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UNIVERSIDADE DE BRASÍLIA FACULDADE DE CEILÂNDIA GRADUAÇÃO EM FARMÁCIA Relatório da Prática 04 – Determinação Quantitativa do Colesterol e Triglicerídeos Amanda Kelly Costa Carvalho – 19008379 Flaviane de Souza Brito – 190087218 Osvaldo Jesuino da Costa Junior – 202018369 Tatyelle Lemos Nascimento – 190095806 Ceilândia - DF 2022 SUMÁRIO 1. INTRODUÇÃO .............................................................................................................................. 3 2. OBJETIVO GERAL ....................................................................................................................... 4 3. MATERIAIS E MÉTODOS ........................................................................................................... 5 4. RESULTADOS …........................................................................................................................... 6 5. GRÁFICO LEVEY-JENNINGS ..................................................................................................... 7 6. DISCUSSÃO …............................................................................................................................... 9 7. CONCLUSÃO .............................................................................................................................. 10 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS .............................................................................................. 11 1. INTRODUÇÃO O colesterol é um composto gorduroso utilizado para a produção das membranas celulares e de alguns hormônios (PFIZER, 2019). Ele faz parte do grupo dos esteroides naturais, que são lipídios (gorduras), componentes essenciais de estruturas biológicas, que são distribuídos em todos os tecidos, principalmente nas membranas celulares células de gordura (adipócitos). São classificados em lipídeos de baixa solubilidade (insolúvel em água), e de alta solubilidade em solventes orgânicos. Os lipídeos possuem funções muito importantes para manter a homeostase do organismo. Entre essas funções, podemos citar como principais: fonte de energia e reserva, transporte e absorção de vitaminas lipossolúveis, Proteção dos órgãos, composição de membranas celulares, isolante térmico e físico, precursor de hormônios, entre outros. O colesterol é transportado pelo plasma na forma de lipoproteínas, ou seja, complexos de lipídios com apolipoproteínas. Existem quatro classes de lipoproteínas: lipoproteínas de alta densidade (HDL), lipoproteínas de baixa densidade (LDL), lipoproteínas de densidade muito baixa (VLDL) e quilomicrons. O LDL é responsável pelo transporte de colesterol para as células periféricas, já o HDL pelo transporte reverso das células para o fígado. Essas quatro classes diferentes de lipoproteínas mostram uma relação com a aterosclerose das coronárias, que é uma inflamação causada pela formação de placas de gordura, cálcio e outros elementos na parede das artérias do coração e de outras localidades do organismo. O LDL-Colesterol contribui para a formação de placas ateroscleróticas dentro de artérias e é fortemente associado com os Risco de Doenças Coronarianas (RDC) e mortalidade relacionada (KOVALENT, 2011). O HDL-Colesterol, tem um efeito protetor que impede a formação de placas e apresenta uma relação inversa para um controle de RDC. Por isso a determinação do nível de Colesterol Total (CT) individual é importante na clínica, pois é usada com um propósito de triagem, para uma melhor avaliação dos níveis de HDL-C e LDL-C, e assim quantificar o risco de doenças cardiovasculares, entre outras. Os Triglicerídeos são os mais abundantes dos lipídeos. São formados por ésteres de glicerol com três ácidos graxos, e são transportados por apoliproteínas ligadas ao plasma, gerando a VLDL (lipoproteína de muita baixa densidade) e quilomicrons. A determinação quantitativa dos triglicerídeos é muito utilizada para diagnóstico de patologias relacionadas ao sistema cardiovascular. 3 2. OBJETIVO GERAL O objetivo desta prática, é obter dados quantitativos de amostras de Colesterol e Triglicerídeos, para fazermos uma análise com todos os valores obtidos através de cálculos utilizando absorbância média, absorbância padrão e uma concentração padrão. A utilização clínica da medição de colesterol, é utilizada para auxiliar no diagnóstico de patologias relacionadas, como aterosclerose e outras doenças cardíacas, assim como para entender o quadro de colesterol do paciente, para que possam ser feitos, caso seja necessário, ajustes na alimentação e no estilo de vida do paciente, além de um melhor monitoramento do paciente. Na prática clínica, o exame quantitativo de Triglicerídeos é utilizado também para o diagnóstico de qualquer patologia associada a estes, que geralmente são distúrbios no sistema cardiovascular. Níveis elevados de triglicerídeos podem ser utilizados como indicador de desequilíbrio no fígado, rins e pâncreas; além de que, há estudos associando altos níveis de triglicerídeos e LDL com doenças coronarianas. 4 3. MATERIAIS E MÉTODOS O método utilizado para determinação quantitativa do Colesterol, consiste em um método enzimático utilizando soro ou plasma, chamado CHOD – PAP. O princípio desse método consiste na determinação de colesterol após hidrólise e oxidação enzimática. O indicador colorimétrico é uma Quinonimina que é gerada a partir da 4 - aminoantipirina e fenol pelo peróxido de hidrogênio sob a ação catalítica da Peroxidase (Reação de Trinder). Materiais utilizados: • Reagentes: Colesterol Liquiform e Triglicérides Liquiform. • Soro, Plasma heparinizado ou EDTA. • Equipamento geral de laboratório. Procedimento: Foram utilizadas duas amostras de soro, um para a análise quantitativa do Colesterol e outra para o Triglicerídeo, realizadas em duplicata. Para realizar a análise de Triglicerídeos, pipetamos 1,0 mL do reagente Triglicérides Liquiform em 2 tubos de ensaio, em seguida, pipetamos 10µl da amostra de soro nº 1 e também 10µl da amostra de soro nº 2, em seus respectivos tubos. Feito isso, homogeneizamos os tubos e deixamos no banho maria a 37º C por 10 minutos. Com as amostras prontas, vimos as absorbância de cada uma no espectrofotômetro. Para fazer a análise de Colesterol, foi realizado o procedimento idêntico ao de Triglicerídeos, porém, utilizamos um reagente diferente, no caso Colesterol Liquiform. 5 4. RESULTADOS Para obtermos os valores da tabela abaixo, fizemos um cálculo utilizando a seguinte expressão: TG(mg/dL) = Abs Am / Abs PD x 200, onde a Abs PD é igual a 0,218 e 200 corresponde a concentração média de triglicerídeos. Amostra 1 Amostra 2 Triglicerídeos GP 1 133,02 514,67 Triglicerídeos GP 2 139,44 412,84 Triglicerídeos GP 3 133,90 283,40 Amostra 1 Amostra 2 Colesterol GP 1 459,52 178,57 Colesterol GP 2 197,61 197,61 Colesterol GP 3 197,61 192,8 6 5. GRÁFICO LEVEY-JENNINGS Para construir o Gráfico de Levey-Jennings, calculamos a média e desvio padrão dos valores das tabelas inseridas em 4. RESULTADOS, e obtemos a tabela abaixo: TG (mg/dL) CT (mg/dL) Am 1 Am 2 Am 1 Am 2 133,02 514,67 459,52 178,57 139,44 412,84 197,61 197,61 133,9 283,4 197,61 192,8 Média 135,453 403,637 284,913 189,66 Desvio padrão 2,8418 94,6396 123,466 8,08394Com os dados acima, foram feitos os gráficos apresentando os valores obtidos em cada amostra, com a finalidade de garantir o controle estatístico do processo. 133,02 139,44 133,9 132 133 134 135 136 137 138 139 140 P ip et as - 1 ,0 m L rg + 1 0 μ l A m - > M is t. 1 0 m in . B .M - > Le r em 5 0 0 n m Volumes em mL Gráfico Levey-Jennings - TG (mg/dL) - Am 1 7 514,67 412,84 283,4 270 320 370 420 470 520 P ip et as - 1 ,0 m L rg + 1 0 μ l A m - > M is t. 1 0 m in . B .M - > Le r em 5 0 0 n m Volumes em mL Gráfico Levey-Jennings - TG (mg/dL) - Am 2 459,52 197,61 197,61 180 230 280 330 380 430 480 P ip et as - 1 ,0 m L rg + 1 0 μ l A m - > M is t. 1 0 m in . B .M - > Le r em 5 0 0 n m Volumes em mL Gráfico Levey-Jennings - CT (mg/dL) - Am 1 178,57 197,61 192,8 175 180 185 190 195 200 P ip et as - 1 ,0 m L rg + 1 0 μ l A m - > M is t. 1 0 m in . B .M - > Le r em 5 0 0 n m Volumes em mL Gráfico Levey-Jennings - CT (mg/dL) - Am 2 8 6. DISCUSSÃO COLESTEROL De acordo com o POP de instrução de uso utilizado na prática, os valores a serem considerados normais ou desejáveis, devem ser menor ou igual a 200 mg/dL. Já os valores que estão no limite de alto risco, estão entre 200 a 240 mg/dL, e maior que 240 mg/dL já é considerado alto risco para o paciente. De acordo com os resultados obtidos por cada grupo, o grupo 2 e 3 obtiveram os melhores resultados que são considerados dentro dos padrões de normalidade, sendo o grupo 2 o que obteve o melhor resultado sendo igual entre as duas amostras. Já o grupo 1 obteve dois valores bem diferentes um do outro, onde na segunda amostra o valor obtido está dentro dos padrões de normalidade, e o valor da primeira amostra já ultrapassa o valor de limite de risco para o paciente. As possíveis causas dessa alteração podem estar relacionadas com a forma errada de pipetar as amostras, já que dois grupos tiveram resultados iguais ou próximo como no caso da segunda amostra no grupo 3. TRIGLICERÍDEOS De acordo com o POP de instrução de uso utilizado na prática, os valores a serem considerados normais ou desejáveis, devem ser menor ou igual a 200 mg/dL. Já os valorese limites de alto risco estão entre 200 a 400 mg/dL, onde maior que 400 mg/dL á é considerado alto risco para a saúde do paciente. Com os resultados obtidos, podemos observar que todos os grupos da primeira amostra, alcançaram valores adequados que estão nos padrões desejáveis de normalidade, onde o grupo 1 e 2 alcançaram valores muito próximos. Já na segunda amostra pode ter ocorrido novamente o erro na forma de pipetar a amostra entre o grupo 1 e 2, que alcançaram valores muito altos, sendo considerados de alto risco. Já o grupo 3conseguiu alcançar valores precisos entre a primeira e a segunda amostra, podendo ser característico de uma pipetagem mais adequada. 9 7. CONCLUSÃO De acordo com os resultados apresentados por cada grupo, observamos que houve algumas divergências nos resultados que podem ter sido causadas por erros na hora de pipetar as amostras. Porém analisando os valores, é possíevl utilizar de situações hipotéticas para chegar à um diagnóstico de cada paciente. Na amostra 1 e 2 do Colesterol, os grupos tiveram resultados dentro dos padrões desejados, mas apenas um grupo alcançou um resultado que apresenta alto risco ao paciente. As causas utilizando de situações hipotéticas, podem estar ligadas por exemplo a má alimentação ou obesidade. Consequentemente, essa taxa de colesterol tão alta pode gerar uma série de fatores que podem acarretar doenças crônicas ou não, como por exemplo risco de doenças cardiovasculares, pressão alta e entupimento das veias, podendo causar infarto e derrame (AVC). Uma forma de tratamento a ser pensada, seria um acompanhamento com um profissional de nutrição, para adequar uma dieta mais balanceada juntamente com exercícios físicos para esse paciente, e assim melhorar a qualidade de vida do indivíduo. Já nos níveis de Triglicerídeos, na primeira amostra os grupos obtiveram resultados que se adequam aos valores normais e desejáveis. Porém, na segunda amostra todos os grupos podem ter cometido um erro na pipetagem da amostra, que consequetentemente apresentou valores muito distantes uns dos outros. Quanto maior o nível de triglicerídeos no sangue, maior a probabilidade de o paciente desencadear doenças como: pancreatite (inflamação do pâncreas), esteatose hepática (gordura no fígado), aterosclerose (placas de gordura nos vasos sanguíneos) e até mesmo derrame cerebral (AVC). O esquema de tratamento pode ser considerado o mesmo citado para o colesterol, pois um aumenta consequentemente o outro, sendo assim também diminuirá até os níveis normais com tratamento adequado. 10 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS PFIZER, “Colesterol”. Disponível em: https://www.pfizer.com.br/sua-saude/coracao/colesterol#e Acesso em: 21 jul 2022. KOVALENT, “Instrução de uso COLESTEROL CHOD – PAP, 08/2011. KOVALENT, “instrução de uso Triglicerídeos GPO – PAP, 08/2011. 11 https://www.pfizer.com.br/sua-saude/coracao/colesterol#:~:text=O%20colesterol%20%C3%A9%20um%20composto,como%20ovo%2C%20carne%20e%20leite
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