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Trabalho de morfologia aplicada a odontologia Professor: Fabio Bassani Aluna: Juliana Moraes Odontologia 2022. Macapá, 13 de outubro de 2022. Tema: Microscopia Óptica • O que é microscopia óptica • Tipos de microscópio • Partes do microscópio • Funções • Confecção de lâmina • O que é a microscopia óptica A técnica de microscopia óptica permite o aumento de imagens através da luz que após incidir sobre a amostra, passa por um conjunto de lentes objetivas (que formam e aumentam a imagem) e oculares (que aumentam a imagem). O microscópio óptico o de luz transmitida possui objetivas de 4, 10, 40 e 100, que proporcionam uma visão panorâmica de aumento aproximado de 40x, 100x, 400x e 1000x, respectivamente. O Objetivo da microscopia é a obtenção de imagens ampliadas de um objeto, que nos permitam distinguir detalhes não revelados a olho nu. A forma mais comum é a lupa ou microscópio estereoscópico, seguida do microscópio óptico, que ilumina o objeto com luz visível ou ainda luz ultravioleta. O limite máximo de resolução dos microscópios ópticos é estabelecido pelos efeitos de difração devido ao comprimento de onda da radiação incidente. Mas, em geral, os microscópios ópticos convencionais ficam, então, limitados a um aumento máximo de 2000 vezes. A imagem microscópica é caracterizada por três parâmetros: aumento, resolução e contraste. • Tipos de microscópio 1. Microscópio ultravioleta Neste tipo, utiliza-se a radiação ultravioleta, que tem um comprimento de onda para a luz visível, melhorando o limite de resolução. 2. Microscópio de fluorescência A observação dos espécimes é feita através da fixação de substâncias fluorescentes (fluoro e cromos), que, ao receberem luz, podem ser observados através do brilho gerado. 3. Microscópio de contraste de fase Transforma diferentes fases dos raios de luz em diferenças luminosas, permitindo a observação dos espécimes através do contraste gerado. 4. Microscópio de polarização Constituído por dois prismas – um polarizador e outro analisador – este tipo de microscópio é utilizado na observação de materiais birrefringentes (estruturas anisotrópicas, com índices diferentes de refração como os ossos, músculos, fibras, cabelos, etc.). Microscopia eletrônica Os microscópios eletrônicos utilizam, em vez da luz, um feixe de elétrons, para iluminar a amostra, combinado a lentes eletrostáticas e eletromagnéticas. Sua capacidade de ampliação é superior a dos microscópios de luz, atingindo um nível de resolução de 0,2 nanômetros. Os tipos principais são: 1. Microscópio Eletrônico de Varredura (MEV) Capazes de produzir imagens em alta resolução, estes microscópios ampliam em até 100 mil vezes objeto e permitem obter imagens tridimensionais, sendo bastante utilizados para a observação da estrutura superficial da amostra. 2. Microscópio Eletrônico de Transmissão (MET) Este tipo permite examinar detalhes ínfimos, ampliando o objeto em até um milhão de vezes. Seu funcionamento consiste na emissão de um feixe de elétrons que interage com a amostra enquanto a atravessa, formando uma imagem aumentada. Para a observação neste tipo de microscópio é necessário que o material seja cortado em camadas bem finas. Ao contrário da microscopia óptica, este tipo não utiliza lentes de vidro, mas sim ponteiras de vidro com alta sensibilidade à superfície da amostra, permitindo a formação de uma imagem com informações tridimensionais. Além da grande resolução, os microscópios que utilizam essa tecnologia podem medir características como dureza e elasticidade do material. O que é um microscópio óptico? O microscópio óptico é um instrumento que permite ampliar imagens para uma melhor visualização. Dessa forma, é um item muito importante para observação de objetos muito pequenos que não podem ser visualizados a olho nu. É constituído por uma parte óptica e outra mecânica. Entenda melhor como funciona cada uma dessas partes, abaixo. Quais são as partes de um microscópio óptico? Como já citado, o microscópio óptico é composto por uma parte óptica e por outra mecânica. Entenda melhor abaixo! Parte óptica do microscópio óptico Veja quais são as funções de cada divisão da parte óptica do microscópio óptico. Objetivas As lentes objetivas podem ter um grau de ampliação de até 100 vezes. Em geral, os microscópios podem ter de 3 a 4 objetivas. Oculares É um sistema de lentes que pode ser monocular, binocular e trinocular que, geralmente, possui um aumento de até 10 vezes. Diafragma Controla a quantidade de luz que entra no condensador. Condensador Concentra os feixes de luz que incidem sobre a amostra a ser analisada. Fonte de luz É a fonte que projeta a iluminação, passando pelo condensador, diafragma, a lâmina e a amostra. Parte mecânica de um microscópio óptico Entenda quais são as funções de cada compartimento da parte mecânica de um microscópio óptico. Canhão É uma parte utilizada como suporte para as lentes. Revolver É um disco rotativo onde são acopladas as lentes objetivas. Através dele é possível girar e selecionar qual a lente mais adequada para a visualização da amostra. Platina Base onde é possível apoiar a lâmina para visualização da amostra. Macrométrico e micrométrico Partes do microscópio que permitem focar a amostra ao movimentar a platina. Braço Suporte para as demais peças do microscópio. Base Instrumento de apoio para todo o microscópio. • Confecção de lâmina Na confecção de uma lâmina, é necessário que o tecido seja finamente fatiado, processo chamado de corte histológico. Em seguida, passa-se para a etapa de fixação cujas finalidades envolvem: (1) Evitar a digestão dos tecidos por enzimas existentes nas próprias células (autólise). (2) Endurecer os fragmentos. (3) preservar a estrutura e a composição molecular dos tecidos. Ela pode ser feita por métodos químicos (mais frequentes) ou físicos (frequentemente, por congelamento rápido). Na fixação química os tecidos são imersos em soluções de agentes desnaturantes. Também podem ser em agentes que estabilizam as moléculas ao formar pontes com moléculas adjacentes. Infiltração: Para obter secções delgadas, os fragmentos de tecidos e órgãos devem, após a fixação, ser infiltrados com substâncias que lhes proporcionem uma rigidez, em um processo chamado de infiltração. As substâncias mais utilizadas para esse fim são a parafina e resinas de plástico. OBS: O processo de impregnar os tecidos com parafina também pode ser chamado de embebição em parafina. Geralmente é precedido por duas etapas: desidratação e clareamento. Coloração: A última etapa no processo de fabricação de uma lâmina é a coloração. Para serem estudados ao microscópio, a maioria dos cortes histológicos devem ser corados, porque grande parte dos tecidos são incolores. A seletividade dos corantes para os componentes dos tecidos pode ser maior ou menor. Muitos corantes se comportam como substâncias de caráter ácido ou básico. Eles tendem a formar ligações eletrostáticas com componentes ionizados. Os componentes dos tecidos que se coram bem com corantes básicos são chamados de basófilos, e os que têm grande afinidade por corantes ácidos, de acidófilos. O azul de toluidina, a hematoxilina e o azul de metileno são exemplos de corantes básicos. Os principais componentes dos tecidos que reagem com corantes básicos o possuem ácidos na sua composição – ácidos nucleicos, glicosaminoglicanos e glicoproteínas ácidas. Já os corantes ácidos (como eosina e fucsina ácida) coram principalmente os componentes acidófilos dos tecidos. Por exemplo: grânulos de secreção, proteínas citoplasmáticase colágeno. A célula é formada por um núcleo inserido em um citoplasma. Em geral, os diversos componentes citoplasma não são vistos nos preparados comuns, corados pela hematoxilina-eosina. Assim, o citoplasma de uma forma geral, se aparenta rosado devido à presença de proteínas, sendo corado pela eosina (acidófilo). O núcleo aparece arroxeado pela presença de substâncias basófilas, como os ácidos nucleicos, sendo corados pela hematoxilina. Referências O que é microscopia óptica, 25 de junho de 2021 https://policom.ufsc.br/microscopia-optica/ https://www.prolab.com.br/blog/equipamentos-aplicacoes/saiba-quais-sao-os- tipos-de-microscopios-existentes/ Partes de um microscópio ://kasvi.com.br/microscopio-optico/ https://educador.brasilescola.uol.com.br/estrategias-ensino/preparo-uma- lamina-para-microscopia.htm https://policom.ufsc.br/microscopia-optica/ https://policom.ufsc.br/microscopia-optica/ https://www.prolab.com.br/blog/equipamentos-aplicacoes/saiba-quais-sao-os-tipos-de-microscopios-existentes/ https://www.prolab.com.br/blog/equipamentos-aplicacoes/saiba-quais-sao-os-tipos-de-microscopios-existentes/ 1. Microscópio ultravioleta 2. Microscópio de fluorescência 3. Microscópio de contraste de fase 4. Microscópio de polarização Microscopia eletrônica 1. Microscópio Eletrônico de Varredura (MEV) 2. Microscópio Eletrônico de Transmissão (MET) O que é um microscópio óptico? Quais são as partes de um microscópio óptico? Parte óptica do microscópio óptico Objetivas Oculares Diafragma Condensador Fonte de luz Parte mecânica de um microscópio óptico Canhão Revolver Platina Macrométrico e micrométrico Braço Base Infiltração: Coloração:
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