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CARACTERÍSTICAS GERAIS DAS BACTÉRIAS – II- NUTRIÇÃO E CRESCIMENTO Básica 1. TRABULSI, L.R. & ALTERTHUM, F. Microbiologia. 6ª edição, São Paulo, Atheneu, p. 21 - 36, 2015. 2. TORTORA, G.J; FUNKE, B.R.; CASE, C.L. Microbiologia. 10ª edição, Porto Alegre, Artmed, p. 113 - 182, 2012. 3. VERMELHO, A.B.; BASTOS, M.C.F.; SÁ, M.H.B. de. Bacteriologia Geral, Rio de Janeiro, Guanabara Koogan, p. 122 - 182, 2007. Aula teórica 03 Dra. Danielle Silva Araujo E-mail: daniellebiomedaraujo@gmail.com Nutrição microbiana Importantes para nutrição, crescimento e multiplicação. Formação de componentes celulares e metabolismo. Captados do meio extracelular. São de três tipos: Macronutrientes. Micronutrientes ou elementos traços. Fatores de crescimento. Macronutrientes: necessários em quantidades apreciáveis. Micronutrientes: bastam traços. ⚫ Polissacarídeos: parede celular, cápsula ⚫ Lipídeos: membrana celular, parede celular ⚫ Proteínas: membrana celular, parede celular, flagelos ⚫ Ácidos nucléicos: DNA, RNA Importância da nutrição MACRONUTRIENTES CARBONO: 50% do peso seco. Forma inorgânica ou orgânica. Glicose, extratos complexos, peptona, aminoácidos. OXIGÊNIO: 20% do peso seco. Componente da estrutura celular e citoplasma. Água, compostos orgânicos e CO2. HIDROGÊNIO: 8% do peso seco. Obtido da água e compostos orgânicos. MACRONUTRIENTES NITROGÊNIO: 12% do peso seco NH4 +, NO3 -, NO2 -, N2, uréia, proteínas, aminoácidos Componente de proteínas, ác. nucléicos. Assimilação por enzimas – nitrogenase. Grupo amino dos aminoácidos, derivado do glutamato – transaminases. Outras enzimas: Glutamina sintase, glutamato sintase e desidrogenase. FÓSFORO (3%): energia e síntese de ácidos nucleicos, fosfolipídeos, ác. teicóicos. Tampões (KH2PO4; (NH4)3PO4). ENXOFRE (1%): cistina, cisteína, vitaminas: biotina e tiamina. POTÁSSIO (1%): enzimas e pressão osmótica MAGNÉSIO (0,5%): (co-fator de enzimas, síntese de proteínas, união das frações ribossômicas). CÁLCIO (0,5%): co-fator de enzimas, endosporo. FERRO (0,2%): citocromos e pigmentos. MACRONUTRIENTES Cobre – citocromo c oxidase, superóxido dismutase. Cobalto – vitamina B12. Zinco. Manganês . Molibdênio. Sódio e muitos outros. Nota: O papel de cada micronutriente não é tão bem conhecido, dadas as dificuldades de seu estudo. MICRONUTRIENTES FATORES DE CRESCIMENTO São os compostos orgânicos indispensáveis a um determinado microrganismo, mas que ele não consegue sintetizar (devem estar presentes no meio para que o microrganismo possa crescer). Exemplos: vitaminas (complexo B), aminoácidos, nucleotídeos e ácidos graxos. FONTES DE CARBONO Autotróficos: única fonte de carbono é o gás carbônico (CO2) ou o íon bicarbonato. Heterotróficos: exigem fontes orgânicas de carbono. FONTES DE ENERGIA Fototróficos: Luz - fotossintéticas. Quimiotróficos: Compostos químicos – oxidados ou fermentados. FONTES DE ELÉTRONS Fototróficos: composto inorgânico como doador de elétrons. Organotróficos: composto orgânico para respiração. Quimio-heterotróficos ou quimiorganotrófico heterotrófico ÁGUA: não é nutriente SOLVENTE UNIVERSAL Regulação da pressão osmótica. Térmica. Passagem de substâncias pela membrana. DESSECAÇÃO MORRE RAPIDAMENTE. BACTÉRIAS ESPORULADAS Sobrevivem a dessecação. ATMOSFERA GASOSA PRESENÇA OU AUSÊNCIA DE O2 Oxigênio gasoso (O2) ESSENCIAL LETAL ou NÃO PREJUDICIAL para as bactérias CLASSIFICADAS EM 5 TIPOS - ideal para crescimento OXIGÊNIO ATMOSFÉRICO Aeróbias (exigem O2 livre). Microaerófilas (exigem leve tensão de O2 livre). Anaeróbias estritas (não toleram O2 livre). Aerotolerantes (Anaeróbias não-estritas) (não usam o O2 atmosférico mas este não é tóxico). Facultativas (com ou sem O2 livre). OXIGÊNIO ATMOSFÉRICO ATMOSFERA DE MICROAEROFILIA Jarra com vela. A combustão da vela consome parcialmente o oxigênio existente no interior da jarra. Quando a chama da vela se extingue, a concentração de CO2 atinge cerca de 10%. Jarra de anaerobiose. O envelope adicionado possui bicarbonato de sódio e boridreto de sódio, que geram H2 e CO2. H2 reage com O2 formando H2O. CRESCIMENTO DE BACTÉRIA ANAERÓBIA − Remoção física do oxigênio. TEMPERATURA ADEQUADA EXERCE grande influência no crescimento: multiplicação dos microrganismos Cada espécie bacteriana: temperatura ótima Temperatura: pH Crescem melhor em meios: pH entre 6,5 e 7,5 MAIOR ABSORÇÃO DE NUTRIENTES Algumas: crescem em meios mais ácidos ou básicos (manter concentração de íons hidrogênio) pH meio X pH intracelular Efeito Osmótico Halófilos discretos (1-6% NaCl) Halófilos moderados (7-15% NaCl) Halófilos extremos são um problema na industria alimentícia que usa alta concentração de sais e de açucares (osmófilos) como conservantes Xerófilos – crescem em ambientes com pouca quantidade de água. MEIOS DE CULTURA CONDIÇÕES DE CULTIVO ⚫ Meios de cultura: mistura de nutrientes necessários ao crescimento microbiano Cultivo artificial das bactérias. Não existe um meio universal. Cultura: população microbiana em crescimento ativo em um meio nutritivo. Cultura pura − única espécie (na prática cultura axênica?). Formação de uma colônia bacteriana sobre meio de crescimento sólido (T =30 min). ⚫ Sintéticos: composição conhecida ⚫ Complexos: desconhecimento da composição qualitativa e quantitativa exata ⚫ Líquidos: solução aquosa ⚫ Semi-sólidos: contém 0,5% de ágar ⚫ Sólidos: contém 2% de ágar MEIOS DE CULTURA QUANTO A SUA COMPOSIÇÃO MEIOS SINTÉTICOS: meios quimicamente definidos Composição química: Qualitativa e quantitativa conhecida QUANTO A SUA COMPOSIÇÃO MEIOS SEMI-SINTÉTICOS: parte dos compostos conhecidos e outra parte desconhecida ou variável 5 % de glicose 0,5% de peptona 0,2% de KNO3 0,4% de CaCl2 0,4% de MgSO4 MEIOS COMPLEXOS: quimicamente indefinidos, composição química não é perfeitamente definida Extrato de carne, peptonas, extrato de levedura, Soro, Sangue.... Rotina laboratorial: meios complexos. QUANTO A SUA COMPOSIÇÃO MEIO DE CULTURA SELETIVO: Impede o crescimento de alguns microrganismos - favorece de outros Ágar MacConkey: Vermelho Neutro: cora bactérias fermentadoras de lactose CristalVioleta: inibe bactérias Gram positivas QUANTO À FUNÇÃO MEIO DE CULTURA DIFERENCIAL: DIFERENCIAR MICRORGANISMOS PARECIDOS Mesma coloração de GRAM: funções fisiológicas diferentes - espécie diferente Vermelho Neutro: cora bactérias fermentadoras de lactose QUANTO À FUNÇÃO MEIO DE CULTURA DIFERENCIAL: ÁGAR SANGUE: ágar mais 5% de sangue de carneiro Diferencial para a HEMÓLISE QUANTO À FUNÇÃO MEIO DE CULTURA DE ENRIQUECIMENTO: Nutrientes complexos e adequados Crescimento de microrganismos em baixo número ou de crescimento lento MICRORGANISMOS exigentes e fastidiosos PROPRIEDADE DE ESTIMULAR: crescimento de determinados microrganismos - inibir de outros QUANTO À FUNÇÃO CALDO TETRATIONATO = Sais de bile: inibe Gram positivos Adição de iodine-iodeto: inibe a microbiota intestinal normal - Salmonella CALDO SELENITO-CISTINA= Inibe coliformes. QUANTO À FUNÇÃO MEIOS PARA TESTES MICROBIOLÓGICOS – PROVAS BIOQUÍMICAS: Avalia atividade metabólica/função fisiológica do microrganismo Caracterização e identificação da espécie em questão QUANTO À FUNÇÃO 1) E. coli 2) Shigella 3) Proteus ou Salmonella 4) Não Fermentador (Pseudomonas) CRESCIMENTO BACTERIANO CRESCIMENTO BACTERIANO Dois níveis: crescimento individual e populacional. CRESCIMENTO POPULACIONAL: AUMENTO DO NÚMERO DE BACTÉRIAS. INDIVIDUAL: CRESCIMENTO SOMATÓRIO DOS PROCESSOS METABÓLICOS PROGRESSIVOS, conduz à divisão celular (reprodução). CRESCIMENTO BACTERIANO REPRODUÇÃO: DIVISÃO BINÁRIA. CélulaGERA duas células-filhas, idênticas. CRESCIMENTO: comprimento, largura e altura. TAMANHO ADULTO: TAMANHO DA BACTÉRIA NA HORA DA DIVISÃO. A grande maioria das bactérias divide-se dando origem a duas células filhas (divisão binária). Entretanto, algumas espécies formam brotos que crescem até atingir o tamanho da célula mãe e, então, destacam-se. 1) REPLICAÇÃO do DNA: duplicação cromossômica. 2) AUMENTO de TAMANHO da célula mãe. 3) ALARGAMENTO: membrana citoplasmática e parede celular. CRESCIMENTO BACTERIANO – Divisão binária 4) DISTRIBUIÇÃO do material nuclear, 4) INÍCIO DA DIVISÃO CELULAR: INVAGINAÇÃO da membrana citoplasmática SÍNTESE DA PAREDE CELULAR: formação do septo transversal central SEPARAÇÃO das células-filhas PODEM PERMANECER UNIDAS: arranjos CRESCIMENTO BACTERIANO – Divisão binária TEMPO DE GERAÇÃO Período de tempo: célula bacteriana duplica cromossomo e divide-se Duas novas células = TEMPO DE GERAÇÃO Varia de minutos a algumas horas: espécie e do meio Escherichia coli : cerca 20 minutos Curva de crescimento: meio líquido, nutrientes, atmosfera e temperaturas adequados TEMPO DE GERAÇÃO CURVA DE CRESCIMENTO CONDIÇÕES IDEAIS: crescimento bacteriano segue uma curva definida e característica CURVA DE CRESCIMENTO DIVIDIDA EM 4 FASES: Lag ou fase adaptação (ou arranque) Log ou crescimento exponencial ou logarítmico Estacionária DECLÍNIO ou Morte CURVA DE CRESCIMENTO FASE LAG Células bacterianas não estão se dividindo Metabolicamente ativas: adaptação ao meio de cultura, absorção de nutrientes Síntese de vários compostos: ribossomos, grânulos, enzimas, duplicando nucleoide, Preparo para a divisão CURVA DE CRESCIMENTO FASE LOG OU EXPONENCIAL • Bactérias plenamente adaptadas • Divisão celular: crescimento populacional • Multiplicação bacteriana rápida e constante • Crescimento elevado • Consumo de nutrientes CURVA DE CRESCIMENTO FASE ESTACIONÁRIA Sem aumento no número de bactérias Concentração bacteriana constante: máximo Número de células geradas = número de células mortas Escassez de nutrientes, acúmulo de produtos do metabolismo (tóxicos): alteração no pH CURVA DE CRESCIMENTO FASE DECLÍNIO OU MORTE SEM NUTRIENTES ACÚMULO DE metabólitos não desejáveis = TÓXICOS Predomina a morte das células bacterianas 1 célula bacteriana: tempo de geração de 20 min. 48 horas: progênie de 2144 ou 2,2 x 1043 células. 1 célula: pesa cerca de 10-12 gramas. Peso total: 2,2 x 1031 gramas ou ... 22.000.000.000.000.000.000.000.000 toneladas Nota: 22 x 1024 toneladas = aproximadamente 4 vezes maior do que a massa da terra toda. Tanto na natureza como no laboratório, o crescimento de populações bacterianas se torna limitado, seja pela exaustão dos nutrientes disponíveis, seja pela acumulação de substâncias tóxicas. Como essas mudanças no ambiente decorrem do crescimento das próprias bactérias o desenvolvimento de populações bacterianas é autolimitado. CRESCIMENTO BACTERIANO − Crescimento exponencial por 48 horas? MÉTODOS PARA AVALIAR O CRESCIMENTO BACTERIANO CONTAGEM DAS CÉLULAS Contagem em câmara de Neubauer Métodos de semeadura Medidas turbidimétricas Determinação do peso seco Vermelho et al.,p.179, 2007. Vermelho et al.,p.180, 2007.
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