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RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EAD AULA _1___ DATA: ___/______/______ VERSÃO:01 RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS: BIOQUIMICA HUMANA – Aula 1 DADOS DO(A) ALUNO(A): NOME: REJANE DA COSTA GENOVÊS MATRÍCULA: 01470196 CURSO: FÁRMACIA POLO: PETROLINA PROFESSOR(A) ORIENTADOR(A): MARIA DAS GRAÇAS DE FREITAS ORIENTAÇÕES GERAIS: · O relatório deve ser elaborado individualmente e deve ser escrito de forma clara e · concisa; · O relatório deve conter apenas 01 (uma) lauda por tema; · Fonte: Arial ou Times New Roman (Normal e Justificado); · Tamanho: 12; Margens: Superior 3 cm; Inferior: 2 cm; Esquerda: 3 cm; Direita: 2 cm; · Espaçamento entre linhas: simples; · Título: Arial ou Times New Roman (Negrito e Centralizado). TEMA DE AULA: ATIVIDADE CATALÍTICA DA AMILASE SALIVAR RELATÓRIO: 1. Resumo sobre o tema abordado em aula. Foi a bordado em aula a análise salivar ou ptialina, que se trata de uma hidrolise cuja função é degredar os carboidratos, em especial o amido. O amido começa a ser digerido na boca por ação de enzima ptialina, que hidrolisa as ligações das cadeias do amido, dando origem á glicose, maltose e oligossacarídeos. A amilase salivar, é produzida nas glândulas salivares e é responsável para o início da degradação dos carboidratos, catalisando a hidrolise das ligações da cadeia glicosídica do polissacarídeo amido. Utilizamos técnicas enzimáticas e uma técnica química, onde a hidrolise enzimática foi utilizado saliva e na hidrolise química foi utilizado ácido clorídrico. 2. Materiais utilizados. EPI (Jaleco, luvas, touca e máscaras) Amilase salivar (saliva) Acido clorídrico Lugol 2% Solução 1% Água destilada Tubos de ensaios Becker Banho maria Banho de gelo Pipeta de vidro e Pera de borracha 3. Responda as Perguntas: A) Qual a composição do amido? O amido é um polissacarídeos formado pela união de moléculas de a-glicose da amilose e amilopectina, sendo armazenado em diferentes órgãos vegetais. B) Comente os resultados obtidos nos tubos 1, 2 e 3 no procedimento da hidrólise química do amido. No tubo 1: Após a retirada do banho de gelo e a adição do lugol 2% a solução apresentou modificação ficando com coloração esverdeada após a reação do iodo com o amido, evidenciando assim que o banho de gelo não interferiu degradação do amido. No tubo 2: Após a retirada do banho Maria de 10 minutos e em seguida resfriado no banho de gelo e adição de lugol de 2%, a solução apresentou coloração verdeescuro, após a reação do iodo com o amido, evidenciando assim que o banho de gelo não influenciou na degradação do amido. Indicando que a temperatura influência reação da atividade química. No tubo 3: Após 20 minutos de banho Maria e logo após banho de gelo, a solução fica bem azul indicando a presença do amido C) Qual o objetivo do uso de HCl, aquecimento e resfriamento no procedimento da hidrólise química do amido? O uso de ácido clorídrico provoca uma reação que favorece a hidrólise do amido. Dessa forma, ao final da reação, após por um curto período de aquecimento, seguindo por um resfriamento com uso de gelo é possível perceber a produção de glicose como produto. D) Descreva a sequência de transformações operadas pela amilase na molécula da amilose. No início do processo digestório, que começa na boca, com a mastigação, produz uma enzima existente na saliva, conhecida como amilase salivar. Quando liberada, inicia-se cuja reação catalisa a hidrólise nas ligações glicosídicas da amilose. E) Comente os resultados obtidos nos tubos 1, 2 e 3 no procedimento da hidrólise enzimática do amido. A hidrólise enzimática do amido é um processo químico que acontece de forma natural no início da digestão, durante a mastigação momento no qual libera a enzima alfa amilase salivar, que atua catalisando a hidrólise de algumas ligações do amido dentro da boca, dando origem as moléculas menores, conhecidas como oligossacarídeos. F) Explique a relação entre a atividade da amilase salivar, o tempo de incubação da enzima com o amido e a variedade de cores observada no procedimento da hidrólise enzimática do amido. A solução de lugol 2% ( concentração - solução de iodo que reage com a composição do amido formando uma cor esverdeada, escura, azulada quando encontra o amido o tempo de incubação e temperatura influencia na hidrólise. 4. Conclusão sobre a atividade catalítica da amilase salivar. A enzima presente na saliva é a substância responsável pela degradação do amido. TEMA DE AULA: REAÇÃO DE SELIWANOFF (REAÇÃO PARA DISTINÇÃO ENTRE ALDOSES E CETOSES) RELATÓRIO: 1. Resumo sobre o tema abordado em aula. A reação de seliwanoff é um teste que permite distinguiu ALDOSE de cetoses. Pelo teste é possível ver que, quando aquecido, as cetoses sofrem desidratação muito mais rápido do que as aldoses. 2. Materiais utilizados. Ácido clorídrico Solução de Sacarose Solução de Frutose Solução de Glicose Vórtex Banho Maria Capela Tubos de Ensaio reagente de seliwanoff, Bastão de vidro Pipetas Pasteur peras de vidro. 3. Responda as Perguntas: A) Explique o princípio bioquímico do teste de Seliwanoff. O teste de seliwanoff ocorre pela reação do ácido clorídrico em contato com os carboidratos que, após a mistura, provocada a desidratação dos carboidratos devido à hidrólise da ligação glicosídicos. B) Comente os resultados obtidos nos 3 tubos utilizados no procedimento, correlacionando com a presença ou não de aldoses e cetoses. O único tubo que ficou vermelho foi da frutose que indicou que ele é uma CETOSE .O restante não houve alteração de cor C) Explique qual o objetivo de utilizar um tubo apenas com água destilada. Serve de controle negativo D) Qual a função do ácido clorídrico (HCl) e da fervura aplicados no teste de Seliwanoff? Serve para provar que as aldoses são mais sensíveis do que as cetoses, pois o seu ponto de ebulição é inferior aos delas. 4. Conclusão sobre a identificação de aldoses e cetoses utilizando o teste de Seliwanoff. Confirmamos que a frutose é uma CETOSE. Na reação ocorre a produção do furfural e tem a reação com o resorcional dentro do reativo de seliwanoff e conseguimos perceber pela coloração vermelha intensa do tubo com frutose. TEMA DE AULA: PRECIPITAÇÃO POR ÁCIDOS FORTES E METAIS PESADOS RELATÓRIO: 1. Resumo sobre o tema abordado em aula. Este procedimento foi realizado para verificar a influencia de ácido forte e de sais de metais pesado sobre a solubilidade da proteína, assim como a influencia do PH sobre a carga líquida da molécula polipeptídica 2. Materiais utilizados. Tubos de ensaio Identificação Solução de Ovoalbulmina Ácido clorídrico Acetato de chumbo em pó Pipetas Pasteur Pera Estante para tubos. 3. Responda as Perguntas: A) Comente os resultados obtidos no procedimento da precipitação da ovoalbumina com ácido forte e metal pesado. Acontece a precipitação porque ocorre a desnaturação da proteína B) Qual a fundamentação teórica que explica o processo de precipitação das proteínas com ácidos fortes e metais pesados? Ocorre desnaturação por alteração do PH C) O que ocorreu com a ovoalbumina para que ela formasse um precipitado insolúvel neste experimento? Desnaturação proteica 4. Conclusão sobre a precipitação de proteínas por ácidos fortes e metais pesados. Observou precipitação da proteína TEMA DE AULA: PRECIPITAÇÃO FRACIONADA POR SOLUÇÕES SALINAS CONCENTRADAS RELATÓRIO: 1. Resumo sobre o tema abordado em aula. A precipitação de proteínas pelas altas concentrações de sais resultado na separação de mistura complexa de proteínas, posto que a concentração de sal necessária para precipitação é diferente para todas as proteínas. 2. Materiais utilizados. Pipetas pauster Solução de ovoalbulmina Tubos de ensaio Sulfato de amônia concentrado Água destilada 3. Responda as Perguntas: A) O que é “Salting out”, “Salting in” e camada de solvatação? Salting “out” é a precipitação de proteínas em solução por meio de altas concentração de sais saltingin é o aumento da solubilidade das proteínas em consequência do acréscimo de baixasconcentração de sais. Camada de solvatação permite que as partículas se espalhem uniformemente na água. B) Explique o princípio Bioquímico da precipitação de proteínas por adição de soluções salinas. É um processo utilizado para fazer a separação das proteínas. C) Comente os resultados observados da precipitação da proteína por sulfato de amônio na presença e ausência da água, correlacionando com a solubilidade da proteína. Primeiro houve a pesagem de 10 gramas de sulfato de amônio e sua diluição em 10 ml de água destilada. Depois com pipetas inseriram 2ml de solução de ovoalbulmina em dois tubos em um deles foi adicionado 2ml de sulfato de amônio concentrado, vertendo pela parede do tubo, ao segundo tubo também fora adicionado 2ml de água destilada observou a formação de uma solução leitosa 4. Conclusão sobre a precipitação das proteínas por adição de sais neutros (soluções salinas concentradas) O correu a formação de uma substância branca, com aparência leitosa, isso confirmar que o correu a precipitação da proteína. TEMA DE AULA: REAÇÃO DE BENEDICT (IDENTIFICAÇÃO DE AÇÚCARES REDUTORES) RELATÓRIO: 1. Resumo sobre o tema abordado em aula. O Reativo é utilizado para a detecção de açúcares redutores cuja aplicação é feita para observar se há é utilizado de açúcar na urina e detectar uma possível diabete 2. Materiais utilizados. Tubos de ensaio Proveta graduada Balão de funcho chato Pipeta Estufa reagente Benedict Glicose Sacarose água destilada e Banho Maria 3. Responda as Perguntas: A) Qual a composição do Reativo de Benedict? Reativo a base de sulfato de cobre B) O que são açúcares redutores? São açúcares que contém, em sua composição, um grupo carboxílicos livre aldeído, com capacidade de redução em contato com o grupo aldeído, monossacarídeos, glicose, dissacarídeo, frutose, que sofrem oxidação em contato com agentes oxidantes em solução alcalinos. C) Explique a fundamentação teórica do Teste de identificação de açúcares redutores com o Reativo de Benedict. Os açúcares redutores reagem com o sulfato de cobre do reagente de benedict, reduzindo-o ao óxido de cobre um composto insolúvel, de cor avermelhada, nesta solução, um resultado positivo é indicado bola perda da cor azul inicial D) Comente os resultados observados no experimento relacionando com a identificação de açúcares redutores. No resultado, observou que no primeiro tubo contendo três ml de glicose e cinco ml do reagente de benedict após ficar em banho Maria durante cinco minutos, houve uma modificação na cor que passou de azul para um tom avermelhada os demais tubos, um contendo sacarose e outro água destilada, não sofreram modificações. E) Exemplifique algumas aplicações deste teste na área clínica. É um teste qualitativo ou quantitativo? É um teste qualitativo que indica presença de açúcares na urina e constando uma possível diabete. 4. Conclusão sobre a identificação de açúcares redutores utilizando o Teste de Benedict. Como está é uma solução composta por citrato de sódio, carbono de cálcio e sulfato de cobre, quando entra em contato com os açúcares redutores, sua coloração sofre modificações isso ocorre devido à reação do sulfato de cobre. Referências Aula prática online pelo portal do aluno e presencial no polo. Nelson,D.L; Cox,M,M. Princípios da bioquímica de Lehniger,porto alegre: artmed,2009 Biochemistry, Part 2, Debajyoti Das, Academic Publishers, 1978. Introduction to Organic Laboratory Techniques: A Small Scale Approach, Donald L.Pavia, Gary M. Lampman, George S. Kriz, Randall G. Engel, Cengage Learning,2005. Analytical Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, Rajan Katoch,Springer Science & Business Media, 19 de jul de 2011. Laboratory Manual for Biotechnology, Verma, Ashish S./ Das Surajit & Singh Anchal,S. Chand Publishing, 2014. Sites: https://www.fciencias.com/2016/10/20/teste-seliwanoff-laboratorio-online/ https://www.engquimicasantossp.com.br/2020/01/reagente-seliwanoff testedistinguir.html?m=1. http://plone.ufpb.br/ldb/contents/paginas/precipitacao-por-sais-de-metais-pesados-epor-acidos-fortes. https://www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/praticasproteinas/precipitacaoprotei nas.htm. https://youtu.be/eLQzCmglQus.