológico
Fixação - preservar a arquitetura
tecidual;
Pode ser do tipo química
(formaldeído, glutaraldeído
{microscopia de transmissão} ou
Bouin) ou física (congelamento -
método mais rápido - usado por
patologistas de centros cirúrgicos);
O fixador vai fazer ligações entre os
componentes celulares tentando
manter a estrutura;
Resumindo: a fixação tem por
objetivos: manter a estrutura; evitar
a autólise - degeneração; eliminar
bactérias, fungos e vírus; promove a
desnaturação proteica (endurece a
peça);
Desidratação - processo feito com
graduações crescentes de álcool
etílico;
70º GL - 80º GL - 90º GL - 100 ºGL
Diafanização ou Clarificação
Processo que promove a
translucidez do tecido avaliado;
Xilol ou Tolueno - solventes
orgânicos;
Remoção de pigmentos;
Além de tornar a peça receptiva à
parafina - o xilol é miscível em
parafina.
Infiltração ou Impregnação ou
Embebidação
Feito com sequências de parafina:
Parafina 1 - Parafina 2 - Parafina 3;
Feita no máximo a 57ºC - para não
destruir o material orgânico (tecido
analisado);
Inclusão
Feitura do bloco de parafina;
Colocação da peça em uma forma
com parafina líquida;
Microtomia
Feita com o micrótomo;
Corte de 5 a 7 𝜇m;
O bloco de parafina (com a peça de
tecido) é submetido ao corte fino e
preciso;
Os cortes estão enrugados ao
saírem do micrótomo, para
esticá-los usa-se o banho maria a
60ºC de maneira rápida e na
sequência o corte vai para a
lâmina;
Estufa - para que a parafina se
adira à lâmina;
Coloração
Corantes são utilizados para
marcar as estruturas de interesse;
Antes de colorir, faz-se o processo
inverso: xilol - álcool (100ºGL - 90ºGL
- 80ºGL - 70ºGL) - água - coloração;
A coloração pode ser do tipo:
simples/dupla/ tricrômica/
policrômica;
HE - hematoxilina - eosina é a mais
utilizada na rotina laboratorial;
Simples
- ortocromática (orto = correto /
cromática = cor ) - a cor da lâmina é
a mesma do corante no frasco;
Exemplos: hematoxilina, eosina, azul
de Alcian;
- metacromática - a cor da lâmina é
diferente da cor do corante no
frasco; exemplos: azul de Toluidina
(azul no frasco - púrpura na
lâmina);
Dupla - H&E - hematoxilina & eosina
Tricrômica - T de Masson; T de
Mallory
Policrômica - Exame de
Papanicolau usa 5 corantes
diferentes;
Corantes ácidos ≠ corantes básicos
eosina
tecido + rosado ( tecidos ou células
de natureza básica)
x
hematoxilina -
tecido + arroxeado / azulado
(tecidos ou células de natureza
ácida)
Hematoxilina
Corante de natureza básica;
Tecido de característica ácida*
*predominantemente
Cora em azul ou violeta
Ex: DNA / RNA, glicosaminoglicanos
(GAGs), glicoproteínas acídicas;
Eosina
Corante de natureza ácida;
Tecido de característica básica*
*predominantemente
Cora em rosa / alaranjado
Ex: mitocôndrias, colágeno,
grânulos de secreção.
Permalt - óleo para colar a lamínula
na lâmina;
Basofilia - afinidade pelo corante
básico (hematoxilina); afinidade dos
grupos teciduais aniônicos (-) pelos
corantes básicos (+);
Acidofilia -afinidade pelo corante
ácido (eosina); afinidade dos
grupos teciduais catiônicos (+)
pelos corantes ácidos (-);
Histoquímica - técnica mais
aprofundada;