Avaliação I - Individual Biologia Molecular

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GABARITO | Avaliação I - Individual (Cod.:823741)
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Prova 67095862
Qtd. de Questões 10
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[Laboratório Virtual - Extração e Purificação de DNA e RNA] Segundo o sumário da aula prática, as 
amostras contendo o DNA ou RNA purificados devem ser: 1) ressuspensas em um tampão e 
armazenadas em tubos, ambos “livres” de enzimas que possam degradá-las (como DNAse ou RNAse 
– nucleases); e 2) mantidas em baixas temperaturas (-20 ºC ou - 80 ºC). Todos os procedimentos 
devem ser realizados com luvas para evitar a degradação das amostras, devido à presença de 
nucleases nos fluidos corporais das mãos. De acordo com o processo de extração de DNA e RNA 
identificado na prática, associe os itens, utilizando o código a seguir:
I- Etapa de Lise.
II- Etapa de Ligação.
III- Etapa de Lavagem.
IV- Etapa de Eluição.
( ) Pipete 25 µl da Proteinase K no tubo Eppendorf. Em seguida, pipete 200 µl da amostra de 
sangue no mesmo tubo e, por último, pipete 200 µl do tampão lise S no tubo. Tampe o Eppendorf e 
homogeneíze no Vórtex por 20 segundos. Após esse tempo, incube o Eppendorf por 15 min.
( ) Pipete 210 µl de álcool 96% no Eppendorf e homogeneíze de novo no Vórtex. Em seguida, 
pipete 640 µl do Eppendorf para o tubo spin e centrifugue a 11.000 rpm por 1 minuto. 
( ) Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo 
tubo de coleta. Em seguida, pipete 500 µl do tampão de lavagem SI no tubo spin e centrifugue 
novamente. Repita o mesmo processo de troca de tubo de coleta, porém a lavagem utilizará 600 µl do 
tampão de lavagem SII, e centrifugue novamente. Por fim, repita o mesmo processo da troca do tubo 
de coleta e centrifugue novamente.
( ) Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo 
tubo de coleta. Em seguida, pipete 200 µl do tampão de eluição S no tubo spin, espere 1 minuto e 
centrifugue a amostra.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
A I - II - IV - III.
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B IV - III - II - I.
C I - II - III - IV.
D II - III - IV - I.
Com o desenvolvimento das técnicas de clonagem de DNA, tornou-se possível a construção de 
bibliotecas de DNA e cDNA. Sobre as bibliotecas, assinale a alternativa CORRETA:
A As bibliotecas de cDNA contêm somente os éxons de uma molécula de mRNA, que
posteriormente é convertido em cDNA pela técnica de transcrição reversa.
B Uma biblioteca de DNA contém somente os íntrons de uma molécula de DNA, sendo
extremamente específico para identificar o conteúdo expresso em uma célula ou tecido.
C As bibliotecas de mRNA são originadas a partir da fragmentação do DNA com enzimas de
restrição e, posteriormente, da clonagem do DNA.
D A biblioteca de cDNA contém éxons e íntrons, já que são clonados todos os fragmentos de
DNA, incluindo o não codificante.
A hibridização in situ foi elaborada com o objetivo de isolar e identificar fragmentos, através do 
anelamento entre duas fitas simples de origens distintas, sejam elas DNA ou RNA. Sobre essa 
técnica, associe os itens, utilizando o código a seguir:
I- Northen-blotting.
II- Southern-blotting.
III- Hibridização in situ.
( ) Técnica que utiliza sondas de ácidos nucleicos, com marcação química, no local em que a 
molécula de interesse deve ser encontrada (RNA dentro da célula, DNA específico em cromossomos). 
( ) Técnica que avalia padrões de sequências de nucleotídeos de genes do DNA e utiliza sondas de 
DNA molde, os quais são marcados com radiação ou quimicamente. 
( ) Nesta técnica, o RNA mensageiro (mRNA) é utilizado a fim de buscar comparar situações 
distintas, como, por exemplo, utilizar amostras controle como padrão para expressão do gene de 
interesse e, assim, comparar com a amostra de interesse. 
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
A I - III - II.
B II - I - III.
C III - II - I.
D I - II - III.
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[Laboratório Virtual - Extração e Purificação de DNA e RNA] Conforme o sumário da prática, os 
ácidos nucleicos apresentam características estruturais específicas, que permitem que sejam isolados 
e manipulados para diversos tipos de aplicações. A técnica de hibridização in situ, por exemplo, 
baseia-se na complementaridade das fitas de DNA ou RNA, utilizando sondas fluorescentes para a 
detecção da fita complementar em uma determinada amostra. Essa técnica permite o estudo da 
expressão gênica. Outra técnica, que também tem o mesmo princípio e finalidade, é a reação em 
cadeia da polimerase transcriptase reversa (RT-PCR), muito utilizada no diagnóstico de algumas 
infecções e doenças. Considerando esses aspectos, o primeiro passo para a maioria das técnicas 
citadas é o isolamento e a purificação das moléculas de DNA e RNA. O processo de extração do 
DNA pode ser dividido em etapas. 
Com relação às etapas visualizadas na aula prática, assinale a alternativa CORRETA:
A Na Etapa de Lavagem, são adicionados 210 µl de álcool 96%.
B O principal composto adicionado na Etapa de Ligação é a Proteinase K.
C A primeira etapa é a Etapa de Ligação, em que adicionamos 250 µl de Proteinase K, 20 µl da
amostra e 20 µl do tampão de lise S.
D A segunda etapa é denominada como Etapa de Ligação, em que é adicionado álcool 96% no
eppendorf, homogeneizado, e 640 µl são transferidos para o tubo spin. 
O RNA é uma molécula muito semelhante ao DNA, originado a partir do processo de 
transcrição, em que carrega informações contidas no DNA para fora do núcleo. Essas informações, 
darão origem à síntese de proteínas, através do processo de tradução. Sobre o RNA, assinale a 
alternativa CORRETA:
A O RNA é uma estrutura em dupla hélice, composta pela desoxirribose, nucleotídeos e fosfato.
B O RNA é uma estrutura em fita simples, composta pela pentose denominada como ribose; os
nucleotídeos adenina, uracila, citosina e guanina e fosfato.
C O RNA é uma estrutura em fita simples, composta pelos nucleotídeos adenina, timina, citosina e
guanina.
D O RNA é composto por cinco nucleotídeos, adenina, uracila, timina, guanina e citosina.
Através da técnica de eletroforese, ocorre a separação de moléculas em populações de tamanhos 
semelhantes, as quais são visualizadas como bandas no gel através de marcadores específicos. Sobre 
os marcadores para técnica de eletroforese em gel, assinale a alternativa CORRETA:
A O marcador ideal é o brometo de etídio, um corante fluorescente, que se liga ao DNA ou RNA e
possibilita a sua visualização através de luz ultravioleta (UV).
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B O marcador ideal para a técnica de eletroforese em gel será aquele capaz de separar as bandas de
DNA em diferentes tons de cores.
C O corante mais utilizado para marcação de DNA é o azul de brometo.
D O corante ideal para eletroforese de DNA e RNA é aquele que não se liga ao DNA ou ao RNA,
ficando somente na solução tampão da técnica.
O qPCR (PCR em tempo real) utiliza corantes fluorescentes ou sondas específicas, que emitem 
fluorescência quando se encontram ligados ou intercalados à fita de DNA no meio de reação da PCR. 
Considerando esse fator, a fluorescência, é proporcional à quantidade de material disponível para 
iniciar a amplificação. Sobre os parâmetros para quantificação do qPCR, avalie as asserções a seguir 
e a relação proposta entre elas:
I- O threshold, também conhecido como linha de corte, demonstra o momento em que a fluorescência 
apresentada está livre de ruídos, sendo essencialmente a representação da amplificação da amostra 
teste.
PORQUE
II- O equipamento é capaz de determinar em que momento a fluorescência detectada é proveniente 
apenas das amostras que estão sendo amplificadas e, assim,determinar a linha de corte.
Assinale a alternativa CORRETA:
A As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I.
B As asserções I e II são proposições falsas.
C A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira.
D As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I.
Com o passar do tempo, as técnicas de sequenciamento ficaram mais sofisticadas e 
automatizadas. Sobre o sequenciamento de segunda geração, analise as sentenças a seguir:
I- O Next Generation Sequencing (NGS) não utiliza nucleotídeos terminadores de cadeira, permitindo 
a criação de plataformas mais eficientes e rápidas.
II- Os métodos de segunda geração compreendem o uso de plataformas portáteis com processamento 
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rápido e eficiente, em plataformas do tamanho de um pen drive.
III- Os métodos de segunda geração compreendem o pirosequenciamento, o sequenciamento por 
síntese, sequenciamento por terminação de cadeia reversível, sequenciamento por hibridização e 
ligação, dentre outros.
Assinale a alternativa CORRETA:
A As sentenças I e III estão corretas.
B Somente a sentença I está correta.
C Somente a sentença II está correta.
D As sentenças I e II estão corretas.
A transcrição reversa é uma reação que ocorre pela ação da enzima transcriptase reversa ou RT. Essa 
enzima é uma DNA polimerase dependente de RNA, ou seja, ela é capaz de sintetizar uma fita de 
DNA utilizando como molde a fita simples de RNA. Sua descoberta se deu a partir da observação de 
que, quando os retrovírus, cujo material genético é um RNA, infectam um hospedeiro, o RNA viral é 
convertido em DNA. Sobre a RT-PCR, avalie as asserções a seguir e a relação proposta entre elas:
I- Para o processo de transcrição reversa são necessários Oligonucleotídeos sintéticos, os quatro 
dNTPs, a amostra de RNA e os cofatores enzimáticos. Ao invés da Taq DNA polimerase, essa técnica 
utiliza a enzima transcriptase reversa.
PORQUE
II- O objetivo final da técnica é originar o DNA complementar ou cDNA, que é formado por essa 
enzima.
Assinale a alternativa CORRETA:
A A asserção I é uma proposição verdadeira, mas a II é uma proposição falsa.
B As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I.
C As asserções I e II são proposições falsas.
D As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I.
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"A PCR pode ser precedida por uma reação de transcrição reversa (RT) para a obtenção de cDNA a 
partir de RNA (RT-PCR), representando, por exemplo, uma possibilidade de análise de expressão 
gênica em células ou tecidos" (SANTOS, 2004, s.p.). Sobre os componentes essenciais para a 
realização da técnica de PCR e RT-PCR, analise as sentenças a seguir:
I- Para o processo de PCR convencional, utiliza-se a fita molde de DNA, os nucleotídeos ou dNTPs, 
os primers e a Taq DNA polimerase.
II- Para o processo de RT-PCR, é utilizada uma enzima denominada como termoestável, como a Taq 
DNA polimerase.
III- Para o processo de RT-PCR, utiliza-se a fita molde de mRNA, os nucleotídeos ou dNTPs, primers 
oligodT e enzima transcriptase reversa.
Assinale a alternativa CORRETA:
Fonte: SANTOS, Carlos Ferreira dos et al. Transcrição reversa e reação em cadeia da polimerase: 
princípios e aplicações em odontologia. J. Appl. Oral Sci., v. 12, n. 1, p.1-11, 2004.
A As sentenças II e III estão corretas.
B Somente a sentença I está correta.
C As sentenças I e II estão corretas.
D As sentenças I e III estão corretas.
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