7 RADIOIMUNOENSAIO ALERGIAS

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Aula 07
Curso biomedicina
Profa. Aline fièvez
1. Radioimunoensaio
hipersensibilidade
Definição
Termo aplicado a patologias mediadas por respostas imunes que acarretam danos aos tecidos do hospedeiro
Classificação
Tipo I, imediata, alérgica ou anafilática
Tipo II ou reação citotóxica
Tipo III ou imune complexa
Tipo IV ou tardia
https://globoplay.globo.com/v/4681905/
https://videos.band.uol.com.br/16322210/exame-identifica-alergia-com-apenas-uma-gota-de-sangue.html
Hipersensibilidade do Tipo I, imediata, alérgica ou anafilática
Imediata: de minutos à horas após a exposição
> tempo = resposta primária
< tempo = resposta secundária – produção prévia de IgE
radioimunoensaio
https://www.youtube.com/watch?v=BoHhKXcl3SE
radioimunoensaio
radioimunoensaio
A produção de IgE depende da “coordenação” das células TH2
Radioimunoensaio
1. Características gerais
1959 Berson e Yalow – primeiro RIA (Radio-immuno Assay) para quantificação de insulina
Precursor do ELISA
Um dos métodos mais sensíveis para a análise quantitativa das reações Ag-Ac
Permite medidas rápidas e precisas 
Detecção na ordem de nanogramas (10-9) ou picogramas (10-12)
Marcações
Iodo 125
Radioisótopo mais comumente empregado - emite raios gama
Usado para marcar hormônios proteicos (resíduos de tirosina)
Meia vida de 57,5 dias
Estabilidade menor que 3h
Trítio H3
Emite raios beta
Usado para detectar esteróides
Carbono 14 
2. Componentes da reação
Antígeno ou Anticorpo radioativo
O termo radioimunoensaio (RIA) é mais empregado em ensaios com antígenos marcados
O termo imunorradiométrico (IRMA) é utilizado em ensaios com anticorpos marcados
Amostra a ser testada
Leitor radiométrico
Radioimunoensaio
3. Tipos de reação
Competitivo com antígeno marcado
Competitivo com anticorpo marcado
Sanduíche ou captura de antígeno
Radioimunoensaio
Competitivo com antígeno marcado
Técnica:
Quantidade fixa e limitada de anticorpo é ligada a um suporte
Adiciona-se uma quantidade fixa e pequena de antígeno marcado
Adiciona-se a amostra-teste
Período de incubação
Lavagem para remover o antígeno (marcado e da amostra) não ligado
Medição da radioatividade
Competitivo com anticorpo marcado
Técnica:
Quantidade fixa do antígeno é imobilizada em um suporte sólido
Adiciona-se uma quantidade fixa e pequena de anticorpo marcado 
Adiciona-se a amostra – teste
Período de incubação
Lavagem para remover o anticorpo (marcado e da amostra) não ligado
Medição da radioatividade
Radioimunoensaio de captura
Radioimunoensaio de captura
Técnica:
Quantidade fixa de anticorpo é imobilizada em um suporte sólido
Adiciona-se a amostra-teste
Período de incubação
Lavagem para remover o antígeno (amostra) não ligado
Adiciona-se anticorpos marcados específicos para o antígeno, com sítio de ligação diferente do sítio do anticorpo de fase sólida
Incubação
Lavagem para remover o anticorpo marcado não-ligado
Medição da radioatividade
RADIOIMUNOENSAIO
4. Tipos de reação RIA (antígenos marcados) para detecção de Imunoglobulina IgE
Paper radioimmunosorbent Test (PRIST)
Radioallergosorbent Teste (RAST)
Radioallergosorbent Test (RAST)
Técnica:
Quantidade fixa de alérgeno é imobilizada em um suporte inerte
Adiciona-se a amostra-teste com quantidade desconhecida de anticorpo
Período de incubação
Remove-se o anticorpo não-ligado
IgE da amostra é revelada pela adição de um segundo anticorpo marcado
O anticorpo marcado não-ligado é removido por lavagem
Faz-se a medida da radioatividade do suporte inerte
Radioimunoensaio
6. Aplicação clínica
Hormônios
Drogas - antidoping
Marcadores tumorais
Anticorpos contra vírus, bactérias, protozoários e fungos
Anticorpos em processos alérgicos
Equipamento GAMMA Counter - contador de radiações gamma utilizando os radioisótopos: I-129, I-125,Co-57, Cs-137
Executa testes de radioimunoensaios RIA e IRMA
RDC nº 50, de 21 de fevereiro de 2002 – Infra-estrutura física de estabelecimentos assistenciais de saúde - procedimentos de Medicina Nuclear “in vitro”
Radioimunoensaio
Desvantagens
Custo do teste
Vida média dos reagentes - Instabilidade dos radioisótopos
Risco operacional
Elevado custo de biossegurança
Vantagens
Requer pouca amostra
Rapidez
Alta sensibilidade - permite dosagem de substâncias não encontradas em concentrações suficientes para serem percebidas por outras técnicas