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Prof. Andrea Balan Laboratório de Biologia Estrutural Aplicada LBEAt abalan@usp.br Depto. de Microbiologia – ICB/USP BMM0252 2021 Morfologia e Estrutura Bacteriana mailto:abalan@usp.br Objetivos da aula Apresentar a célula bacteriana e as principais estruturas funcionais Discutir brevemente as características e estruturas da célula que são importantes na identificação de bactérias associadas aos alimentos 2 Roteiro da aula Aspectos sobre a diversidade e morfologia bacteriana • Membrana e envelope celular • Material genético • Proteínas Componentes da estrutura bacteriana e suas funções Acessórios bacterianos 3 Bactérias apresentam grande variabilidade morfológica determinada por fatores ambientais e genéticos 4 ”esperado” Meio A Meio B Inconsistência entre o observado e o isolado Culturabilidade de microorganismos do ambiente 5 Fatores que afetam a culturabilidade de microorganismos do ambiente • Diversidade metabólica dos microorganismos • Baixa culturabilidade microbiana • Seletividade dos meios de cultivo • Seletividade das condições de cultivo: CO2, O2, temperatura, fonte de C, N e etc. • Pequena representatividade da comunidade in vivo (coleções de culturas) 6 Morfologia da célula bacteriana Arranjos em cocos Arranjos em bacilos Formas espiraladas 7 Bacilos Relação com o plano de divisão celular e segmentação 8 o Bastonetes o Espirilo o Cocos o Células na forma de discos conectados por túbulos (cânulas) o Irregulares Tipos celulares de Arquéias Pyrodictium abyssi Halobacterium sp. Halococcus thailandensis Methanospirillum sp. Sulfolobus sp. 9 Cocos Halococcus thailandensis Diplococcus Staphylococcus 10 Componentes da estrutura bacteriana e suas funções 11 1 - Cadeia de isoprenos 2 – Ligação Éter 3 – L-Glicerol 3, 4 – Glicerol-1-fosfato 5 – Ácidos graxos 6 – Ligação Éster 3 – D-Glicerol 3, 4 – Glicerol-3-fosfato Arquéias Bactérias e Eucariotos Bactérias e Eucariotos: Bi-camada lipídica Arquéias: monocamada Alguns componentes da parede celular são importantes para definição de grupos microbianos 12 • Rígida (petidoglicanos) • Confere forma e proteção às mudanças de pressão. • Exoesqueleto, defesa e proteção • Mycoplasma não apresentam parede celular (mais sensíveis às variações osmóticas. A parede celular de bactérias apresentam algumas características importantes 13 Principais diferenças entre as paredes celulares de bactérias 14 Distinções estruturais • Membrana citoplasmática • Bactérias e eucariotos: cadeias de ácidos graxos ligados à moléculas de glicerol por ligações éster. • Arqueas: ramos de cadeias de hidrocarbonetos ligados a moléculas de glicerol por ligações éter. Ácidos graxos não são encontrados. 15 Principais diferenças entre gram positivos e gram negativos Gram-positivas • Parede relativamente espessa ao microscópio eletrônico • Peptidioglicano como principal componente (~50%) • Sem lipídios e frequentemente sem proteínas • Outros polímeros: ácido teicóico e/ou ácido lipoteicóico covalentemente ligados ao peptidioglicano. Gram negativas • O envelope celular composto por 2 membranas (citoplasmática e exterior), com um fina camada intermediária de peptidoglicano • A membrana externa com lipopolissacarídeos (LPS), lipídeos e proteínas. • LPS está localizado exclusivamente no folheto exterior com os lipídios incorporado na membrana, polissacarídeo expostos. 16 A coloração de Gram é um importante método de diferenciação dos dois grande grupos bacterianos • Método importante e utilizado em laboratórios de microbiologia e análises clínicas para diferenciar grandes grupos bacterianos; • Gram positivos e gram negativos habitam ambientes diferentes e causam doenças diferentes; • Métodos de controle/tratamento das infecções são diferentes • Importante para o rastreamento da origem das contaminações, principalmente em alimentos 17 Coloração de Gram As diferenças do envelope celular permitem que os dois grupos sejam corados de forma diferenciada 18 Streptococcus (Gram positiva) e Escherichia coli (Gram negativa) Coloração de Gram de cultura mista 19 Lipopolissacarídeos O peptídeo glicano em gram positivos é exposto e mais susceptível à ação enzimática • O LPS está presente na membrana externa de bactérias gram negativas • É constituído de uma base formada por lipídio A, um core interno e um core externo, e ligado a este último o antígeno-O • um Antigeno-O é a parte imunodominante do LPS e é alvo para a resposta humoral do hospedeiro. • A cadeia de LPS pode variar em comprimento, com até 40 unidades repetidas de dideoxyhexoses. • Pelo menos 20 diferentes moléculas de açúcar podem compor o antigeno-O, incluindo moléculas que são raramente encontrados na natureza, como abequose, colitose, paratose e tyvelose e são específicos de linhagem. 20 O Peptídeo glicano O peptídeo glicano em gram positivos é exposto e mais susceptível à ação enzimática • O peptídeo glicano é um excelente alvo para a inibição de bactérias gram positivas porque está exposto. • É a principal camada de proteção destes organismos • Lisozimas são enzimas do tipo glicosidases (quebram açúcares) com ação específica para o ácido N- acetil murâmico (MurNAc), componente do envelope celular de bactérias • Presente em clara de ovo e em lágrimas • Em Gram-negativas a membrana exterior impede o acesso ao peptidoglicano 21 A Membrana Plasmática 8 nm de espessura bicamada fosfolipídica (+-60% proteínas) interações hidrofóbicas de ácidos graxos, pontes de H, e Mg2+ e Ca2+ : integridade não contém esteróis duplicação do DNA A membrana plasmática é igual nos dois tipos bacterianos 22 Principais Funções da Membrana Plasmática Respiração e Fotossíntese 23 Transporte de solutos Efluxo de drogas Principais Funções da Membrana Plasmática 24 Outras organelas da célula bacteriana Material genético • Cromossomo circular codifica todas as informações essenciais da célula • Plasmídios DNA circular não carregam informações essenciais número variável resistência a antibióticos, fixação de N2, etc engenharia genética 25 Ribossomos Vacúolos Gasosos - flutuação - membrana protéica -70S Grânulos - reserva - PHB (poli-hidroxibutirato) Outras organelas da célula bacteriana 26 Glicocálice • Cápsula é uma camada mucosa de polímeros orgânicos • Reservatório de água e nutrientes • Aumentam a capacidade de adesão e consequente invasão de bactérias patogênicas • Proteção da célula – pode evitar fagocitose Bactérias com capsula (em rosa claro) • Aderência (biofilmes) • Resistência e patogênese • uso industrial (espessantes alimentares, tintas) • Goma xantana 27 • Aumentam a motilidade das bactérias • Estrutura complexa • Variam no número e na posição de inserção • Flagelina Flagelos Bacterianos 28 Fimbrias e pili • Gram negativas • Pilina • Apêndices finos (3 a 10 nm), retos e curtos. • Bastante numerosas (1000 ou mais por célula) • Sítios receptores • Aderência / fixação 29 Pili • Normalmente mais longos que as fimbrias • Pili sexual: permite a transferência de DNA durante a conjugação 30 Endósporos • Estrutura produzida por bactérias como o objetivo de sobreviver em condições adversas. • Gêneros mais importantes: Bacillus e Clostridium. • A esporulação inicia com a célula vegetativa utiliza todos os nutrientes disponíveis • Os esporos conferem resistência à bactéria, a qual pode voltar a se desenvolver quando as condições ambientais são novamente favoráveis. 31 Endósporos podem ser identificados na coloração de gram Bacillus anthracis Clostridium botulinum Bacillus megaterium • Gram positivas • Resistência à condições ambientais adversas 32 Referências - Tortora, G. J., Funke, B. R. & Case, C. L. Microbiologia. Artmed, 8. Ed., 2005. - Trabulsi, L. & Alterthum , F. Microbiologia, Artmed, 5. Ed. , 2008. - Barbosa, HR, Gomez, JGC, Torres, BB. Microbiologiabásica – bacteriologia, 2aedição, Atheneu, 2018 33
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