[Seminário] Bioquímica - Radioimunoensaio

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Radioimunoensaio
UNIVERSIDADE FEDERAL DO ESPÍRITO SANTO
CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE
CURSO DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS FISIOLÓGICAS
DISCIPLINA DE BIOQUÍMICA
Alunos: Arthur Gonzalez Brioschi, Jhully Oliveira Ferreira e João Peçanha Schuwartz.
Professor: Alexandre Martins Costa Santos.
 
VITÓRIA-ES
2019/1
1.INTRODUÇÃO
❖ Rosalyn Yalow(física médica);
❖ Estadunidense;
❖ Prêmio Nobel de Fisiologia ou Medicina 
de 1977.
1.INTRODUÇÃO
❖ 1959 - primeiro RIA para a quantificação de 
insulina;
❖ Primeira técnica imunológica padronizada 
capaz de quantificar e detectar substâncias 
da ordem de nano a picogramas.
1.INTRODUÇÃO
❖ O radioimunoensaio(RIA) é uma técnica 
usada para quantificar compostos químicos 
como hormônios, drogas, imunoglobulinas e 
marcadores tumorais;
❖ Sensibilidade muito alta;
❖ Determina a quantidade de antígeno presente 
no soro do paciente através da contagem de 
material radioativo presente na reação.
2.DEFINIÇÕES
❖ Em técnicas que utilizam antígenos marcados, emprega-se o termo 
radioimunoensaio(RIA);
❖ Em técnicas que utilizam anticorpos marcados, emprega-se o termo ensaio 
imunorradiométrico(IRMA).
3.TÉCNICA RADIOIMUNOENSAIO
PREPARAÇÃO DE 
TUBOS COM OS 
ANTICORPOS
ADIÇÃO DE 
ANTÍGENOS 
MARCADOS 
ANTÍGENOS 
MARCADOS SE 
LIGAM AOS 
ANTICORPOS
ADIÇÃO DE 
ANTÍGENOS NÃO 
MARCADOS
COMPETIÇÃO 
PELOS SÍTIOS 
DE LIGAÇÃO
ADIÇÃO DE 
ANTICORPOS 
SECUNDÁRIOS
SEPARAÇÃO DAS 
FRAÇÕES
RELAÇÃO ENTRE 
CONCENTRAÇÃO DA 
FRAÇÃO LIGADA E DA 
FRAÇÃO LIVRE
TÉCNICA 
RADIO
IMUNO
ENSAIO
COLOCAR ESQUEMA DO LIVRO (A)
TÉCNICA 
RADIO
IMUNO
ENSAIO
3.TÉCNICA RADIOIMUNOENSAIO
❖ Quanto maior a radiação na fração ligada, maior vai ser a concentração de 
antígenos marcados ligados aos anticorpos. Indicando que a concentração de 
antígenos não marcados na amostra é pequena;
❖ Quanto maior a radiação na fração livre, menor é a concentração de antígenos 
marcados ligados aos anticorpos. Indicando que a concentração de antígenos 
não marcados na amostra é grande. 
4.RADIOATIVIDADE
❖ Marcadores geralmente aplicados: 125-I;
❖ C14 E H3;
❖ Atividade específica alta do antígeno 
radiomarcado(125-I) é preparada pela 
iodação do antígeno puro em seus resíduos 
de tirosina por métodos de cloramina-T ou 
peroxidase.
4.RADIOATIVIDADE
❖ Separa-se o antígeno radiomarcado do 
isótopo livre por HPCL;
❖ Componente importante: anticorpo 
específico contra o antígeno e antígeno 
puro para uso como padrão ou 
calibrador.
5.TÉCNICAS DE SEPARAÇÃO
❖ Frações livre e ligada são contadas por 
um contador gama(GAMMA 
COUNTER);
❖ A determinação é feita após a separação 
do complexo antígeno-anticorpo dos 
antígenos não ligados.
GAMMA COUNTER
5.TÉCNICAS DE SEPARAÇÃO
❖ Classificadas em três categorias, segundo o meio:
➢ Precipitação em fase líquida;
➢ Precipitação em fase sólida ou semi-sólida;
➢ Adsorção em fase sólida.
5.1.PRECIPITAÇÃO EM FASE LÍQUIDA
❖ Primeiro a ser desenvolvido;
❖ Soluções em que os Ag marcados e os Ac específicos estão dissolvidos;
❖ Adição da amostra de soro sanguíneo contendo Ag não marcado;
❖ Polietilenoglicol(PEG);
❖ Técnica em desuso;
❖ Insulina.
5.2.PRECIPITAÇÃO EM FASE SÓLIDA OU 
SEMI-SÓLIDA
❖ Material constituído de substâncias magnéticas;
❖ Carvão ativado;
❖ Dextrano;
❖ Cortisol, TSH, LH, FSH, hCG, T4, T3, progesterona.
5.3.ADSORÇÃO EM FASE SÓLIDA
❖ Um dos reagentes(geralmente Ac) é imobilizado na fase sólida, nas 
cavidades das placas plástica de microtitulação;
❖ Adsorção ou conjugação covalente;
❖ Após a incubação, descarta-se o sobrenadante e conta-se nos detectores os 
tubos que prenderam Ag marcado;
❖ Placa bloqueada;
❖ Lavagem das placas com tampões;
❖ Mais rápida e menos reagentes.
SENSIBILIDADE
❖ Melhorada ao diminuir a quantidade 
de antígeno e/ou anticorpo marcado;
❖ Incubação de desequilíbrio.
VANTAGENS DO 
MÉTODO
❖ Sensível;
❖ Específico;
❖ Alta afinidade;
❖ Requer pouca amostra;
❖ Rápido.
DESVANTAGENS 
DO MÉTODO
❖ Instabilidade dos radioisótopos;
❖ Risco operacional;
❖ Necessidade de medidas especiais;
❖ Elevados custos de biossegurança;
❖ Problemas com o descarte do 
material.
REFERÊNCIAS
Biomedical Science Practice - Experimental and profissional skills
https://www.antibodies-online.com/resources/17/1215/radioimmunoassay-ria/
http://www.ufrgs.br/biofisica/Bio10003/MIMUNO.pdf
https://pt.scribd.com/doc/58850327/Radioimunoensaio
https://www.ufrgs.br/lacvet/restrito/pdf/hormonios.pdf
http://europepmc.org/backend/ptpmcrender.fcgi?accid=PMC319531&blobtype
=pdf
https://jpma.org.pk/article-details/5022?article_id=5022
https://www.antibodies-online.com/resources/17/1215/radioimmunoassay-ria/
http://www.ufrgs.br/biofisica/Bio10003/MIMUNO.pdf
https://pt.scribd.com/doc/58850327/Radioimunoensaio
https://www.ufrgs.br/lacvet/restrito/pdf/hormonios.pdf
http://europepmc.org/backend/ptpmcrender.fcgi?accid=PMC319531&blobtype=pdf
http://europepmc.org/backend/ptpmcrender.fcgi?accid=PMC319531&blobtype=pdf
https://jpma.org.pk/article-details/5022?article_id=5022
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