Aula 2 - Microbiologia e Imunologia

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PROF. HERMES DINIZ NETO
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Microbiologia:
• Ciência que estuda microrganismos
 Importância:
• Saúde, Meio Ambiente e tecnologia
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Eucariontes e Procariontes:
• DNA!
Tamanhos
• Fungos > Bactérias > Vírus
Nomenclaturas
• Gênero e espécie (S. aureus)
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Morfologia:
• Cocos
• Bacilos
• Outros
• Vibrião
• Espirilo
• Espiroqueta
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Parede celular: Forma e Proteção
• Peptideoglicano
• Gram+ e Gram-
* Atípicas
(Mycoplasma)
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Glicocálice:
➢Resistência a fagocitose
• Cápsula (Compacta e bem aderida)
• Camada Limosa (Desorganizada e frouxa)
• Substância polimérica extracelular: Biofilme
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Flagelos:
➢Movimentação
Filamentos axiais:
➢Movimentação (Espiroquetas)
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Fímbrias e pili:
➢Adesão tecidual
• pili
➢Movimentação pulsante
➢Troca de material genético
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Outras estruturas:
➢Nucleoide
➢Plasmídeos
➢Inclusões
➢Endosporos
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Reprodução:
• Divisão Binária
• Crescimento exponencial (2n)
• Fase lag
• Fase log
• Fase estacionária
• Fase de morte
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Microbiologia e Imunologia
Como podemos observar 
microrganismos? 
Quais ferramentas e técnicas 
podem nos auxiliar?
Como ocorre o metabolismo 
microbiano??
ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS
Microrganismos:
▪ Invisíveis a olho nu.
 Microscópio!
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Microbiologia e Imunologia
ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS
Microscópios:
➢ Ópticos
▪ Luz visível para iluminar as estruturas 
celulares.
(Campo claro, campo escuro, 
fluorescência etc.)
➢ Eletrônicos
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Microbiologia e Imunologia
ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS
Microscópio:
Lente Ocular (10x)
Lentes Objetivas (10, 40, 100x)
Ampliação de Imagem
(100 a 1000x)
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Microbiologia e Imunologia
ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS
Microscópio 
óptico:
❖Óleo de Imersão
➢Lentes objetivas de 
100x
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Microbiologia e Imunologia
ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS
Outros tipos:
❖Microscopia de campo 
escuro:
 O disco opaco bloqueia a luz 
que poderia entrar na lente 
objetiva diretamente. 
Somente a luz que é refletida 
pela amostra entra na lente 
objetiva. 
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Microbiologia e Imunologia
ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS
Outros tipos:
❖Microscopia de 
contraste de fase:
 Anel de fase (Diafragma 
anular): Amplifica a diferença 
entre a luz que atravessa a 
célula em relação à luz que 
atravessa o líquido 
circundante. 
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Microbiologia e Imunologia
ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS
Outros tipos:
❖Microscopia de fluorescência:
 Fluorocromos: Substâncias que 
absorvem ultravioleta e 
produzem luz.
➢Imunofluorescência
Anticorpo fluorescente
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Microbiologia e Imunologia
ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS
Outros tipos:
❖Microscopia eletrônica:
 Elétrons: Comprimento de onda 
100.000 vezes menores que o da 
luz.
➢Examinar estruturas muito 
pequenas para os microscópios 
tradicionais
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Microbiologia e Imunologia
ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS
Outros tipos:
❖Microscopia eletrônica:
 Transmissão: Feixes de elétrons passam 
através da amostra.
 Varredura: Feixes de elétrons são 
refletidos pela amostra
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Microbiologia e Imunologia
ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS
Outros tipos:
❖Microscopia de varredura por 
sonda:
 De Tunelamento: Sonda de tungstênio.
 Força Atômica: Sonda de diamante.
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Microbiologia e Imunologia
ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS
Otimização:
 Células bacterianas = Difícil 
visualização (Sem pigmento, sem 
contraste com o meio)
✓ Contrastes
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Microbiologia e Imunologia
ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS
Coloração:
• Simples:
Destacar todos os microrganismos.
• Diferencial:
Distinguir grupos bacterianos.
• Especial:
Corar porções específicas.
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Microbiologia e Imunologia
ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS
Corantes:
 Compostos orgânicos
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Microbiologia e Imunologia
• Ácidos (-): Citoplasma
• Básicos (+): DNA
Afinidades variadas
 Colorações diferenciais
ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS
Técnica de Transferência Asséptica:
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Microbiologia e Imunologia
ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS
Coloração de Gram
Distinção pela Parede Celular
Gram +
(roxo, azul, violeta)
Gram –
(vermelho ou cor-de-rosa)
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Microbiologia e Imunologia
ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS
Coloração de Gram
 1º Corante - Cristal violeta
Mordente/fixador - Lugol (Iodo)
 Solvente orgânico -
 2º Corante - Safranina ou fucsina
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Microbiologia e Imunologia
S
ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS
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Microbiologia e Imunologia
1-Coletar a 
amostra bacteriana 
do meio líquido 
com alça estéril*;
2-Semear a 
amostra em lâmina 
de vidro estéril e 
deixar secar;
*Se as células estiverem em placa de 
agar, utilizar a alça para aplicar uma 
gota de água estéril sobre a lâmina 
de vidro e coletar uma pequena 
amostra da colônia no agar;
3-Fixar o conteúdo passando 
a lâmina levemente e 
rapidamente sobre a chama 
do bico de Bunsen;
(Não deixar esquentar muito)
ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS
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Microbiologia e Imunologia
4-Aplicar o primeiro 
corante (Cristal violeta) 
sobre a amostra, deixando 
permanecer por cerca de 
1 minuto;
5-Sutilmente lavar a 
amostra com água para 
remover excesso de 
corante;
6-Aplicar o mordente 
(Lugol) sobre a 
amostra, deixando 
permanecer por cerca 
de 1 minuto;
7-Sutilmente lavar a 
amostra com água para 
remover excesso do 
mordente;
ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS
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Microbiologia e Imunologia
8-Gotejar o solvente 
(Etanol ou Acetona) até 
que a gota que passe pela 
amostra saia transparente;
9-Sutilmente lavar a 
amostra com água para 
remover excesso do 
solvente;
10-Aplicar o segundo 
corante (Fucsina ou 
Safranina) sobre a amostra, 
deixando permanecer por 
cerca de 1 minuto;
11-Sutilmente lavar a 
amostra com água para 
remover excesso do 
corante, secar e 
observar no 
microscópio.
ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS
Coloração de Gram (Algumas Exceções):
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Microbiologia e Imunologia
ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS
Coloração de Gram (Algumas 
Exceções):
 Bacilos Álcool-Ácido Resistentes (BAAR)
oCamada cerosa
➢Coloração de Ziehl-Neelsen
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Microbiologia e Imunologia
ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS
Coloração de Gram (Algumas Exceções):
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Microbiologia e Imunologia
ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS
Colorações Especiais:
Coloração negativa para 
cápsulas:
➢Cápsulas = solúveis em água;
➢Tinta da China, tinta nanquim.
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Microbiologia e Imunologia
ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS
Colorações Especiais:
Coloração para endósporos:
➢Não é corada por métodos 
comuns;
➢Verde malaquita + Calor.
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Microbiologia e Imunologia
ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS
Colorações Especiais:
Coloração dos flagelos:
➢Estruturas muito finas;
➢Ácido tânico é usado para 
aumentar o diâmetro dos 
flagelos.
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Microbiologia e Imunologia
ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS
Coloração de Gram:
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Microbiologia e Imunologia
ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS
Coloração de Gram:
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Microbiologia e Imunologia
METABOLISMO MICROBIANO
Crescimento depende do:
Metabolismo
Acumulação e degradação de nutrientes para 
fornecer energia e sintetizar substâncias
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Microbiologia e Imunologia
METABOLISMO MICROBIANO
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Microbiologia e Imunologia
METABOLISMO MICROBIANO
Fontes de energia:
• Compostos Químicos (Quimiotrofia)
• Luz (Fototrofia)
▪ Própria (Autotróficos): CO2
▪ Compostos orgânicos (Heterotróficos)
o Presença de O2 (Aeróbias)
o Ausência de O2 (Anaeróbias); *Facultativas
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Microbiologia e ImunologiaMETABOLISMO MICROBIANO
Glicólise:
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Microbiologia e Imunologia
Glicose
2Piruvato
2NADH 2ATP
Piruvato
Respiração
celular
(Acetil-CoA)
Fermentação
(Ácido lático, etanol etc)
METABOLISMO MICROBIANO
Ciclo de Krebs e Cadeia de Transporte de Elétrons:
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Microbiologia e Imunologia
Piruvato Acetil-CoA Ciclo de
Krebs
38 ATP
Cadeia de 
Transporte 
de Elétrons
NADH
FADH
METABOLISMO MICROBIANO
Fermentação:
Os microrganismos podem 
fermentar vários substratos;
Microrganismo
Substrato
Enzimas
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Microbiologia e Imunologia
METABOLISMO MICROBIANO
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Microbiologia e Imunologia
METABOLISMO MICROBIANO
❖Necessidades Nutricionais:
➢ Diferentes microrganismos:
➢ Diferentes exigências nutricionais!
➢ Diferentes metabólitos!
➢ Diferentes reações de biossíntese!
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Microbiologia e Imunologia
METABOLISMO MICROBIANO
❖Necessidades Nutricionais:
Provas Bioquímicas:
Alterações de um substrato 
conhecido pela ação de enzimas 
microbianas.
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Microbiologia e Imunologia
METABOLISMO MICROBIANO
❖Necessidades Nutricionais:
Provas Bioquímicas:
Alterações de um substrato 
conhecido pela ação de enzimas 
microbianas.
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Microbiologia e Imunologia
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Microscópios:
➢Ópticos (Luz)
➢Ampliação de até 1000x
➢Óleo de imersão
(Diminuir refração da luz)
➢Eletrônicos (Elétrons)
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Coloração:
➢Simples
➢Diferencial
➢Especial
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Transferência Asséptica:
➢Simples
➢Diferencial
➢Especial
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Coloração de Gram:
1. Cristal Violeta
2. Lugol (Mordente)
3. Lavagem com Álcool
4. Safranina
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Coloração Ziehl-Neelsen:
1. Carbolfucsina
2. Fixar corante (Calor)
3. Lavagem com
Álcool-Ácido
4. Azul de Metileno
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Colorações Especiais:
➢Cápsula (Tinta da China)
➢Endósporos (Verde Malaquita)
➢Flagelos (Ácido Tânico)
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Metabolismo:
➢Autotróficos
➢Heterotróficos
➢Aeróbios
➢Anaeróbios/Anaeróbios facultativos
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Metabolismo:
➢Glicólise = 2Piruvato + 2ATP
➢Respiração celular = 38ATP
➢Fermentação = 2ATP
➢Ácido lático, Etanol e CO2 etc.
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Metabolismo:
➢Variam de acordo com o microrganismo:
➢Nutrientes exigidos
➢Metabólitos produzidos
➢Enzimas envolvidas
Provas Bioquímicas
HERMES.DN@HOTMAIL.COM