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PRECIPITAÇÃO POR ÁCIDOS FORTES E METAIS PESADOS 1. Descreva os procedimentos realizado durante a aula, explicando as etapas e quais materiais utilizados. Materiais utilizados: Reagentes: Ácido tricloroacético 20%, Acetato de chumbo, 10% Ovoalbumina 10%.Equipamentos:Pera de borracha, Pipeta, Becker.Tubo para reação do ácido tricloroacético 20% - adicionar 2ml de ovoalbumina 10%, 1ml deácido tricloroacético e observar, a precipitação é imediata. Formam um líquido leitoso branco indicando a precipitação e alguns grumos da proteína pelo ácido. Tubo para reação do metal pesado acetato de chumbo – adicionar 2ml de ovoalbumina 10% e 5 gotas de acetato de chumbo e observar. Observa-se que também houve uma precipitação de forma mais liquida. É possível perceber que além da modificação das cargas iônicas, de tudo isso que a gente tem nas proteínas, um ponto que é importante para a precipitação são algumas estruturas, tipos de elementos químicos que conseguem clivar, quebrar as estruturas da proteína fazendo esse processo de precipitação que pode ser feito com o ácido e também com o metal pesado. 2. Responda as Perguntas: a) Por que a ovoalbunina precipita na presença de ácidos fortes e metais pesados? Porque na presença de ácidos fortes e metais pesados ocorre devido a alterações na sua estrutura tridimensional. Essas substâncias podem causar mudanças no pH e na carga elétrica da proteína, levando-a a se desdobrar e formar agregados insolúveis. b) Explique por que a ovoalbumina torna-se insolúvel após a precipitação. A ovoalbumina torna-se insolúvel devido à alteração em sua estrutura tridimensional. A exposição a ácidos fortes e metais pesados pode levar a mudanças na estrutura secundária e terciária da proteína, desestabilizando suas interações e levando-a a se desdobrar e formar agregados insolúveis. Isso resulta na perda da solubilidade da ovoalbumina, tornando-a incapaz de permanecer em solução e levando à sua precipitação. c) Explique os resultados encontrados no experimento. Formou um líquido leitoso branco indicando a precipitação e alguns grumos da proteína. Anteriormente é visualizado um concentrado de solução, e após a precipitação ele fica todo turvo indicando que houve a precipitação da proteína pelo ácido tricloroacético. Na adição do acetato de chumbo também houve uma precipitação. Porém conseguimos ter mais visibilidade e perceber que no tubo do ácido tricloroacético teve uma precipitação mais intensa, pois o ácido forte tem a capacidade de quebrar as ligações peptídicas da proteína mais do que o chumbo. Na comparação dos tubos temos um material mais leitoso no ácido do que no metal pesado. De toda forma também temos essa percepção em relação a solução inicial e as soluções precipitadas. PRECIPITAÇÃO FRACIONADA POR SOLUÇÕES SALINAS CONCENTRADAS 1. Descreva os procedimentos realizado durante a aula, explicando as etapas e quais materiais utilizados. A proteína é uma biomolécula muito importante. As proteínas são classificadas de acordo com o seu ponto isoelétrico e dependendo do ambiente onde ela está colocada ela interage de forma iônica com alguns compostos e podemos mudar essa concentração iônica de acordo com o adicionamento de sais. Esse adicionamento de sais consegue fazer com que mude a concentração desse ambiente onde está a proteína e consiga dissociar as proteínas de forma a precipita-las. Materiais utilizados: Reagentes: Ovoalbumina 10%; Sulfato de amônia concentrado (solução concentrada de sais, salina, que vai proporcionar a precipitação das proteínas); Água (para padrão negativo). Equipamentos: Pera de borracha; Pipeta; Becker. Tubo A: adicionar 2 ml ovoalbumina, 2 ml de sulfato de amônia concentrada, homogeneizar e observar, a reação é imediata. Assim que adicionada percebemos a formação de um composto leitoso, esbranquiçado que indica precipitação das proteínas. Tubo B: adicionar 2 ml ovoalbumina, sulfato de amônia concentração (não fala a quantidade), água 2 ml, homogeneizar e observar, a reação é imediata. Não teve precipitação, a água interfere na ionização das cargas. Essa prática demonstra a importância do ponto isoelétrico das proteínas bem como o ambiente se é um meio dependendo da carga iônica a qual a proteína é submetida, pode sim, ser separada através de uma concentração salina que irá proporcionar a separação das proteínas que pode ser através de uma coluna de resina, dependendo da coluna de onde for utilizada. É de importante utilização clínica e biológica para de mais funções de onde queira isolar determinada proteína. 2. Responda as Perguntas: a) Explique os conceitos de “Salting out”, “Salting in” e camada de solvatação? “Salting out”: Esse é um processo em que a adição de sais, como sulfato de amônio ou cloreto de sódio, a uma solução aquosa de proteínas pode levar à precipitação das mesmas. Isso ocorre porque os sais diminuem a solubilidade das proteínas na solução, levando-as a se precipitarem. Esse fenômeno é frequentemente utilizado em processos de purificação de proteínas. “Salting in”: Em contraste com o “salting out”, o “salting in” refere-se ao aumento da solubilidade de algumas proteínas em presença de concentrações moderadas de sais. Esse efeito é observado em algumas proteínas que requerem íons específicos para manter sua estrutura nativa e solúvel. Camada de solvatação: Quando uma molécula se dissolve em um solvente, como água, as moléculas do solvente formam uma camada ao redor da molécula dissolvida. Essa camada é chamada de camada de solvatação. Ela é formada pelas interações entre as moléculas do solvente e da substância dissolvida e pode influenciar a solubilidade e a estabilidade da substância. b) Qual o princípio bioquímico do experimento? As proteínas são classificadas de acordo com o seu ponto isoelétrico e dependendo do ambiente onde ela está colocada interage de forma iônica com alguns compostos e podemos mudar essa concentração iônica de acordo com o adicionamento de sais. Esse adicionamento de sais a consegue fazer com que mude a concentração do ambiente onde está a proteína e consiga dissociar as proteínas de forma a precipitá-las. Esse é o intuito da prática onde consiga em uma concentração onde temos vários tipos de proteínas fazer uma separação. c) Explique os resultados encontrados durante o experimento. No tubo A houve precipitação da proteína em concentração salina formando um liquido leitoso esbranquiçado. Já no tubo B com sulfato de amônio não houve a formação da precipitação de proteína. A água interfere na questão iônica das cargas.