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Nutrição Experimental Bioterismo e Ética na Pesquisa animal Definida como qualquer prática que utiliza animais para fins didáticos ou de pesquisa, sendo que neste conceito está abrangida a dissecção (ação de seccionar partes do corpo ou órgãos de animais mortos) e a vivissecção (vivu seccione, que significa “vivo” e secção”, ou seja, “cortar vivo”), que é a intervenção em animais vivos, anestesiados ou não. Animais de laboratório: São aqueles criados e produzidos sob condições ideais e mantidos em condições controladas (sem variações), com conhecimento e acompanhamento microbiológico e genético seguros . Mesmo com o crescimento de estudos in vitro e em culturas de células os modelos animais ainda apresentam grande vantagem em relação à informações de um organismo como um todo. BIOTÉRIO: Instalação dotada de características próprias que atende às exigências dos animais onde são criados ou mantidos, proporcionando-lhes bem estar e saúde para que possam responder adequadamente aos testes experimentais Na elaboração do protocolo experimental, qualquer alteração nos procedimentos ou protocolos experimentais para minimizar a dor e o estresse deve sempre ser considerada. São recomendadas utilização de enriquecimento ambiental com objetos que estimulem um comportamento natural do animal desde que não interfiram nos resultados do experimento Modelos animais em pesquisa Um modelo deverá atender aos pressupostos: • Possibilitar o estudo do fenômeno biológicos ou de comportamento do animal. • Possibilitar investigar um processo patológico espontâneo ou induzido. • Apresentar similaridade ao fenômeno em humanos. Nutrição Experimental Biossegurança na Pesquisa animal É Relacionado à vida, um conjunto de condições práticas relacionadas para a prevenção, minimização ou eliminação de riscos inerentes à atividade de produção, ensino e pesquisa. Os riscos presentes podem afetar a saúde humana, animal, e gerar danos ambientais, além de comprometer a qualidade da pesquisa. Regras de biossegurança: • Uso de máscaras . • Não usar éter como agente de anestesia; • Lavar as mão periodicamente; • Usar EPI; • Fumar e comer não é permitido dentro do biotério • Ferimentos protegidos • Material descartado deve ser autoclavado • Gaiolas e superfícies devem ser descontaminadas • Sorologia periódica do pessoal • Retirada de uniformes antes de sair • Ter conhecimento sobre manipulação. Em 2008, foi sancionada a lei Federal no 11.794, regulamentada em 2009 pelo decreto 6899. Esta legislação efetivamente regula a criação e o uso de animais para pesquisa e o ensino em âmbito nacional. Toda e qualquer pesquisa envolvendo animais deve passar pelo comitê de Ética em pesquisa animal para avaliação. Bioética Os problemas éticos surgem do conflito entre justificativas para o uso de animais para o benefício de si próprio e do homem, e o ato de causar ou não o sofrimento destes animais. Se o método for uma repetição de um já realizado ele não é eticamente válido. Vias de administração A escolha da via de administração de drogas, vacinas e anestésicos injetáveis deve ser alicerçada: • na natureza do agente à ser administrado • na espécie de animal alvo • no propósito da administração • na proporção entre volume e sítio de aplicação. Vias de adm: •Gavagem • Via cutânea • Via intraperitoneal • Via intramuscular Coleta de fluidos COLETA DE SANGUE : • Pode causar estresse do animal e portanto interferir nos resultados e também no parecer do comitê de ética. • Afastar os animais do grupo, fazer a coleta em outra sala reduz o stress dos animais. Coleta de fluidos COLETA DE SANGUE : Em roedores os principais acessos para coleta de sangue são: • veia safena • vias dorsais das patas • veia submandibular Nutrição Experimental • veia artéria mandibular da orelha • veia da cauda • plexo sino orbital • veia jugular • punção cardíaca • veia cava posterior.10 a 15% do volume total de sangue do animal ou 1% do peso corporal é o máximo de sangue que pode ser coletado com intervalo de 3 a 4 semanas . 15 a 25% do volume total de sangue resulta em alterações nos níveis de epinefrina e corticosterona. 20 a 25% reduz a pressão sanguínea pode resultar em falência cardíaca. Eutanásia e finalização humanitária dos animais Eutanásia significa morte sem dor ou sofrimento. Devem ser seguidos os seguintes critérios primários: • Utilização de métodos sem dor • Animais devem atingir rápido estado de inconsciência e morte • Requer o mínimo de contenção e evitar a excitabilidade dos animais • Deve ser apropriado para a idade e o estado de saúde do animal • Causar o mínimo de sofrimento • Simples de administrar • Seguro para o operador • Distante de outros animais. Modelos animais em pesquisa em nutrição Existem muitas possibilidades de modelos de diferentes doenças. Essas modificações possibilitaram compreender por exemplo o papel de nutrientes em diferentes condições patológicas. Modelos induzidos por dieta: DIETA DE CAFETERIA Objetivo: aproximar o consumo das dietas laboratoriais do consumo da sociedade moderna ocidental. Modelo útil para o estudo da obesidade e síndrome metabólica pois a ingestão elevada de açúcares e gordura parece ser o ponto chave no rompimento da homeostase. Neste modelo é oferecido ao animal uma dieta de alta densidade calórica por meio de sobrecarga de carboidratos e gorduras. Componentes da dieta: • Patê (2) • Bacon (1) • Batata chips (1) • Biscoito (1) •Chocolate (1) • Ração comercial (1) Pode ser iniciada nas diferentes etapas da vida do animal Após o parto, após o desmame ou na idade adulta. Resulta em: • Ganho de peso superior à 30 e 40% acima do normal • Aumento na quantidade de gordura visceral • Elevação da pressão arterial • Resistência à insulina • Alterações de metabolismo lipídico e glicídico e função endotelial • Redução de eficiência genética • Redução plasmática e hepática DIETA HIPERLIPÍDICA E HIPERGLICÍDICA: • Dieta rica em lipídios e/ou carboidratos • Tem sido usada como modelo no desenvolvimento do estresse oxidativo, resistência à insulina e síndrome metabólica • Modelo vantajoso que proporciona meios para o desenvolvimento de outros estudos relacionados à fisiopatologia, ao tratamento de obesidade e a comorbidades que compõem a síndrome metabólica DIETAS DE DEPLEÇÃO E REPLEÇÃO • Emprego de dietas de depleção (redução de alguma substância), seguidas ou não de repleção, consistem em uma metodologia utilizada para determinar a BIODISPONIBILIDADE de nutrientes, especialmente minerais • Em geral, as análises experimentais envolvem a avaliação de parâmetros bioquímicos sensíveis à depleção e à repleção do determinado nutriente • Ex. determinação no sangue, em determinado órgão. RESISTÊNCIA À INSULINA: • A administração neonatal de glutamato monossódico em roedores tem sido apontado como um eficiente método para induzir a resistência à insulina • Resultado é desregulação do Nutrição Experimental metabolismo de glicose e lipídios, bem como do balanço energético SÍNDROME METABÓLICA: Caracteriza-se pelo conjunto de fatores de risco para a aterosclerose e doença cardiovascular – muito difícil de ser estudada em ratos • Entre os modelos destacam-se o uso conjunto de ratos SHR (espontaneamente hipertensos) + administração de glutamato neonatal. Isso resulta em características que mimetizam a síndrome metabólica MODELOS INDUZIDOS POR CIRURGIA SINDROME DO INTESTINO CURTO • Pode ser simulada fazendo-se a ressecção de 80% do jejuno-íleo • Modelos muito usados para simular condições causadas por cirurgias. Ex.: bariátrica Necessidades nutricionaise dietas experimentais de roedores de laboratório Ao utilizar animais em pesquisa é fundamental uma alimentação adequada que atenda às necessidades nutricionais dos seres estudados. Isso é necessário para que os animais apresentem suas características de crescimento, desenvolvimento e reprodução e longevidade. Importante para o bem-estar animal. No preparo da dieta devem ser considerados: biodisponibilidade, palatabilidade e aceitação. Fatores que afetam a necessidade nutricional Genética • Estágio da vida • Impactos ambientais • Status microbiológico – contribuição da flora • Interações entre nutrientes Tipos de formulações • O Tipo da dieta utilizada dependerá do objetivo que se busca alcançar. • As dietas costumam ser classificadas de acordo com o grau de refinamento que se deseja alcançar. DIETA QUIMICAMENTE DEFINIDA • Dieta formulada com componentes quimicamente puros, como aminoácidos, TAG, AG essenciais, sais inorgânicos e vitaminas – é isenta de contaminantes e fatores estimulantes de enzimas • Utilizadas em estudos onde o controle da concentração de determinado nutriente é de extrema relevância DIETA PURIFICADA • São utilizados ingredientes extraídos de determinados alimentos com composição relativamente conhecida: ex.: caseína, óleo vegetal, sacarose.. • Custo mais baixo que da anterior e estabilidade variável • Muito cuidado com a seleção dos ingredientes DIETA COMERCIAL • Formula-se esta dieta com alimentos processados • É palatável e de baixo custo • Não muito recomendada para animais em experimentação pois apresenta composição variável • Pode ter interferentes como excesso de fitatos, taninos e fibras. Preparação e estocagem das dietas • Locais específicos e equipamentos adequados; • Cuidados para evitar a contaminação química e biológica • Garantir mistura homogênea dos ingredientes • Armazenar em geladeira e local protegido.
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