Trabalho de eletroforese (2) 2

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BIBLIOGRAFIA: 
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https://kasvi.com.br/o-que-e-
eletroforese-e-qual-a-sua- 
importancia/
 BIOLOGIA MOLECULAR E BIOTECNOLOGIA 
Eletroforese
Conceitos e aplicações
Acadêmicos:
RGM: 30272262
RGM: 13470014
RGM: 12998225
RGM: 30013453
RGM: 30343658
RGM: 29717680
RGM: 29898439
RGM: 31935605 
Matutino / 3ºE 
Aplicações
Importância
 A ELETROFORESE É MUITO UTILIZADA NA
ANÁLISE LABORATORIAL E PESQUISA CIENTíFICA.
ESSA TÉCNICA FOI EMPREGADA PELA PRIMEIRA
VEZ EM 1937 PELO BIOQUIMICO ARNE TISÉLIUS E
PERMITE REALIZAR A SEPARAÇÃO DE
MACROMOLÉCULAS COMO DNA, RNA, PROTEÍNAS E
ENZIMAS COM TAMANHOS E CARGAS DIFERENTES.
 É UTILIZADA NA ROTINA LABORATORIAL,
DEVIDO A FORNECER INFORMAÇÕES ÚTEIS SOBRE
O ESTADO GERAL DO PACIENTE, CONTRIBUIR COM
O DIAGNÓSTICO E PROGNÓSTICO DE VÁRIAS
ENFERMIDADES E POSSUIR DIVERSAS VANTAGENS,
ENTRE ELAS A FACILIDADE DA EXECUÇÃO, A
VERSATILIDADE PARA DIVERSAS APLICAÇÕES, O
BAIXO CUSTO E A PRECISÃO NOS RESULTADOS.
 A ELETROFORESE É UTILIZADA EM INÚMEROS
PROCESSOS DE BIOLOGIA MOLECULAR, ENTRE ELES:
CIÊNCIA FORENSE– PARA COMPARAR O DNA
ENCONTRADO NO LOCAL DO CRIME COM O DE
POSSÍVEIS SUSPEITOS;
GENÉTICA– TESTE DE PATERNIDADE,
DIFERENCIAÇÃO DE ESPÉCIES OU LINHAGENS E
ENGENHARIA GENÉTICA;
MICROBIOLOGIA– DETECÇÃO DE DIFERENTES
PATÓGENOS COMO VÍRUS, BACTÉRIAS E FUNGOS;
CONTROLE DE PURIFICAÇÃO DE MACROMOLÉCULA;
ISOLAMENTO DE MACROMOLÉCULA;
CARACTERIZAÇÃO DE MOLÉCULAS;
DETERMINAÇÃO DE PERFIS MOLECULARES. 
Campus São Miguel
 PARA A REALIZAÇÃO DESSA TÉCNICA ,É
NECESSÁRIO UM CONJUNTO DE SISTEMAS
FORMADO POR UM SUPORTE DE FRACIONAMENTO,
UMA CUBA DE ELÉTROFORESE, UMA FONTE DE
VOLTAGEM E UMA SOLUÇÃO TAMPÃO,SENDO QUE:
 
 
 O SUPORTE PODE SER POR ACETATO DE CELULOSE,
GEL DE AGAROSE OU POLIACRILAMIDA E TUBOS
CAPILARES;
 A CUBA É UM EQUIPAMENTO FORMADO POR DOIS
COMPARTIMENTOS PREENCHIDOS COM SOLUÇÃO
TAMPÃO, FORMANDO OS ELETRODOS, SENDO UM
POSITIVO E UM NEGATIVO;
 A FONTE DE VOLTAGEM É UM APARELHO QUE
TRANSFORMA A CORRENTE ALTERNADA EM
CONTINUA, PODENDO TER A INTENSIDADE
REGULADA, ALÉM DE DETERMINAR A POLARIDADE
DOS COMPARTIMENTOS DA CUBA; 
 A SOLUÇAÕ TAMPÃO É FORMADA POR ÁGUA E SAL
ÁCIDO OU BÁSICO. 
 A ELETROFORESE TEM COMO PRINCÍPIO SEPARAR
AS MACROMOLECULAS:
POR DIFERENÇA DE TAMANHO; 
POR DIFERENÇA NA CONFORMAÇÃO ESTRUTURAL;
POR DIFERENÇA NA CARGA ELÉTRICA .
Princípio da técnica A técnica
 A TÉCNICA CONSISTE NA MIGRAÇÃO DE MOLÉCULAS
EM FUNÇÃO DA APLICAÇÃO DE UM CAMPO ELÉTRICO.
 
 A PRINCÍPIO, A MOSTRA É APLICADA EM GEL E A
FONTE DE ELETROFORESE CRIA A CORRENTE ELÉTRICA, E
COM ELA, DOIS POLOS DISTINTOS, UM POSITIVO (ÂNODO)
E OUTRO NEGATIVO (CÁTODO), QUE GERAM UM
POTÊNCIAL ELÉTRICO E OCASIONAM NA MIGRAÇÃO DA
AMOSTRA EM DIREÇÃO A SUA CARGA DE AFINIDADE. NO
ENTANTO, QUANTO MAIOR A MOLÉCULA, MAIS LENTO É
ESTE PROCESSO,O QUE FAZ COM QUE MOLÉCULAS DE
DIFERENTES TAMANHOS REALIZEM ESTE TRAJETO DE UM
PÓLO A OUTRO EM TEMPO E VELOCIDADES DISTINTOS,
GERANDO DIFERENTES BANDAS.
 PARA A REALIZAR A OBSERVAÇÃO DESSAS BANDAS, É
UTILIZADO UM CORANTE QUE SOB A LUZ UV DE UM
TRANSILUMINADOR EMITA FLUORESCÊNCIA, O QUE
PERMITE A SUA LEITURA E COMPARAÇÃO COM UM
PADRÃO, PARA ASSIM GUIAR O PESQUISADOR DURANTE
A ANÁLISE. 
 
Materiais utilizados
Alguns tipos de eletroforese 
 A ELETROFORESE CAPILAR (EC) É UMA TÉCNICA DE
SEPARAÇÃO ANALÍTICA, QUE POSSUI COMO GRANDE
VANTAGEM SER COMPATÍVEL COM OS CONCEITOS DE
QUIMICA VERDE , ALÉM DE SER CAPAZ DE SEPARAR
VÁRIOS ANALITOS DE ORIGEM BIOLÓGICA COMO
ÁCIDOS NUCLEICOS, PROTEÍNAS, CARBOIDRATOS,
LIPÍDIOS E METABÓLITOS SECUNDÁRIOS.
 SEUS FUNDAMENTOS SE BASEIAM NA APLICAÇÃO DE
UMA DIFERENÇA DE POTENCIAL ENTRE DOIS ELETRODOS
EM UMA SOLUÇÃO IÔNICA QUE PROVOCA O TRANSPORTE
DE CORRENTE ELÉTRICA POR MEIO DOS ÍONS
FORMADOS. 
Eletroforese capilar: 
Focalização isoelétrica:
 ESSE TIPO DE ELETROFORESE É USADO
ESPECÍFICAMENTE PARA O FRACIONAMENTO DE
SUBSTÂNCIAS MOLECULARES, COMO PROTEÍNAS E
DNA, SOMENTE POR SUAS CARGAS ELÉTRICAS,
PERMITINDO QUE CADA PROTEÍNA MIGRE PARA O
PONTO ISOELÉTRICO E SE CONCENTRE NAS ZONAS EM
QUE ALCANCE A POSIÇÃO DO PH ESPECÍFICO. ESTE
MÉTODO CARACTERIZA-SE PELO USO DE UM SUPORTE
DE GEL (ÁGAR OU POLIACRILAMIDA) QUE TENHA
ADICIONADO EM SUA COMPOSIÇÃO SUBSTÂNCIAS
ANFOTÉRICAS, DISTRIBUIDAS EM FAIXAS DE PH
GRADUAIS DISPOSTAS EM ZONAS ESTABELECIDAS
ENTRE O ÂNODO E CÁTODO. 
Eletroforese em gel de acrilamida:
 A ELETROFORESE EM GEL DE POLIACRILAMIDA TEM
COMO FOCO A SEPARAÇÃO DE PROTEÍNAS E
PARTÍCULAS PEQUENAS DE DNA E RNA, EXISTINDO
DIVERSAS VANTAGENS PARA ESSA TÉCNICA. UMA
DELAS É A POSSIBILIDADE DE APLICAÇÃO DE
MAIORES QUANTIDADES DE AMOSTRAS (MAIOR VALOR
DE 10 μg DO DNA), PODENDO SER APLICADAS A UM
ÚNICO DEPÓSITO SEM PERDER SIGNIFICATIVAMENTE A
RESOLUÇÃO. PORÉM, HÁ A DESVANTAGEM DE SER 
 POSSIVELMENTE NEUROTÓXICA.