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UNIVERSIDADE PAULISTA – UNIP
RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS
CURSO: Biomedicina DISCIPLINA: Toxicologia e Análises Toxicológicas
NOME DO ALUNO: Brunelly Lima Peixoto
R.A: 2124176 POLO: Praia Grande
DATA: 
Introdução
A toxicologia é a ciência que estuda os efeitos nocivos produzidos pelas substâncias químicas sobre seres humanos, animais e plantas. basicamente, a ação adversa resultante da interação de agentes químicos e sistemas biológicos, buscando prevenir o aparecimento dos efeitos tóxicos decorrentes dessa interação. É uma ciência bastante atual, considerando-se a enorme quantidade de substâncias químicas com as quais os organismos vivos entram em contato ao longo de suas vidas. É uma ciência multidisciplinar que engloba conhecimentos de Farmacologia, Bioquímica, Química, Fisiologia, Genética e Patologia entre outros. Mais pormenorizadamente, estuda a interação entre os químicos e os sistemas biológicos com o objetivo de determinar quantitativamente o potencial do químico para induzir danos, de onde resultem efeitos adversos para os diferentes organismos. Investiga, igualmente, a natureza destes efeitos adversos, a sua incidência, o seu mecanismo de produção, os fatores que influenciam o seu desenvolvimento e a sua reversibilidade. A toxicologia se divide em Toxicologia Ambiental e Eco toxicologia, que estuda os efeitos adversos causados por tóxicos liberados no ambiente. Toxicologia Ocupacional, onde se estuda os efeitos dos tóxicos presentes nos ambientes de trabalho. Toxicologia de Alimentos, que estuda os efeitos adversos causados por substâncias presentes nos alimentos.
Quem descobriu a toxicologia foi Mateo José Buenaventura Orfila Rotger (conhecido também como Mateu Orfila e Mathieu Orfila), químico e médico espanhol, teve um papel importante na história da toxicologia, papel este que o nomeou como "pai da toxicologia".
Padronização de Fármacos por Cromatografia em Camada Delgada (CCD) 
 
 Objetivo: Padronizar o com portamento do fármaco na realização de testes rápidos utilizados como triagem da exposição do organismo a fármacos ou drogas.
Técnica:
 Utilizamos ácido salicílico como solução padrão e aplicamos na placa 
cromatográfica, colocando em um Becker contendo o sistema solvente clorofórmio: 
acetona (9:1 ), como fase m óvel. Após deixá -las em temperatura ambiente para a completa evaporação do solvente, sob cape la, revelamos a cromatoplaca com FeCl3 (agente cromogênico) e avaliamos o comportamento da mancha. 
 
Conclusão: 
Expressamos os resultados segundo a forma da mancha, cor da 
mancha e Rf, em que: 
 Rf = distância percorrida pelo analito distância percorrida pela fase móvel 
 
Obtido um resultado de Rf = 1, já que a distância percorrida p e lo a nalito e a distância percorrida pela fase móvel foi a mesma (6,3). Houve padronização, pois todas as placas apresentaram a mesma distância.
QUESTÕES NORTEADORAS
 
 Um paciente foi encontrado c om hipertermia, zumbido no ou vido, acidose metabólica e alcalose respiratória. Em um teste rápido por CCD, o resultado foi positivo para exposição a salicilatos. 
Não, porque a CCD é uma técnica de triagem. Após a confirmação na triagem, deve ser realizada uma análise por técnica confirmatória.
Durante a revelação, ao nebulizar o clore to férrico , observou-se que a mancha característica dessa revelação não foi formada. Proponha sugestões que possam justificar e, consequentemente, corrigir essa situação. 
 O ferro do cloreto férrico reage com a hidroxila fenólica do salicilato, gerando cor. Quando não há reação cromo gênica, possivelmente a solução do cloreto férrico não foi preparada adequadamente. Serviço Social 
 
Em uma placa de CCD podem ser aplicados e revelados mais padrões? 
 Sim. Dependendo das substâncias que são reveladas, pode haver vários padrões na mesma placa de CCD. Uma das observações relevantes nesse contexto é que a aplicação dos padrões ou das amostras deve manter distância adequada entre os padrões, para que não haja interferência no desenvolvimento do analito, na placa 
cromatográfica. 
 
 Fármacos de caráter ácido podem ser aplicados na me sma placa, juntamente com os de caráter alcalino? 
Não, uma vez que a extração líquido/líquido separa substâncias de caráter ácido com as básicas.
Determinação de Nitrito em Alimento
Objetivo:
Determinar os teores de nitrito como conservante em amostra de salsicha para verificar se estão dentro dos Limites Máximos Permitidos segundo a Legislação Alimentos industrializados apresentam maior durabilidade, devido à presença de aditivos alimentares com finalidade de conservação desse produto, como é o caso do nitrito de sódio que é adicionado em produtos cárneos para conferir a cor vermelha e sabor característico, além de prevenir alterações desagradáveis e atuar como conservante, principalmente contra o crescimento e a produção de toxina do Clostridium botulinum. O maior problema associado à ingestão do ni trito de sódio está relacionado com o seu potencial efeito tóxico em indivíduos expostos, o que depende tanto da quantidade ingerida quanto da suscetibilidade do organismo. O excesso desses ions causa danos à saúde humana, e é preocupante sob o ponto de vista toxicológico, uma vez que o nitrito é convertido em N-nitrosaminas, e possui ação carcinogênica após a digestão.
AMOSTRA: Salsichas. 
REAGENTES E SOLUÇÕES: Solução I 
Tetraborato de sódio deca hidratado
 (Na2B4O7. 10 H2O) .........................................................50 g 
Água destilada até completar 1 L
Solução II
Ferrocianeto de potássio trihidratado 
K4Fe(CN)6 . 3H2O.......................................................106 g Água destilada até completar 1L. 
Solução III 
Acetato de zinco dihidratado 
Zn(CH3COO)2..................................................................220 g Ácido acetico glacial........................................................30 mL Água destilada até completar 1 L.
Reagente Cromogênico.
Solução de alfa-naftol: aquecer 360 mL de água destilada e 50 mL de ácido acético a 50 *C. Transferir esta solução para um frasco escuro contendo 0,25 g de ácido sulfanílico. Agitar até dissolver, adicionar 0,20 g de alfa-naftol agitando bem. Esfriar a temperatura ambiente e adicionar 90 mL de solução de NH4OH a 10%. O pH desta solução deverá ser 4,0 + 0,5.
Solução tampão: em 500 mL de H2O destilada adicionar 20 mL de HCl concentrado. Agitar e adicionar 50 mL de NH4OH concentrado e diluir com água destilada até 1000 mL. O pH obtido é de 9,6 - 9,7. 
Solução padrão de nitrito: 0,25 g NaNO2 em 500 mL H2O. 
PROCEDIMENTO:
Padronização 
(1) Transferir alíquotas de 1, 2, 4, 8 e 16 mL da solução padrão de nitrito de sódio em 5 diferentes balões volumétricos de 100 mL; adicionar 5 mL do tampão e completar com H2O destilada, q.s.p. 100 mL, a cada um dos balões. 
(2) Transferir 10 mL de cada alíquota da solução (1) para 5 diferentes balões volumétricos de 100 mL e completar com H2O destilada, q.s.p. 100 mL, a cada um dos balões.
(3) Transferir 5 mL de cada uma das soluções (2) em tubos de vidro e acrescentar 10 mL de reagente cromogênico, 5 mL de água destilada e 5 mL da solução tampão a cada um dos diferentes tubos. 
(4) Deixar em banho de H2O a 30 ºC por 30 minutos. 
(5) Leitura espectrofotométrica em 474 nm, contra um branco. 
Obs.: O branco se constituirá de 10 mL do reagente cromogênico em 10 mL de água e 5 mL tampão (deixar em banho de água a 30 ºC por 30 minutos). 
Desproteinização 
Pesar 10 g do alimento homogeneizado em um béquer de 150 mL. Adicionar 5 mL da solução I (bórax) e cerca de 40 mL de água destilada, a temperatura acima de 70 C. Aquecer em banho de água fervente por 15 minutos, agitando frequentemente. Deixar esfriar a temperatura ambiente. Adicionar 2 mL da solução II(ferrocianeto de potássio) e 2 mL da solução III (acetato de zinco). Agitar vigorosamente após cada adição. 
Transferir a amostra para um balão volumétrico de 100 mL. Deixar o balão em repouso por 30 minutos a temperatura ambiente. 
Completar o volume com água destilada, q.s.p. 100 mL. Agitar o conteúdo do balão vigorosamente e filtrar em papel livre de nitritos. Determinar a concentração de nitrito presente nesta solução.
Determinação de nitrito 
Pipetar 10 mL da solução desproteinizada da amostra de alimento para um tubo de ensaio. Adicionar 5 mL da solução tampão e 10 mL da solução de alfa-naftol. 
Deixar em banho de água a 30 *C, durante 30 minutos, esfriar a temperatura ambiente: ler em 474 nm. 
Calcular o valor de nitrito presente na amostra, usando a curva padrão previamente estabelecida.
Resultado obtido:
10 g do alimento ( salsicha )
Separação do analito (nitrito) da salsicha.
Resultados da absorbância dos 5 padrões:
1ml - 0,111
2ml - 0,170
4ml - 0,439
8ml – 0,781
16ml – 1,693 
O resultado da absorbância dos cinco pontos da curva de nitrito foi colocado neste gráfico de dispersão para a avaliação de sua linearidade através de seu r2, quanto mais próximo de 1 for o r2, maior a linearidade.
curva quantitativa do método, e nesta curva tivemos o r2 de 0,9954.
A Amostra da salsicha foi preparada e sua absorbância foi lida em 474 nm, o resultado da leitura foi de -0,092
Com o resultado da leitura obtido, iremos então calcular a concentração
de nitrito na amostra da salsicha através de uma fórmula baseada na curva analítica anteriormente preparada. A fórmula é Y:0.0311 x0,0254 onde X é o valor da absorbância da leitura da salsicha.
Cálculo:
(0,092-0,0254) x 1000 10g x 0.0311
Abs da amostra foi de 0,092
Após o cálculo podemos observar que o valor da concentração de
acordo com a fórmula, resulta em um valor muito acima do permitido, pois
havia nitrito na amostra maior do que o esperado.
1. Os nitritos e nitratos são substâncias químicas adicionadas 
intencionalmente nos alimentos, com alguns fins, como o de realçar as propriedades organolépticas do alimento e inibir a proliferação bacteriana. Sob a óptica toxicológica, qual é o s ignificado de determinar os níveis desses sais, nos alimentos industrializados? 
São responsáveis pela formação do anidrido nitroso, que leva à formação dos compostos N-nitrosos, potencialmente carcinogênicos. 
 
 2. Pesar 10 g do alimento homogeneizado em um béquer de 150 mL. 
Adicionar 5 mL da soluçã o I (bórax) e cerca de 40 mL de água destilada, a temperatura acima de 7 0 ºC. Explicar o objetivo da adição do bórax, no procedimento. 
O nitrito e nitrato podem ficar ligados a proteínas da carne e 
consequentemente, para serem determinados, se faz necessária a desproteinização.
3. Transferir alíquotas de 1, 2, 4, 8 e 16 mL da solução padrão de nitrito de sódio. 
Qual é a concentração de nitritos em cada um desses volumes? 
Os resultados obtidos em cada volume foram: 1ml – 0,047, 2ml – 0,077, 
4ml - 0,169 , 8ml – 0,281, 16ml – 0,516.
Referências bibliográficas:
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2ml	4ml	8ml	16ml	0.17	0.439	0.79100000000000004	1.6930000000000001	0,111	
Valores Y	0.111	0.17	0.439	0.79100000000000004	1.6930000000000001	9.9000000000000005E-2	6.6000000000000003E-2	5.8000000000000003E-2	7.2999999999999995E-2	9.6000000000000002E-2