Eritrograma (1)

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UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO- FACULDADE DE MEDICINA 
VETERINÁRIA E ZOOTECNIA 
DEPARTAMENTO DE CLÍNICA MÉDICA 
 
VCM 311 - Patologia Clínica Veterinária 
Roteiro de aula prática 
HEMATOLOGIA CLÍNICA 
HEMOGRAMA 
ERITROGRAMA 
 
1. Hematócrito (Volume Globular) - % 
 
 Homogeneizar a amostra de sangue 
 Preencher aproximadamente 3/4 do tubo capilar com sangue 
 Obstruir uma das extremidades (com massa ou fogo) 
 Centrifugar no microcentrifugador (13000 g) por 5 minutos (caprinos: 15 minutos). 
 Usar tabela para relacionar o volume de eritrócitos com o volume total da amostra 
de sangue contida no tubo capilar = Ht %. 
 
OBS: Sempre avaliar o aspecto do plasma (ictérico, lipêmico, hemolisado). 
 
 
2. Dosagem de Hemoglobina - g/dL 
 
Em três tubos de ensaio de 10 mL devidamente identificados serão aferidos o “Branco” 
de reagentes, o “Padrão” com concentração conhecida de hemoglobina e a “Amostra” a 
ser analisada: 
 
Tubos Branco Padrão Amostra 
Reativo de Drabkin ou água 
destilada 
5,0 mL 5,0 mL 5,0 mL 
Padrão (ex:10 g/dL) 
KCn - VENENO! --- 20 µL --- 
Sangue --- --- 20 µL 
 
 Homogeneizar e aguardar pelo menos 10 minutos (temperatura ambiente) 
 Leitura em espectrofotômetro ou fotocolorímetro ( = 540 nm) 
 
 
Resultado: AbsP --- ConcP ConcA = AbsA . ConcP g/dL 
 AbsA --- ConcA AbsP 
 
 
3. Contagem de Eritrócitos (hemácias) 
 
 A contagem do número total de eritrócitos por mm
3
 pode ser feita manualmente 
em hemocitômetro (câmara de Neubauer) ou por contadores automáticos. 
 
 
 
 
 
3.1. Diluição da amostra 
 
Amostra: sangue com EDTA 
Diluidores: Líquido de Gower ou Solução Fisiológica. 
 
 
3.1.1. Microdiluição 
 
Diluição 1:200 em pipeta hematimétrica para glóbulos vermelhos 
 
Técnica: 
 - Homogeneizar o sangue; 
 - Aspirar o sangue até a marca 0,5 da pipeta de Thoma para glóbulos 
 vermelhos; 
 - Limpar o sangue da parte externa da pipeta; 
 - Aspirar a solução diluidora até a marca 101; 
 - Agitar 
 - Desprezar as primeiras gotas e preencher a câmara de Neubauer 
 
 
3.1.2. Macrodiluição 
Diluição 1:201 utilizando pipeta automática 
 
Técnica: 
 - Em um tubo, colocar 4 mL de diluidor 
- Homogeneizar o sangue; 
 - Pipetar 20 µL de sangue 
 - Homogeneizar 
 - Preencher a câmara de Neubauer 
 
4.2. Contagem: 
 
Aguardar a sedimentação das hemácias e ao colocar a câmara no microscópio, 
não inclinar muito para que as células, por gravidade, não se desloquem para um lado 
só. Focar o retículo de contagem em menor aumento (4x) e passar para as objetivas de 
10x e, depois, 40x. 
Contar as hemácias de cinco quadrados (4 cantos e 1 central) da área central da 
câmara, delimitados pelas linhas triplas (do total de 25 quadrados=1 mm
2
). São incluídas 
hemácias que estejam sobre dois lados da linha tripla (regra do “L”) e que encostem até 
a segunda linha. Quanto aos outros dois lados, ignorar as hemácias que encostarem na 
primeira linha interna. Multiplicar o resultado pelo respectivo fator de correção, calculado 
a partir do método utilizado (micro ou macrodiluição). 
 
 
 
 
Fator de Correção 
O fator de correção é calculado com base na : 
 diluição (200 ou 201) 
 área da câmara onde as células foram contadas 
(fazer o cálculo para completar 1 mm
2
 – multiplicar por 5) 
 altura da câmara (0,1 mm – para corrigir para 1 mm, multiplicar por 10). 
(observar ilustração no fim do roteiro) 
Nº de hemácias por mm
3
 (µL)= nº de hemácias contadas X Fator de Correção 
 
Portanto: 
Microdiluição: 
200 x 5 x 10 x he contadas = he contadas x 10000 = he x 10
6
/mm
3
 
 
Macrodiluição: 
201 x 5 x 10 x he contadas = he contadas x 10050 = he x 10
6
/mm
3
 
 
4. Índices Hematimétricos Absolutos 
 
VCM (volume corpuscular médio) em fl = Ht x 10 
 He 
 
HCM (hemoglobina corpuscular média) em pg = Hb x 10 
 He 
 
CHCM (concentração hemoglobínica corpuscular média) em % = Hb x 100 
 Ht 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
5. Esquema da Câmara Hematimétrica de Neubauer Modificada 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 c 
 
 
 
 
 
 
1 mm 
1 mm