Aula 3 - Microbiologia e Imunologia

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PROF. HERMES DINIZ NETO
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Microscópios:
➢Ópticos (Luz)
➢Ampliação de até 1000x
➢Óleo de imersão
(Diminuir refração da luz)
➢Eletrônicos (Elétrons)
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Coloração:
➢Simples
➢Diferencial
➢Especial
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Transferência Asséptica:
➢Simples
➢Diferencial
➢Especial
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Coloração de Gram:
1. Cristal Violeta
2. Lugol (Mordente)
3. Lavagem com Álcool
4. Safranina
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Coloração Ziehl-Neelsen:
1. Carbolfucsina
2. Fixar corante (Calor)
3. Lavagem com
Álcool-Ácido
4. Azul de Metileno
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Colorações Especiais:
➢Cápsula (Tinta da China)
➢Endósporos (Verde Malaquita)
➢Flagelos (Ácido Tânico)
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Metabolismo:
➢Autotróficos
➢Heterotróficos
➢Aeróbios
➢Anaeróbios/Anaeróbios facultativos
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Metabolismo:
➢Glicólise = 2Piruvato + 2ATP
➢Respiração celular = 38ATP
➢Fermentação = 2ATP
➢Ácido lático, Etanol e CO2 etc.
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Metabolismo:
➢Variam de acordo com o microrganismo:
➢Nutrientes exigidos
➢Metabólitos produzidos
➢Enzimas envolvidas
Provas Bioquímicas
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Microbiologia e Imunologia
Quais fatores podem influenciar o 
crescimento bacteriano? 
Qual a importância do biofilme?
O que são meios de cultura?? 
Quais suas utilidades? 
INTRODUÇÃO
Crescimento microbiano:
▪Multiplicação celular
(Aumento de número)
▪Colônias
Diversos fatores!
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Microbiologia e Imunologia
INTRODUÇÃO
 Fatores de crescimento:
▪ Físicos
• Temperatura
• pH
• Pressão Osmótica
▪Químicos
• Fontes de C, N, O, S, F
• Fatores orgânicos de crescimento
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Microbiologia e Imunologia
FATORES DE CRESCIMENTO
Fatores Físicos:
▪Temperatura
• Microrganismos: 10 a 50ºC
• Algumas bactérias
(Extremos de temperatura)
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Microbiologia e Imunologia
FATORES DE CRESCIMENTO
Fatores Físicos:
▪Temperatura
• Psicrófilos (Frio)
• Mesófilos (T moderada)
• Termófilos (Calor)
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Microbiologia e Imunologia
▪ Temperatura Mínima
▪ Temperatura Ótima
▪ Temperatura Máxima
Dano celular
Temperaturas 
cardeais
FATORES DE CRESCIMENTO
Fatores Físicos:
▪Temperatura
• Temperaturas
cardeais
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Microbiologia e Imunologia
FATORES DE CRESCIMENTO
Fatores Físicos:
▪Temperatura
➢ Psicrotróficos ou
Psicrotolerantes
➢ Hipertermófilos
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Microbiologia e Imunologia
FATORES DE CRESCIMENTO
Fatores Físicos:
▪Temperatura
➢Mesófilos
❖Zona de Perigo!
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Microbiologia e Imunologia
FATORES DE CRESCIMENTO
Fatores Físicos:
▪pH
➢ Acidez ou Alcalinidade
➢ pH 6,5 – 7,5 ☺
Meios de cultura (Tampões)
Acidófilas!
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Microbiologia e Imunologia
FATORES DE CRESCIMENTO
Fatores Físicos:
▪Pressão Osmótica
➢Meio hipertônico:
Plasmólise
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Microbiologia e Imunologia
Meio
Isotônico
Meio
Hipertônico
FATORES DE CRESCIMENTO
Fatores Físicos:
▪Pressão Osmótica
➢ Adição de soluto:
Conservação de alimentos
Halófilos Extremos!
(Obrigatórios, facultativos)
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Microbiologia e Imunologia
FATORES DE CRESCIMENTO
Fatores Químicos:
▪Carbono
▪Quimioheterotróficos:
Proteínas, lipídeos, carboidratos
▪Quimioautotróficos:
Dióxido de carbono
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Microbiologia e Imunologia
FATORES DE CRESCIMENTO
Fatores Químicos:
▪Nitrogênio
▪ Síntese de proteínas e DNA.
▪Enxofre
▪ Síntese de proteínas.
▪Fósforo
▪Produção de ATP e membrana plasmática.
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Microbiologia e Imunologia
FATORES DE CRESCIMENTO
Fatores Químicos:
▪Elementos-traço
▪ Ferro, Zinco, Cobre etc.
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Microbiologia e Imunologia
FATORES DE CRESCIMENTO
Fatores Químicos:
▪Oxigênio
▪Aeróbios obrigatórios;
▪Anaeróbios obrigatórios;
▪Anaeróbios facultativos;
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Microbiologia e Imunologia
O2
FATORES DE CRESCIMENTO
Fatores Químicos:
▪Oxigênio
▪Radicais Superóxidos O2
-
▪ Superóxido Dismutase
▪ Peróxido de Hidrogênio (O2
-2)
▪ Catalase e Peroxidase
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Microbiologia e Imunologia
FATORES DE CRESCIMENTO
Fatores Químicos:
▪Oxigênio
➢ Anaeróbios
aerotolerantes
➢Microaerófilos
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Microbiologia e Imunologia
FATORES DE CRESCIMENTO
Biofilme:
▪Raramente os microrganismos 
são encontrados isoladamente
▪Matriz polimérica extracelular
▪Quorum sensing
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Microbiologia e Imunologia
FATORES DE CRESCIMENTO
Biofilme:
▪Quorum sensing:
Sinalização/Comunicação entre 
células no biofilme.
➢Modulação da atividade da 
comunidade microbiana 29
Microbiologia e Imunologia
FATORES DE CRESCIMENTO
Biofilme:
▪Compartilhamento de nutrientes;
▪Resistência a fatores ambientais;
▪Proteção contra antibióticos e 
agentes imunológicos;
▪Transferência de informação genética.
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Microbiologia e Imunologia
FATORES DE CRESCIMENTO
Biofilme:
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Microbiologia e Imunologia
INTRODUÇÃO
Laboratório:
▪Crescimento microbiano
▪Meios de Cultura
Material nutriente para o 
crescimento microbiano
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Microbiologia e Imunologia
Inóculo
INTRODUÇÃO
Meio de Cultura:
▪Nutrientes adequados
▪Água suficiente
▪pH apropriado
▪Temperatura ideal
▪Estéril!
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Microbiologia e Imunologia
INTRODUÇÃO
Meio de Cultura:
▪Meio Sólido
➢ Agar
Polissacarídeo de algas
marinhas
▪Meio Líquido (Caldo)
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Microbiologia e Imunologia
MEIOS DE CULTURA
Meio Quimicamente Definido:
▪Composição Química é Exata e 
Conhecida
MO Fastidiosos:
Muitos nutrientes e fatores de 
crescimento
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Microbiologia e Imunologia
MEIOS DE CULTURA
Meio Complexo:
Nutrientes gerais:
Grande maioria dos 
microrganismos cresce
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Microbiologia e Imunologia
MEIOS DE CULTURA
Meios Seletivos:
 Favorece o crescimento de 
determinadas bactérias
Ex: Ágar Sulfito de Bismuto (Salmonella)
Meios Diferenciais:
 Facilitam a distinção entre colônias
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Microbiologia e Imunologia
MEIOS DE CULTURA
Obtenção de Cultura Pura:
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Microbiologia e Imunologia
MEIOS DE CULTURA
 Preparação:
❖Seguir normas do fabricante!!
Hidratar em pequena quantidade
Esterilizar em autoclave (15min, 121ºC)
Tubos semi-abertos
Esterilizar por filtração (0,22 micra)
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Microbiologia e Imunologia
MEIOS DE CULTURA
 Sabouraud Dextrose:
• Caldo (CSD) ou Agar (ASD)
• Altamente versátil
• Impede desenvolvimento de bactérias
• Pode ser misturado a antimicrobianos
e outros meios
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Microbiologia e Imunologia
MEIOS DE CULTURA
 Brain Heart Infusion (BHI):
• Caldo ou Agar
• Rico em nutrientes
➢ Recuperação
➢ Crescimento
• Pode ser misturado a antimicrobianos
e outros meios
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Microbiologia e Imunologia
MEIOS DE CULTURA
 Agar fubá (Cornmeal agar)
 Agar batata
 Agar arroz
• Pobre em nutrientes
• Identificação diferencial
(Microcultivo)
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Microbiologia e Imunologia
MEIOS DE CULTURA
 CHROMagar
Diferenciação de Candida spp.
• Candida albicans: colônias verdes, lisas
• Candida tropicalis: colônias azuis
• Candida krusei: colônias rosadas, turvas.
• Candida glabrata: colônias bege/creme.
• Candida parapsilosis: colônias rosa lisas.
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Microbiologia e Imunologia
MEIOS DE CULTURA
 Yeast Carbon Base
(Sem nitrogênio)
 Yeast Nitrogen Base
(Sem carboidrato)
Provas bioquímicas
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Microbiologia e Imunologia
MEIOS DE CULTURA
 Meio de Christensen
(Com uréia)
 Agar esculina
Diferenciação de espécies
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Microbiologia e Imunologia
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Crescimento Microbiano:
➢Aumento do número de células
➢Fatores Físicos e Químicos
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Fatores Físicos:
➢Temperatura
➢Psicrófilos
➢Mesófilos
➢Termófilos
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Fatores Físicos:
➢Temperatura
➢Mínima
➢Ótima
➢Máxima
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Fatores Físicos:
➢pH
➢6,5 – 7,5
➢Acidófilas
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Fatores Físicos:
➢Pressão Osmótica
➢Halófilos extremos
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Fatores Químicos:➢Carbono, Nitrogênio, Enxofre e Fósforo
➢Elementos-traço
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Fatores Químicos:
➢Oxigênio
➢Espécies reativas de oxigênio
➢Radicais superóxido
➢Peróxido de hidrogênio
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Fatores Químicos:
➢Oxigênio
➢Aeróbios obrigatórios
➢Anaeróbios facultativos
➢Anaeróbios obrigatórios
➢Anaeróbios aerotolerantes
➢Microaerófilos
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Biofilme:
➢Matriz extracelular
➢Quorum sensing
➢Sobrevivência e proteção
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Meios de Cultura:
➢Nutrientes para crescimento microbiano
➢Meio Sólido (Agar)
➢Meio Líquido (Caldo)
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Meios de Cultura:
➢Quimicamente Definidos
➢Complexos
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Meios de Cultura:
➢Seletivos
➢Diferenciais
REVISÃO
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Microbiologia e Imunologia
Meios de Cultura:
➢Obtenção de Cultura
Pura
➢Esgotamento
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