Imunoensaios por Quimioluminescência

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Imunoensaios por Quimioluminescência e eletroquimioluminescência espectrometria de massas no laboratório clínico 
· Hormônios são secretados em baixas concentrações
· Para conseguir visualizá-los: detecção com equipamentos muito sensíveis 
· Métodos utilizados:
· Quimioluminescência: luz formada a partir de uma reação química 
· Luz UV para enxergar a reação química
· Excitação dos compostos
· Enxerga a liberação de energia de uma molécula em estado excitável 
· Medido no equipamento: Emissão de luz 
· Utiliza-se anticorpos para medir hormônios, como TSH, por exemplo
· Anticorpos presos em pérola (Anticorpos de captura) 
· Faz um sanduíche: anticorpo + amostra do paciente (TSH) + anticorpo marcado (ligado a uma enzima “Fosfatase” - chamado anticorpo de detecção)
· Fosfatase retira um fosfato do composto: emissão do sinal luminoso pelo substrato
· Quanto > TSH (analito) > emissão de luz 
· Mede diretamente a concentração
· Chamado IMUNOENSAIO NÃO COMPETITIVO 
· Placa com anticorpos contra o T4
· Faz medição direta do T4
· Para que haja marcação: T4 marcado (é quem emite o sinal luminoso)
· T4 marcado e o do paciente competem
· > T4 do paciente < sinal luminoso
· Quantidade de T4 do paciente é inversamente proporcional ao sinal luminoso
· Chamado IMUNOENSAIO COMPETITIVO (Os T4 competem pelo anticorpo)
· Envolve a utilização de uma descarga elétrica no equipamento para ser possível enxergar o sinal luminoso
· Anticorpo que captura o antígeno (TSH) + antígeno marcado - emissor de sinal + partículas magnéticas (prendem o anticorpo com TSH) + anticorpo emissor de sinal
· Lavagem
· Sanduíche em contato com eletrodo + descarga elétrica → marcação com anticorpo emite sinais luminosos
How Electrochemiluminescence (ECL) Works
Interferências 
CENTRUM e BIOTINA
· Rico em Biotina
· Também é utilizada nos anticorpos no exame
· Paciente que utiliza CENTRUM: ao invés do TSH do imunoensaio se ligar ao anticorpo, quem se liga ao anticorpo é a biotina
· No resultado: diminuição da [TSH] 
· Alteração in vitro - não altera a fisiologia do paciente - não altera a produção de TSH, apenas no exame
· Alteração na fase ANALÍTICA (vem da amostra, mas interfere no procedimento)
Acúmulo de 17-hidroxiprogesterona → significa menos [21 alfa hidroxilase]
· Hormônios esteróides são de difícil distinção 
· Componentes da mistura passam pelo papel com velocidades diferentes 
· Depende das características de cada componente da mistura (tamanho - quanto menor, passa mais rápido; afinidade)
· Líquido passa pela coluna (papel), ela separa os componentes da mistura
· Menores e de menor interação: passam mais rápido
· Maior interação: passam mais lentamente
· Maiores e de maior interação: são os que passam mais lentamente
· Forma-se um gráfico 
· Esteróides migram com velocidades parecidas 
· Fragmentação em íons (moléculas com cargas)
· Coloca em um equipamento que define a massa e a carga das moléculas do hormônio 
· No final do detector: cada molécula chega em uma posição diferente - de acordo com a carga e tamanho 
· Analisa-se as características para detectar qual é o esteróide 
· Ex.:
Detecção: Na separação, o padrão no espectro de massa é diferente 
Desvantagens do ELISA
· Biotina interfere no ELISA
· Doença autoimune: > qtd de anticorpos que interferem na amostra
Características: 
EVELLYN VIEIRA BRAGA DO NASCIMENTO | 5º SEMESTRE