BIOQUÍMICA CLÍNICA ROTEIRO 5 CARACTERIZAÇÃO DE LIPÍDIOS (DOSAGEM DE COLESTEROL TOTAL)

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Roteiro de Aula Prática 
Código e nome da disciplina 
 
 
 
 
Título da Prática: 
 
 
 
 
Objetivos da aula: 
1) Compreender o metabolismo de Lipídeos; 
2) Determinar a concentração de colesterol total no soro ou plasma 
 
Material necessário para a aula: 
 
VIDRARIA 
Tubos de ensaio 
Pipetas graduadas (5mL) 
Pipeta semiautomática (10μL) 
Ponteiras descartáveis 
Marcador permanente para tubos 
Suporte para tubos de ensaio 
MATÉRIA-PRIMA/INSUMO OU ANALITO 
Amostra de soro ou plasma 
REAGENTES E SOLUÇÕES 
Kit para determinação de Colesterol Total (LABTEST) 
EQUIPAMENTOS 
Espectrofotômetro com capacidade no comprimento de onda de 500nm 
Geladeira 
Banho-Maria (37°C) 
Cronômetro 
 
 
Procedimentos: 
 
1. Os alunos deverão entrar no laboratório equipados com EPI'S e realizarem a higienização 
das mãos. 
2. Rotular 3 tubos de ensaio com as letras B (Branco) T (Teste) e P (Padrão); 
3. Nos tubos B, T e P, adicionar 1,0mL do Reagente 1; 
4. No tubo T, adicionar 10μL da amostra; 
5. No tubo P, adicionar 10μL da solução padrão; 
6. Misturar e incubar os tubos por 5 minutos em Banho maria (37° C) 
7. Transferir os reagentes de cada tubo para 3 cubetas identificando-as na mesma ordem (B, 
T e P); 
8. Levar as cubetas ao Espectrofotômetro e proceder às leituras das absorbâncias de T e P 
em comprimento de onda de 500nm, utilizando o B para zerar o aparelho; 
9. A reação permanece estável por 60 minutos, à temperatura ambiente (20 – 30°C); 
10. Anotar os valores obtidos com as leituras de T e P e realizar o cálculo; 
ARA0189 BIOQUÍMICA CLÍNICA 
Aula prática_05_ Caracterização de Lipídios (Dosagem de Colesterol Total) 
 
 
11. Ao final da atividade, lave adequadamente todo o material que você usou e organize a 
sua bancada para que seja utilizada pelo próximo aluno. 
 
OBSERVAÇÃO: O PROTOCOLO PODE VARIAR DE ACORDO COM A MARCA DO KIT, 
CONSULTE SEMPRE A BULA DO KIT! 
 
 
Observações: 
 
Cálculos: 
A determinação da concentração de colesterol total (CT) é dada através da seguinte 
equação: 
COLESTEROL TOTAL (mg/dL) = (At / Ap) x 200, onde At = Absorbância do teste; Ap = 
Absorbância do padrão. 
Exemplo: Se At = 0,290; Ap = 0,345, logo CT (mg/dL) = (0,290/ 0,345) x 200 = 168,0 
mg/dL 
 
Intervalo de Referência (adultos): desejável < 190mg/dL 
 
SIGNIFICADO CLÍNICO 
O grande dilema da aterosclerose é que ela é um processo silencioso. Está ativa em 
todos os indivíduos e permanece sem qualquer manifestação por décadas e, 
subitamente, se manifesta através de dor torácica, infarto agudo do miocárdio ou 
morte súbita. 
Estudos populacionais longitudinais, dados epidemiológicos e estudos 
experimentais em animais, demonstraram uma correlação positiva entre os níveis 
de colesterol, mais especificamente do colesterol LDL e o risco de doença arterial 
coronariana (DAC). Ao mesmo tempo foi evidenciado que os níveis de colesterol HDL 
são inversamente proporcionais ao risco de DAC. 
Valores aumentados de colesterol são encontrados na nefrose, hipotireoidismo, 
doenças colestáticas do fígado e nas hiperlipoproteinemias dos tipos IIa, IIb e III. 
Níveis diminuídos são encontrados no hipertireoidismo e desnutrição crônica.