Noções Básicas de Cromatografia

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Métodos cromatográficos
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Noções básicas de cromatografia
 Conjunto de técnicas de separação cujo princípio depende da
distribuição diferenciada dos componentes de uma mistura
entre duas fases, uma considerada estacionária, e a outra,
móvel.
CHROMA + GRAPHE
(COR) (ESCREVER)
Forças intermoleculares Afinidade
Solubilidade
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Noções básicas de cromatografia
 Diferenças nas propriedades das fases móvel e estacionária
possibilitam com que os componentes da amostra se
desloquem através do material cromatográfico com
velocidades desiguais, gerando a separação
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Noções básicas de cromatografia
 As diferentes formas de cromatografia podem ser
classificadas considerando-se diversos critérios:
Classificação pela forma 
física do sistema 
cromatográfico
Classificação pela fase 
móvel empregada
Classificação pela fase
estacionária utilizada
Classificação pelo modo 
de separação
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Noções básicas de cromatografia
Cromatografia
Planar Coluna
Líquido LíquidoGás
Líquido Fase 
ligada
Sólido
Líquido LíquidoSólido
Fase 
ligada
CP CCD CCD
CGL CGS CGFL CLL
Sólido
CLS CE
Fase 
ligada
CLFL CTI CB
Técnica
Fase Móvel
Fase 
Estacionária
Tipo de 
cromatografia
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Noções básicas de cromatografia
TIPOS DE SEPARAÇÃO
 Os princípios físico-químico básicos de separação são:
Adsorção: O soluto é retido pela superfície da fase
estacionária através de interações químicas ou físicas.
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Noções básicas de cromatografia
TIPOS DE SEPARAÇÃO
 Sílica-Gel ou ácido Silícico;
SiO O Si
O
O O
O
OH
ÁCIDA
pH 4,0
BÁSICA
pH 9,0
NEUTRA
pH 7,0
Óxido de alumínio ou alumina;
 Celulose;
 Kieselgur;
 Poliamida;
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Noções básicas de cromatografia
TIPOS DE SEPARAÇÃO
CH3
Si
O
Si
O
Si
O
Si
O
CH3
CH3
OH
CH3
OH
O
CH3
CH3
CH3
CH3
Usada em cromatografia de fase 
reversa, em que a fase estacionária é 
menos polar que a fase móvel
Sílica C18
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Noções básicas de cromatografia
TIPOS DE SEPARAÇÃO
 Os princípios físico-químico básicos de separação são:
Partição: O soluto se dissolve na parte líquida que envolve
a superfície do suporte sólido.
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Noções básicas de cromatografia
TIPOS DE SEPARAÇÃO
 Os princípios físico-químico básicos de separação são:
 Troca iônica: O íon da amostra se liga à carga fixa (grupo
funcional) da fase estacionária.
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Noções básicas de cromatografia
TIPOS DE SEPARAÇÃO
 Os princípios físico-químico básicos de separação são:
 Exclusão moléculas: As moléculas são separadas por
tamanho, havendo retenção das maiores.
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Noções básicas de cromatografia
TIPOS DE SEPARAÇÃO
 Os princípios físico-químico básicos de separação são:
Bioafinidade: Ocorre uma ligação molecular específica e
reversível entre o soluto e o ligante fixado à fase
estacionária.
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Noções básicas de cromatografia
Cromatografia em Camada Delgada
Consiste na separação dos componentes de uma mistura
através da migração diferencial sobre uma camada delgada
de adsorvente retido sobre uma superfície plana.
1 cm
x
y
d
Cuba de vidro
Papel de filtro
Fase móvel
Linha do solvente
Separação das substâncias 
químicas
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Noções básicas de cromatografia
Cromatografia em Camada Delgada
Origem
X1
Linha de chegada
D
Fator de retenção (Rf):
Rf =
D
X2
X3
X4
X
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Noções básicas de cromatografia
Cromatografia em Camada Delgada
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Noções básicas de cromatografia
E se a mancha não é colorida e nem visível a 
olho nu?
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Noções básicas de cromatografia
A- Procedimentos Físicos: Luz ultravioleta (aromáticos ou dupla 
ligação conjugada).
B- Procedimentos Biológicos e Enzimáticos: Antibióticos, Enzimas
e Substratos.
C- Procedimentos Químicos: Aplicação de um reativo químico para
formar um derivado colorido ou fluorescente.
Revelação dos cromatogramas
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Noções básicas de cromatografia
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Noções básicas de cromatografia
Utiliza-se reações enzimáticas ou
bacterianas para tornar a mancha
visível.
Ex.: para testar se uma amostra
contém substância anti-fúngica,
revela-se o cromatograma com
esporos de fungos. Os fungos não
crescerão onde houver essas
substâncias.
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Noções básicas de cromatografia
É muito utilizada para isolamento de produtos
naturais e purificação de produtos de reações
químicas.
As fases estacionárias mais utilizadas são
sílica e alumina.
Fases estacionárias sólidas levam à separação
por adsorção e fases estacionárias líquidas
por partição.
Cromatografia em coluna
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Noções básicas de cromatografia
Cromatografia em coluna
1. Fixar a coluna 
verticalmente
3. Manter um béquer abaixo 
da coluna
5. Adicionar a sílica dentro 
da coluna e esperar o 
material assentar
2. Colocar um 
chumaço de algodão
Observação: não deixar a coluna 
secar durante o experimento 
6. Depositar a amostra que 
será purificada
4. Encher a coluna com 
solvente 
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Noções básicas de cromatografia
Cromatografia em coluna
Tempo
Amostra
Fase móvel
Fase estacionária
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Noções básicas de cromatografia
Cromatografia em coluna
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Noções básicas de cromatografia
Cromatografia em coluna
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Noções básicas de cromatografia
Cromatografia líquida de alta eficiência
É uma técnica analítica usada para separar e 
quantificar componentes numa mistura líquida. 
A utilização de suportes com partículas diminutas 
são os responsáveis pela alta eficiência desse 
método de cromatografia.
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Noções básicas de cromatografia
Cromatografia líquida de alta eficiência
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Noções básicas de cromatografia
Cromatografia líquida de alta eficiência
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Noções básicas de cromatografia
Cromatografia líquida de alta eficiência
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Noções básicas de cromatografia
Cromatografia gasosa
Técnica de separação e análise de misturas por 
interação dos seus componentes entre uma fase 
estacionária e uma fase móvel.
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Noções básicas de cromatografia
Cromatografia gasosa
 A amostra é injetada e
arrastada pela fase móvel
através da coluna que contém
a fase estacionária, onde
ocorre a separação da
mistura.
 As substâncias separadas
saem da coluna dissolvidas na
fase móvel e passam por um
detector que gera um sinal
elétrico proporcional à
quantidade de material
separado.
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Noções básicas de cromatografia
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Noções básicas de cromatografia
Tipo de amostra
Tipo de cromatograf ia
Melhor apl icação